急性リンパ芽球性白血病患者由来異種移植マウスモデルを用いたキメラ抗原受容体T細胞関連毒性の評価

このプロトコルは、ヒトCAR-Tおよび腫瘍細胞を利用し、CART19投与に関連する毒性を正確に実証します。したがって、診療所で観察されたことを要約する。このプラットフォームを使用する主な利点は、ヒトT細胞と腫瘍細胞が利用される翻訳可能で臨床的に関連するモデルを提供することです。

このモデルは、CART19に関連する毒性の効率的な評価を可能にするだけでなく、改善された治療戦略を通じてこれらの毒性を克服する方法をよりよく理解することを可能にします。まず、CART19を投与されたマウスを1日2回監視して、運動衰弱、猫背、体重減少などの健康の変化を評価します。マウスが運動衰弱と体重減少を発症したら、末梢血を収集して腫瘍量を分析します。

サイトカインについて血清単離を行い、原稿に記載されているようにする。単離後、血清マイクロ遠心チューブを摂氏80度で保存し、CERAを使用してマルチプレックスアッセイを使用してケモカインとサイトカインを分析します。MRIイメージングでは、120マイクロリットルのガドリニウムと880マイクロリットルの生理食塩水を混合し、1ミリリットルのインスリンシリンジに装填します。

調製した溶液100マイクロリットルを各マウスの腹腔内注射する。マウスを麻酔し、げっ歯類と互換性のあるクレードルプローブに置きます。次に、歯をバイトバーに引っ掛けます。

マウスのヘッドを25ミリメートルの体積コイルに引き込み、イソフルラン麻酔システムにつながれたノーズコーンを調整します。バイトバーのノブを締めて、スキャン中は位置を維持します。呼吸評価は、呼吸監視装置のプローブを横隔膜の近くに取り付け、サージカルテープで固定します。

呼吸数を毎分20〜60回の呼吸に保ち、マウスの状態が安定するようにします。動物プローブを垂直穴小動物MRIシステム内の小口径に挿入し、コイルの中央で動物の頭を調整します。ロックを使用して、装置を直立位置に固定し、機器をコンピューターに接続します。

次に、ParaVisionソフトウェアを開いて、スキャンの位置とスキャンの種類を設定します。すべての実験グループで一貫性を保ちながら、最適な矢状位置と軸位置を決定します。T1 強調 MRI データを収集するには、繰り返し時間が 300 ミリ秒、エコー時間が 9.5 ミリ秒、視野が 4.00 X 2.00 X 2.00 センチメートル、マトリックスが 192 X 96 X 96 の T1 強調マルチスライス、マルチエコー シーケンスを使用します。

T2強調MRI画像の場合は、同様のパラメータを持つマルチスライス、マルチエコーシーケンスを使用します。スキャンが完了したら、プローブをボアから取り外し、バイトバーから歯を外してマウスをそっと抽出します。ソフトウェアからデータを抽出した後、超高強度領域の定量化と3Dボリュームレンダリングのための分析ソフトウェアを使用して、CD19+腫瘍細胞集団を、フローサイトメトリーを使用してCART19で処理したマウスと未処理のマウスの間で比較しました。

有意な体重減少は、CART19細胞で処置したマウスにおいて観察された。体重減少は、CART細胞関連毒性に関連するCRS出現の症状と見なされます。マルチプレックスアッセイにより、CART19投与前後のNSGマウス血清中のサイトカインおよびケモカインの発現が明らかになりました。

T2強調画像は、CART19治療マウスにおける神経炎症中の浮腫および炎症性浸潤の可能性の証拠を明らかにした。一方、T1強調MRIでは脳実質内で造影が亢進し、血管透過性の増加が示されました。げっ歯類の脳の3次元再構成は、脳内のガドリニウム漏出の体積をレンダリングする血管透過性に対応するT1高信号領域に基づいて組み立てられました。

CART19投与後のマウスの毎日の物理的モニタリングは、末梢出血とともに、CRSまたは神経毒性を示す脳の変化を完全に評価するためのMRIを進めるための最良の指標になることを覚えておくことが重要です。この技術は、追加のCAR-T細胞療法に広く適用可能であり、科学者は新しいCAR-T細胞から生じる潜在的な毒性を効率的にテストすることができます。この提案されたモデルは、CAR-T細胞に関連する毒性を監視、治療、および新しいCAR-T細胞モデルを検証するために使用する方法を理解するための足がかりです。