Name: マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-19T13:20:00.000+00:00
Duration: 4 min 4 s
Description: 学ぶマウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径自動測定法。MATLABプログラムを用いて麻酔下のマウスで網膜血管の直径を正確に測定し、遺伝子変異や加齢性網膜疾患の進行をモニタリングする実用的な手法です。

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この研究は、Icelandic Research Fund(217796-052)(A.G.L.)およびHelga Jónsdóttir and Sigurlidi Kristjánsson Memorial Fund(A.G.L and T.E.)からのポスドクフェローシップ助成金によって支援されました。著者らは、マウスを提供してくださったEiríkur Steingrímsson教授に感謝します。

すべての実験は、アイスランド食品獣医局(MASTライセンス番号2108002)によって承認されました。すべての動物実験は、Association for Research in Vision and Ophthalmology(ARVO)の「眼科および視覚研究における動物の使用に関する声明」に従って実施されました。本研究では、雌雄のC57BL/6Jマウスと Mitfmi-vga9/+ マウスを用いた。C57BL/6Jマウス(n=7)を対照として使用した。野生型は商業的に入手されましたが( 資料表を参照)、すべての突然変異マウス(n = 7)はアイスランド大学の生物医学センターの動物施設で飼育および飼育されました。本研究では、生後3か月の動物を使用しました。ただし、このプロトコルは1か月以上の動物にも適用されます。
1. 実験の準備
<ol><li>麻酔混合物を準備します。2 mLのケタミン原液(25 mg / mL)と250 μLのキシラジン原液(2%)のアンプル1つを取り、ケタミン/キシラジン混合物(25 mg / mLケタミンと20 mg / mLキシラジン)の作業溶液を調製します( 材料の表を参照)。</li>
	<li>マウスの体重の 4 倍の量の液体を使用して、ケタミン/キシラジン混合物の腹腔内注射でマウスに麻酔をかけます。たとえば、体重20 gのマウスでは、キシラジン(4 mg / kg体重)とケタミン(40 mg / kg体重)の混合物の作業用量を得るためには、35 μLのキシラジン/ケタミン作業溶液が必要です。</li>
	<li>麻酔直後に10%フェニレフリン塩酸塩と1%トロピカミドの点眼薬で瞳孔を拡張します。</li>
	<li>動物が完全に麻酔され、その瞳孔が広く拡張するまで待ちます。</li>
	<li>フルオレセイン塩溶液を調製します。9 mLのリン酸緩衝生理食塩水(PBS;1x)を1 mLのフルオレセイン溶液(100 mg/mLストック濃度)に加えます( 材料の表を参照)。最終濃度ワーキング溶液は10 mg/mLです。</li>
</ol>2. げっ歯類の網膜イメージングシステムを用いた網膜血管系の in vivo イメージング
<ol><li>麻酔した動物にフルオレセイン作動溶液を腹腔内(5μL / g体重)投与します。.</li>
	<li>角膜表面に2%メチルセルロースゲルを滴下し、次に動物をイメージングシステムの位置決めステージに置きます( 材料の表を参照)。</li>
	<li>網膜イメージング眼底カメラレンズをマウスの角膜に直接優しく触れるように配置します。視神経乳頭を視野の中央に配置するには、位置合わせを少し調整します。</li>
	<li>眼底カメラの緑色蛍光チャンネルに切り替えます。</li>
	<li>網膜血管に焦点を合わせて画像を撮ります。</li>
	<li>理想的な時点を見つけるには、フルオレセイン注射後1分、3分、5分、10分後(ただし10分以内)に多数の写真を撮ります。 注:FA治療は10分以内に完了する必要があります、それ以降はフルオレセインが拡散しすぎて血管が検出されなくなる可能性があるためです。</li>
	<li>イメージングが完了したら、マウスがまだ麻酔をかけられている間に、子宮頸部脱臼によってマウスを安楽死させます。</li>
</ol>3. 網膜血管の直径の解析
<ol><li>MATLAB プログラムを開きます ( 資料の表を参照)。</li>
	<li>「fundusDiameter.m」コードをダウンロードして保存します( 補足コーディングファイル1、補足コーディングファイル2、 補足コーディングファイル3を参照)。</li>
	<li>コードを保存したフォルダを開きます。コードをドラッグして、MATLAB の Current Folder にドロップします。</li>
	<li>FFA画像(眼底、蛍光、血管造影画像)または解析したい画像をMATLABのCurrent Folderにドラッグアンドドロップします。</li>
	<li>MATLAB ツールバーから [実行 ] ツールを押します。</li>
	<li>ポップアップウィンドウが表示されます。目的の画像のファイル名を [ファイル名の入力 ]ボックスに入力し、[ OK]を押します。 注: 残りのパラメータは変更または修正しないでください。</li>
	<li>光ディスクの中心を選択し、次に光ディスクの端を選択します。これで、マウス眼底画像のピクセルの強度を、視円板の中心から時計回りに視円板の半径の2倍で計算します(図1)。</li>
	<li>次に、ソフトウェアが眼底内の各血管の平均血管直径(ピクセル単位)を血管番号の関数としてプロットしていることを確認します(図2)。</li>
	<li>その後、ソフトウェアが各容器の測定データをExcelドキュメントに転送し、これらの値の平均、中央値、および標準偏差が計算されていることを確認します(表1 および 表2)。</li>
	<li>結果テーブルからスプレッドシート プログラムに値を移動するには、テーブル内のすべての値を選択します。値をスプレッドシートに貼り付けます。</li>
	<li>グラフをプロットし、選択したスプレッドシートプログラムに貼り付けたデータを使用して統計分析を実行します( 材料の表を参照)。</li>
</ol>

<ol><li>Cheung, C. Y., Ikram, M. K., Chen, C., Wong, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+retina+to+study+dementia+and+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Imaging retina to study dementia and stroke.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 57, 89-107 (2017).</li>
<li>Selvam, S., Kumar, T., Fruttiger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vasculature+development+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+in+Retinal+and+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Retinal vasculature development in health and disease.</a> Progress in Retinal and Eye Research. 63, 1-19 (2018).</li>
<li>Ma, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+retinal+vessel+attenuation+in+eyes+with+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of retinal vessel attenuation in eyes with retinitis pigmentosa.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (7), 4306-4314 (2012).</li>
<li>Eysteinsson, T., Hardarson, S. H., Bragason, D., Stefansson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinal+vessel+oxygen+saturation+and+vessel+diameter+in+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Retinal vessel oxygen saturation and vessel diameter in retinitis pigmentosa.</a> Acta Ophthalmologica. 92 (5), 449-453 (2014).</li>
<li>Al-Latayfeh, M., Silva, P. S., Sun, J. K., Aiello, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antiangiogenic+therapy+for+ischemic+retinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Perspectives+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Antiangiogenic therapy for ischemic retinopathies.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (6), 006411(2012).</li>
<li>Wang, S., Villegas-Perez, M. P., Vidal-Sanz, M., Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+optic+axon+dystrophy+and+vacuslar+changes+in+rd+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Progressive optic axon dystrophy and vacuslar changes in rd mice.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (2), 537-545 (2000).</li>
<li>Liu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Photoreceptor+cells+influence+retinal+vascular+degeneration+in+mouse+models+of+retinal+degeneration+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Photoreceptor cells influence retinal vascular degeneration in mouse models of retinal degeneration and diabetes.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 57 (10), 4272-4281 (2016).</li>
<li>Steingrimsson, E., Copeland, N. G., Jenkins, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocytes+and+the+microphthalmia+transcription+factor+network%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Genetics%22%5BJournal%5D)">Melanocytes and the microphthalmia transcription factor network.</a> Annual Review of Genetics. 38, 365-411 (2004).</li>
<li>Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+discovery+of+the+microphthalmia+locus+and+its+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Mitf.+Pigment+Cell+%26+Melanoma+Research%22%5BJournal%5D)">The discovery of the microphthalmia locus and its gene.</a> Mitf. Pigment Cell & Melanoma Research. 23 (6), 729-735 (2010).</li>
<li>Garcia-Llorca, A., Aspelund, S. G., Ogmundsdottir, M. H., Steingrimsson, E., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+gene+and+its+role+in+regulating+eye+function%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">The microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) gene and its role in regulating eye function.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15386(2019).</li>
<li>Bharti, K., Liu, W., Csermely, T., Bertuzzi, S., Arnheiter, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+promoter+use+in+eye+development%3A+the+complex+role+and+regulation+of+the+transcription+factor+MITF%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Alternative promoter use in eye development: the complex role and regulation of the transcription factor MITF.</a> Development. 135 (6), 1169-1178 (2008).</li>
<li>Lu, S. Y., Li, M., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+induction+by+RANKL+is+critical+for+osteoclastogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+of+the+Cell%22%5BJournal%5D)">Mitf induction by RANKL is critical for osteoclastogenesis.</a> Molecular Biology of the Cell. 21 (10), 1763-1771 (2010).</li>
<li>Pillaiyar, T., Manickam, M., Jung, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+development+of+signaling+pathways+inhibitors+of+melanogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Signalling%22%5BJournal%5D)">Recent development of signaling pathways inhibitors of melanogenesis.</a> Cellular Signalling. 40, 99-115 (2017).</li>
<li>Danielsson, S. B., Garcia-Llorca, A., Reynisson, H., Eysteinsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+microphthalmia-associated+transcription+factor+%28Mitf%29+mutations+affect+the+structure+of+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Ophthalmologica%22%5BJournal%5D)">Mouse microphthalmia-associated transcription factor (Mitf) mutations affect the structure of the retinal vasculature.</a> Acta Ophthalmologica. 100 (8), 911-918 (2022).</li>
<li>Burns, S. A., Elsner, A. E., Gast, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+the+retinal+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Vision+Science%22%5BJournal%5D)">Imaging the retinal vasculature.</a> Annual Review of Vision Science. 7, 129-153 (2021).</li>
<li>Wei, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+vessel+diameter+quantification+and+vessel+tracing+for+OCT+angiography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biophotonics%22%5BJournal%5D)">Automated vessel diameter quantification and vessel tracing for OCT angiography.</a> Journal of Biophotonics. 13 (12), e202000248(2020).</li>
<li>Salas, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compact+akinetic+swept+source+optical+coherence+tomography+angiography+at+1060+nm+supporting+a+wide+field+of+view+and+adaptive+optics+imaging+modes+of+the+posterior+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Compact akinetic swept source optical coherence tomography angiography at 1060 nm supporting a wide field of view and adaptive optics imaging modes of the posterior eye.</a> Biomedical Optics Express. 9 (4), 1871-1892 (2018).</li>
<li>Albanna, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+evaluation+of+neurovascular+coupling+in+the+murine+retina+by+dynamic+retinal+vessel+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Non-invasive evaluation of neurovascular coupling in the murine retina by dynamic retinal vessel analysis.</a> PLoS One. 13 (10), e0204689(2018).</li>
<li>Moult, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluating+anesthetic+protocols+for+functional+blood+flow+imaging+in+the+rat+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Optics%22%5BJournal%5D)">Evaluating anesthetic protocols for functional blood flow imaging in the rat eye.</a> Journal of Biomedical Optics. 22 (1), 16005(2017).</li>
</ol>

著者らは、競合する利益は存在しないと宣言します。

本論文は、マウスFA画像から網膜血管径と網膜血管系を解析する方法を初めて紹介したものです。網膜血管系の画像をキャプチャするために眼底イメージングのみが利用されたため、この方法にはいくつかの欠点があり、そのうちの1つは、この研究で調べたマウスの網膜血管系の表層の変化のみを推測できることです。より深い層の違いはまだ不明です。 
血管の自動トレースと血管径を用いた独自の光干渉断層撮影血管造影法(OCTA)画像解析法が発表された16。ただし、この方法では、個々の毛細血管を含む血液動脈の直径を定量的に特性評価するための自動フレームワークの基礎である、勾配ガイドによる最小半径距離(MRD)測定が必要です。さらに、OCTシステムは横方向の分解能が限られているため、小さな毛細血管のサイズはおそらくある程度誇張されています16。この方法にはFAが必要であり、FAは網膜および脈絡膜血管系のはるかに広い領域を捕捉することができる17。Dynamic Vessel...

おそらく、体内で最も研究されている血管床は網膜血管系です。ますます進歩する技術の洗練により、網膜血管系は生きている患者で簡単に撮影され、多くの研究分野で使用されています1。さらに、発生中のマウス網膜血管系は、血管成長の基礎生物学の研究に非常に効果的なモデルシステムであることが証明されています。網膜血管系の主な目的は、神経組織2を透過する層状毛細血管網を通して、網膜の内側部分に代謝サポートを提供することである。それにもかかわらず、網膜の状態、ひいては機能障害や萎縮は、網膜血管系の分岐部と動脈の直径の両方に重大な影響を与える可能性があり、網膜細胞と血管系3,4との間の相互作用を示しています。未熟児網膜症(ROP)、糖尿病性網膜症(DR)、加齢黄斑変性症(AMD)、緑内障、角膜血管新生など、多くの眼疾患が異常な眼血管新生を引き起こすことが知られています5。網膜血管系の場合、網膜変性のマウスモデルは、ヒトの血管疾患に見られるものに匹敵する変化を示すことがよくあります6,7。基本的なヘリックス-ループ-ヘリックス-ジッパー転写因子のMycスーパージーンファミリーには、網膜色素上皮(RPE)8,9,10で発現する小眼球症関連転写因子(Mitf)遺伝子が含まれる。
目、耳、免疫系、中枢神経系、腎臓、骨、皮膚など、数多くの臓器がMitf 9,11,12,13によって調節されていることが実証されています。 私たちは、Mitf遺伝子にさまざまな変異を持つマウスでは、RPEの構造と機能が影響を受け、網膜変性症のいくつかのケースを引き起こし、最終的には視力喪失をもたらすことを発見しました10。最近、Mitf変異体マウスと野生型マウスとでは、血管数と血管径が有意に異なることが示されている14。研究者や医師は、網膜イメージングの進展により、in vivoで網膜血管系を正確に定量できるようになりました。1800年代以降、研究者や医師は網膜血管系を視覚化する利点を利用しており、フルオレセイン血管造影法(FA)は網膜血流と血液網膜関門の劣化の両方を示している15。
この記事では、MATLAB ソフトウェアでカスタム記述されたコードを使用して、マウスの FA 画像から網膜血管の直径を解析する方法を示します。

<table><tbody><tr><td>1% トロピカミド(ミドリアシル)</td><td>Alcon Inc Laboratories</td><td></td><td>散瞳剤</td></tr><tr><td>2% メトセル</td><td>OmniVision Eye Care</td><td></td><td>ヒドロキシプロプリル メチルセルロースゲル</td></tr><tr><td>C57BL/6J</td><td>ジャクソン研究所</td><td>000664</td><td>野生型マウス</td></tr><tr><td>Excel for Microsoft 365</td><td>Microsoft Inc</td><td></td><td>ソフトウェアパッケージ</td></tr><tr><td>フルオレセインナトリウム塩</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>28803-100G</td><td>蛍光血管造影</td></tr><tr><td>Matlab 8.0</td><td>The MathWorks, Inc.</td><td></td><td>ソフトウェアパッケージ</td></tr><tr><td>Micron IVげっ歯類眼底カメラ</td><td>フェニックスミクロン</td><td>40-2200</td><td>眼底写真</td></tr><tr><td>フェニレフリン10% w / v</td><td>Bausch&Lomb</td><td></td><td>Mydriatic薬剤</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline - 100 tablets</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>Dilution</td></tr><tr><td>Sigmaplot 13</td><td>Jandel Scientific Software</td><td></td><td>Software Software Package</td></tr><tr><td>S-Ketamine, 25 mg/mL</td><td>Pfizer Inc.</td><td>PAA104470</td><td>麻酔IP</td></tr></tbody></table>

マウス蛍光血管造影画像からの網膜血管径の測定

Measuring Retinal Vessel Diameter from Mouse Fluorescent Angiography Images

網膜症における網膜血管系の発達を研究することは重要であり、異常な血管の成長は最終的に視力喪失につながる可能性があります。小眼球症関連転写因子(Mitf)遺伝子の変異は、色素沈着低下、小眼球症、網膜変性、場合によっては失明を示します。非侵襲的手段によるマウス網膜の in vivo イメージングは、眼の研究に不可欠です。しかし、マウス眼底のイメージングはサイズが小さいため難しく、専用のツールやメンテナンス、トレーニングが必要になることがあります。本研究では、MATLABで書かれた自動プログラムを用いてマウスの網膜血管径を解析できる独自のソフトウェアを開発しました。眼底写真は、フルオレセイン塩溶液の腹腔内注射後、市販の眼底カメラシステムで取得されました。画像はコントラストを高めるために変更され、MATLABプログラムでは、視神経乳頭から事前に定義された距離で平均血管径を自動的に抽出することが許可されました。血管の変化は、野生型マウスおよび Mitf 遺伝子に種々の変異を有するマウスにおいて、網膜血管径を解析することにより調べた。ここで開発されたカスタムメイドのMATLABプログラムは、実用的で使いやすく、研究者はマウスの網膜血管系の平均直径と平均全径、および血管数を便利かつ確実に解析できます。

図1は、網膜血管系の解析に用いたプロセスを示しており、これを試験したすべてのマウスのマウスFFA画像に適用しています。光ディスクの 2 倍の半径を使用して、光ディスクの中心から時計回りに円を描くピクセルの強度を測定します。ピクセルは、ユーザー指定のしきい値より上と下のポイントをそれぞれ横切ると、開始点または終了点でマークされます。これを30回繰り返し、そのたびに視神経乳頭の中心から少し離れていきます。FFA画像は、フルオレセイン注射の5分後に撮影されます(図1A および 図1B)。次に、解析ソフトウェアは、関連する30のエンドポイントのそれぞれと各スタートポイントの間の最短ルートを計算します。この処理の結果は、ポイントとそれらの間に白い線で表される測定値を持つ図です。対照マウスおよび Mitf 変異マウスからのそのような画像の例は、それぞれ 図1A および <strong class...

マウス網膜血管系は、血管パターン形成のメカニズムを理解する上で特に興味深いものです。このプロトコルは、視神経乳頭から一定の距離にある蛍光血管造影眼底画像からマウス網膜血管の直径を自動的に測定します。

It is important to study the development of retinal vasculature in retinopathies in which abnormal vessel growth can ultimately lead to vision loss. ...

このプロトコルは、遺伝子変異または網膜疾患による麻酔マウスの網膜血管の直径を自動的に測定するための簡単で信頼性の高い方法を提供します。この手法の主な利点は、ここでカスタム作成されたMATLABプログラムが実用的で、使いやすく、便利で信頼性が高いことです。網膜血管の直径の変化は、RPやその他の網膜血管の状態などの変性疾患で一般的に発生します。マウスモデルは、治療効果と網膜血管への影響に関する洞察を提供します。この方法は、眼の血管障害の進行に続く定量化可能な臨床マーカーとして、また潜在的な治療法のモニタリングに潜在的に有用である可能性があります。まず、フルオレセイン作業溶液を含む注射器を調製し、麻酔をかけた動物に腹腔内に投与し、角膜表面に2%メチルセルロースゲルを一滴塗布します。次に、動物をイメージングシステムの位置決めステージに置きます。網膜イメージング眼底カメラのレンズをマウスの角膜に直接優しく触れるように配置し、視神経乳頭が視野の中央に配置されるように位置合わせを少し調整します。次に、眼底カメラの緑色の蛍光チャネルに切り替え、網膜血管に焦点を合わせて画像を撮影します。フルオレセイン注入後の所望の時点で画像を撮影し、理想的な時点を決定し、フルオレセイン眼底画像を可視化します。まず、MATLABプログラムを開きます。次に、眼底直径をダウンロードして保存します。FFA 画像を画像分析フォルダーにドラッグ アンド ドロップします。MATLAB プログラムで、コード ファイルを 2 回クリックしてアクティブにします。[実行] オプションを選択します。画像を選択するポップアップメニューが表示されます。画像を選択すると、分析パラメータのポップアップメニューが画面に表示されます。ポップアップメニューで解析パラメータを設定し、OKを押します。光ディスクの中心を選択し、次に光ディスクの端を選択します。解析はバックグラウンドで行われ、解析結果が画面に表示されます。この表には、各容器の平均値、標準偏差、および標準誤差の値が含まれています。テーブルを保存します。次に、平均厚さを設定した図を保存します。保存したファイルのある解析フォルダを開き、保存した図を開きます。保存したテーブルを開き、値をコピーして Excel ファイルに貼り付けます。フルオレセイン注入後、コントロールマウスとMITFMI-VGA9/変異マウスの画像を取得し、視神経乳頭の中心から血管の終点までの距離を時計回りに最短距離を測定しました。平均血管径は、野生型マウスおよび変異型マウスの血管数の関数として求められました。覚えておくべき最も重要なことは、眼底カメラの位置と眼底画像内の視神経乳頭の中央揃えです。この技術に加えて、新薬を探索し、眼のさまざまな血管状態を診断し、網膜血管系の機能をよりよく理解するために、分子技術を実行することができます。

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