Name: 塩化第二鉄誘発動脈血栓症および3D電子顕微鏡分析のためのサンプル収集 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-17T13:45:00.000+00:00
Duration: 3 min 57 s
Description: 学ぶFeCl₃誘発動脈血栓症のサンプル収集と3D電子顕微鏡分析。血小板と止血系の構成要素を特定し、血栓の構造的変化を可視化する再現性のある手法です。

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著者は、この原稿を注意深く熟読してくれたホワイトハート研究所のメンバーに感謝します。この作業は、NIH、NHLBI(HL56652、HL138179、およびHL150818)からの助成金、およびSWWへの退役軍人省功労賞、BSへのR01HL 155519、およびR.D.L.へのNIBIB学内プログラム助成金によってサポートされました。

<ol><li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010%3A+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2010%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2012).</li>
<li>Raskob, G. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombosis%3A+a+major+contributor+to+global+disease+burden%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Thrombosis: a major contributor to global disease burden.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (11), 2363-2371 (2014).</li>
<li>Walton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lead+aspartate%2C+an+en+bloc+contrast+stain+particularly+useful+for+ultrastructural+enzymology%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Lead aspartate, an en bloc contrast stain particularly useful for ultrastructural enzymology.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 27 (10), 1337-1342 (1979).</li>
<li>Palta, S., Saroa, R., Palta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+the+coagulation+system%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+Journal+of+Anaesthesia%22%5BJournal%5D)">Overview of the coagulation system.</a> Indian Journal of Anaesthesia. 58 (5), 515-523 (2014).</li>
<li>Joshi, S., Whiteheart, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+nuts+and+bolts+of+the+platelet+release+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">The nuts and bolts of the platelet release reaction.</a> Platelets. 28 (2), 129-137 (2017).</li>
<li>Periayah, M. H., Halim, A. S., Mat Saad, A. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+action+of+platelets+and+crucial+blood+coagulation+pathways+in+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Hematology-Oncology+and+Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanism action of platelets and crucial blood coagulation pathways in hemostasis.</a> International Journal of Hematology-Oncology and Stem Cell Research. 11 (4), 319-327 (2017).</li>
<li>Alexopoulos, D., Katogiannis, K., Sfantou, D., Lekakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combination+antiplatelet+treatment+in+coronary+artery+disease+patients%3A+A+necessary+evil+or+an+overzealous+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Platelets%22%5BJournal%5D)">Combination antiplatelet treatment in coronary artery disease patients: A necessary evil or an overzealous practice.</a> Platelets. 29 (3), 228-237 (2018).</li>
<li>Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+model+of+arterial+thrombosis+induced+by+ferric+chloride%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride.</a> Thrombosis Research. 60 (4), 269-280 (1990).</li>
<li>Denis, C. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+standardization+of+in+vivo+thrombosis+studies+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Towards standardization of in vivo thrombosis studies in mice.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 9 (8), 1641-1644 (2011).</li>
<li>Marsh Lyle, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+thrombin+inhibitor+efficacy+in+a+novel+rabbit+model+of+simultaneous+arterial+and+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">Assessment of thrombin inhibitor efficacy in a novel rabbit model of simultaneous arterial and venous thrombosis.</a> Thrombosis and Haemostasis. 79 (3), 656-662 (1998).</li>
<li>Kato, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+arterial+thrombosis+by+a+protease-activated+receptor+1+antagonist%2C+FR171113%2C+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of arterial thrombosis by a protease-activated receptor 1 antagonist, FR171113, in the guinea pig.</a> European Journal of Pharmacology. 473 (2-3), 163-169 (2003).</li>
<li>Huttinger, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+canine+carotid+artery+thrombosis%3A+a+large+animal+model+of+vascular+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced canine carotid artery thrombosis: a large animal model of vascular injury.</a> Journal of Visualized Experiments. (139), e57981(2018).</li>
<li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombotic+therapy+by+regulating+the+ROS-mediated+thrombosis+microenvironment+and+specific+nonpharmaceutical+thrombolysis+Using+Prussian+blue+nanodroplets%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Antithrombotic therapy by regulating the ROS-mediated thrombosis microenvironment and specific nonpharmaceutical thrombolysis Using Prussian blue nanodroplets.</a> Small. 18 (15), 2106252(2022).</li>
<li>Liu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+membrane+cloaked+nanotubes+to+accelerate+thrombolysis+by+thrombus+clot-targeting+and+penetration%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Platelet membrane cloaked nanotubes to accelerate thrombolysis by thrombus clot-targeting and penetration.</a> Small. , 2205260(2022).</li>
<li>Refaat, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+light-responsive+liposomes+for+protein+delivery%3A+Towards+bleeding-free+photothermally-assisted+thrombolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Near-infrared light-responsive liposomes for protein delivery: Towards bleeding-free photothermally-assisted thrombolysis.</a> Journal of Controlled Release. 337, 212-223 (2021).</li>
<li>Li, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+nanoplatelets+to+target+delivery+hirudin+for+site-specific+photothermal%2Fphotodynamic+thrombolysis+and+preventing+venous+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Small%22%5BJournal%5D)">Biomimetic nanoplatelets to target delivery hirudin for site-specific photothermal/photodynamic thrombolysis and preventing venous thrombus formation.</a> Small. 18 (51), 2203184(2022).</li>
<li>Subramaniam, S., Kanse, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced arterial thrombosis in mice.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 4 (4), 151-164 (2014).</li>
<li>Cocchiaro, J. L., Kumar, Y., Fischer, E. R., Hackstadt, T., Valdivia, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoplasmic+lipid+droplets+are+translocated+into+the+lumen+of+the+Chlamydia+trachomatis+parasitophorous+vacuole%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Cytoplasmic lipid droplets are translocated into the lumen of the Chlamydia trachomatis parasitophorous vacuole.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (27), 9379-9384 (2008).</li>
<li>Kaplan, E. L., Meier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonparametric-estimation+from+incomplete+observations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Statistical+Association%22%5BJournal%5D)">Nonparametric-estimation from incomplete observations.</a> Journal of the American Statistical Association. 53 (282), 457-481 (1958).</li>
<li>Chauhan, A. K., Kisucka, J., Lamb, C. B., Bergmeier, W., Wagner, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((von+Willebrand+factor+and+factor+VIII+are+independently+required+to+form+stable+occlusive+thrombi+in+injured+veins%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">von Willebrand factor and factor VIII are independently required to form stable occlusive thrombi in injured veins.</a> Blood. 109 (6), 2424-2429 (2007).</li>
<li>Andre, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD40L+stabilizes+arterial+thrombi+by+a+beta3+integrin--dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">CD40L stabilizes arterial thrombi by a beta3 integrin--dependent mechanism.</a> Nature Medicine. 8 (3), 247-252 (2002).</li>
<li>Ni, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+platelet+thrombus+formation+in+arterioles+of+mice+lacking+both+von+Willebrand+factor+and+fibrinogen%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Persistence of platelet thrombus formation in arterioles of mice lacking both von Willebrand factor and fibrinogen.</a> Journal of Clinical Investigation. 106 (3), 385-392 (2000).</li>
<li>Bergmeier, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+platelet+adhesion+receptor+GPIbalpha+far+exceeds+that+of+its+main+ligand%2C+von+Willebrand+factor%2C+in+arterial+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The role of platelet adhesion receptor GPIbalpha far exceeds that of its main ligand, von Willebrand factor, in arterial thrombosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103 (45), 16900-16905 (2006).</li>
<li>Ciciliano, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolving+the+multifaceted+mechanisms+of+the+ferric+chloride+thrombosis+model+using+an+interdisciplinary+microfluidic+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Resolving the multifaceted mechanisms of the ferric chloride thrombosis model using an interdisciplinary microfluidic approach.</a> Blood. 126 (6), 817-824 (2015).</li>
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<li>Shim, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+ferric+chloride-induced+arterial+thrombosis+model+of+mice+and+the+role+of+red+blood+cells+in+thrombosis+acceleration%5BTitle%5D)+AND+%22Yonsei+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">Characterization of ferric chloride-induced arterial thrombosis model of mice and the role of red blood cells in thrombosis acceleration.</a> Yonsei Medical Journal. 62 (11), 1032-1041 (2021).</li>
<li>Ghosh, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+prothrombotic+potential+of+four-factor+prothrombin+complex+concentrate+%284F-PCC%29+in+animal+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the prothrombotic potential of four-factor prothrombin complex concentrate (4F-PCC) in animal models.</a> PLoS One. 16 (10), 0258192(2021).</li>
<li>Wilbs, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+peptide+FXII+inhibitor+provides+safe+anticoagulation+in+a+thrombosis+model+and+in+artificial+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Cyclic peptide FXII inhibitor provides safe anticoagulation in a thrombosis model and in artificial lungs.</a> Nature Communications. 11 (1), 3890(2020).</li>
<li>Wei, Y., Deng, X., Sheng, G., Guo, X. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+cerebral+venous+sinus+thrombosis+established+by+ferric+chloride+and+thrombin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of cerebral venous sinus thrombosis established by ferric chloride and thrombin injection.</a> Neuroscience Letters. 662, 205-212 (2018).</li>
<li>Jacob-Ferreira, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithrombotic+activity+of+Batroxase%2C+a+metalloprotease+from+Bothrops+atrox+venom%2C+in+a+model+of+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Biological+Macromolecules%22%5BJournal%5D)">Antithrombotic activity of Batroxase, a metalloprotease from Bothrops atrox venom, in a model of venous thrombosis.</a> International Journal of Biological Macromolecules. 95, 263-267 (2017).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rabbit+model+of+cerebral+microembolic+signals+for+translational+research%3A+preclinical+validation+for+aspirin+and+clopidogrel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thrombosis+and+Haemostasis%22%5BJournal%5D)">A rabbit model of cerebral microembolic signals for translational research: preclinical validation for aspirin and clopidogrel.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 14 (9), 1855-1866 (2016).</li>
<li>Yang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+evodiamine+on+collagen-induced+platelet+activation+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">Effect of evodiamine on collagen-induced platelet activation and thrombosis.</a> BioMed Research International. 2022, 4893859(2022).</li>
<li>Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+carotid+arterial+injury%3A+A+model+of+redox+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Redox+Biology%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology.</a> Redox Biology. 1 (1), 50-55 (2013).</li>
<li>Li, W., Nieman, M., Sen Gupta, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ferric+chloride-induced+murine+thrombosis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Ferric chloride-induced murine thrombosis models.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), e54479(2016).</li>
<li>Holly, S. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ether+lipid+metabolism+by+AADACL1+regulates+platelet+function+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Advances%22%5BJournal%5D)">Ether lipid metabolism by AADACL1 regulates platelet function and thrombosis.</a> Blood Advances. 3 (22), 3818-3828 (2019).</li>
<li>Bird, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+the+therapeutic+index+of+marketed+anti-coagulants+and+anti-platelet+agents+by+guinea+pig+models+of+thrombosis+and+hemostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Thrombosis+Research%22%5BJournal%5D)">Prediction of the therapeutic index of marketed anti-coagulants and anti-platelet agents by guinea pig models of thrombosis and hemostasis.</a> Thrombosis Research. 123 (1), 146-158 (2008).</li>
</ol>

著者らは、この研究に関連する利益相反はありません。
ORCID プロファイル: SJ: 0000-0001-6925-2116;SWW:00000-0001-5577-0473。

血栓症を誘発するための血管系へのFeCl3の局所適用は広く使用されている技術であり、さまざまな血小板受容体、リガンドシグナル伝達経路、およびそれらの阻害剤の役割を確立するのに役立ちました20、21、22、23。FeCl3が血栓症を引き起こすメカニズムは多面的です。以前は、内皮露出が血栓症の原因と考えられていましたが、近年、このプロセスにおける赤血球と血漿タンパク質の役割が複数の報告で示唆されています24,25,26,27。
このプロ...

血栓症は、血管を部分的または完全に遮断し、血液の自然な流れを妨げる血栓の形成です。これは、虚血性心疾患や脳卒中などの重度で致命的な心血管イベントにつながります。心血管疾患は罹患率と死亡率の主な原因であり、世界中で4人に1人が死亡しています1,2,3。血栓症は血管系の機能不全として現れますが、根本的な微生物またはウイルス感染、免疫障害、悪性腫瘍、または代謝状態の結果である可能性があります。血流は、内皮細胞、赤血球/白血球、血小板、凝固因子など、血管系の多様な構成要素間の複雑な相互作用によって維持されています4。血管損傷を受けると、血小板は内皮下マトリックス上の接着タンパク質と相互作用し、それらの顆粒内容物を放出し、より多くの血小板を動員します5。同時に、凝固カスケードが活性化され、フィブリンの形成と沈着につながります。最終的に、血餅が形成され、フィブリンメッシュ6内に閉じ込められた血小板および赤血球を含む。血栓症を調節するために抗血小板薬と抗凝固薬が利用可能であるが、偽の出血は依然としてこれらの治療法の主要な懸念事項であり、これらの薬の投与量と組み合わせの微調整が必要である。したがって、新しい抗血栓薬を発見することが依然として緊急に必要です7。
血栓症は、血管損傷を与えるために複数の方法を使用して研究されています:機械的(血管結紮)、熱的(レーザー損傷)、および化学的損傷(FeCl3 /ローズベンガルアプリケーション)。血栓症の性質は、損傷の場所(動脈対静脈)、方法、または程度によって異なります。これらすべてのタイプの中で、FeCl3誘発血管損傷が最も広く使用されている方法です。マウス、ラット、ウサギ、モルモット、イヌ8、9、10、11、12に採用されています。この方法は比較的簡単で使いやすく、主要なパラメータが標準化されていれば、さまざまな血管系(動脈[頸動脈および大腿骨]、静脈[頸静脈]、細動脈[火葬場および腸間膜]など)で感度と再現性があります(補足表1)。
このモデルは、血餅形成の力学と形態の理解を深めるためにも使用できます。この技術は、血栓症が閉塞する前にプロセスの中間段階を研究するために、さまざまな流速ポイントで血栓症を止めるという独自の利点を提供します。血栓症研究における最近の進歩は、このモデルを使用して、血栓溶解の非薬理学的方法13または抗血栓薬および/または線維素溶解剤の非侵襲的送達に注意を向けている14,15。いくつかのグループは、血小板膜がこれらの治療薬でコーティングされている場合、標的凝血塊への熱刺激により薬物を活性化できることを示した16。ここで説明する手法は、単一血小板レベルでの所見の検証などの研究に役立ちます。この原稿では、プロトコル1は基本的なFeCl3媒介血管損傷手順を説明し、プロトコル2は電子顕微鏡によるさらなる分析のために血管損傷サンプルを収集して固定する方法を説明しています。

<table><tbody><tr><td>0.9%生理食塩水&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>BP358-212</td><td>NaClは0.9%生理食塩水の溶液を作るのに使用されました&nbsp;</td></tr><tr><td>1 mLシリンジ&nbsp;</td><td>ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー&nbsp;</td><td></td><td></td>309659</tr><tr><td>190プルーフエタノール&nbsp;</td><td>コプテック</td><td>V1101&nbsp;</td><td>マウスの手術準備に使用する70%エタノール溶液の作製に使用&nbsp;</td></tr><tr><td>2,2,2 トリブロモエタノール</td><td>Sigma Aldrich</td><td>48402</td><td></td></tr><tr><td>25 ヤード ブラック ブレイド シルク縫合糸 (5-0)</td><td>DEKNATEL</td><td>136082-1204</td><td></td></tr><tr><td>26G x 3/8 針&nbsp;</td><td>ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー&nbsp;</td><td>305110</td><td></td></tr><tr><td>2-メチル-2-ブタノール</td><td>Sigma Aldrich</td><td>240486</td><td></td></tr><tr><td>7.5 mL トランスファー ピペット 3 mL Globe</td><td>Scientific Inc.</td><td>135010</td><td></td></tr><tr><td>アルコール調製パッド(70%イソプロピルアルコール)</td><td>メドライン</td><td>MDS090735</td><td></td></tr><tr><td>アラルダイトGY 502&nbsp;</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>10900</td><td></td></tr><tr><td>細胞培養皿 35mm x 10mm&nbsp;</td><td>コーニングインコーポレイティッド&nbsp;</td><td></td><td></td>430165</tr><tr><td>コンパクトスケール&nbsp;</td><td>ウォードの科学&nbsp;</td><td>470314-390</td><td></td></tr><tr><td>解剖ハサミ、長さ12.5 cm</td><td>、World Precision Instrument</td><td>15922-G</td><td></td></tr><tr><td>DMP-30アクチベーター&nbsp;</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>13600</td><td></td></tr><tr><td>無水物コハク酸ドデニル/ DDSA</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>13700</td><td></td></tr><tr><td>犬用うんち袋・動物死体処理袋</td><td>クラウン製品&nbsp;</td><td>PP-RB-200</td><td></td></tr><tr><td>ドップラーフロープローブ</td><td>Transonic Systems Inc.</td><td>MA0.5PSB</td><td></td></tr><tr><td>EMBED 812樹脂&nbsp;</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>14900</td><td></td></tr><tr><td>エチルアルコール、無水200プルーフ&nbsp;</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>15055</td><td></td></tr><tr><td>アイドレッシング鉗子、4インチ全湾曲、標準、0.8mm幅のヒント</td><td>インテグラミルテックス</td><td>18-784</td><td></td></tr><tr><td>フィルターペーパー&nbsp;</td><td>VWR</td><td>28310-106</td><td></td></tr><tr><td>ファインハサミ - シャープ-ブラント</td><td>ファインサイエンスツール&nbsp;</td><td>14028-10</td><td></td></tr><tr><td>フィンガーループイヤーパンチ&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール&nbsp;</td><td>24212-01</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼスポンジ2 "x 2"&ndash; 12プライ&nbsp;</td><td>Dukal Corporation</td><td>2128</td><td></td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド(10%溶液)</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>16120</td><td></td></tr><tr><td>インテグラ ミルテックス 炭素鋼 サージカル ブレード #10</td><td>インテグラ&reg;ミルテックス&reg;</td><td>4110</td><td></td></tr>塩化<tr><td>鉄(III)&nbsp;</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>157740-100G</td><td></td></tr><tr><td>ナイフハンドル ミルテックス&reg;極細ステンレス サイズ3</td><td>インテグラライフサイエンス&nbsp;</td><td>157510</td><td></td></tr><tr><td>L-アスパラギン酸</td><td>シグマ&nbsp;フィッシャー</td><td>&nbsp;A93100</td><td></td></tr><tr><td>L-アスパラギン酸</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>BP374-100</td><td></td></tr><tr><td>硝酸鉛&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>L-62</td><td></td></tr><tr><td>ライカ S8AP0 マイクロスコープ</td><td>ライカ</td><td>販売終了</td><td></td></tr><tr><td>ライカ S8AP0 マイクロスコープスタンド&nbsp;</td><td>ライカ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10447255 Light-Duty Tissue Wipers社からの販売を終了しました&nbsp;</td><td>VWR</td><td>82003-822</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ解剖鉗子;1x2歯、フルカーブ;0.8mm先端幅;4インチ長さ</td><td>Roboz Surgical Instrument Company</td><td>RS-5157</td><td></td></tr>四<tr><td>酸化オスミウム4%水溶液&nbsp;</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>19150</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド(16%溶液)</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>フェリシアン化カリウム</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>P-8131</td><td></td></tr><tr><td>プロピレンオキシド、ACS試薬&nbsp;</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>20401</td><td></td></tr><tr><td>レイニン クラシック ピペット PR-10</td><td>レイニン</td><td>17008649</td><td></td></tr><tr><td>研究用流量計&nbsp;</td><td>Transonic Systems株式会社</td><td>T402B01481</td><td>モデル:T402</td></tr><tr><td>スコッチマジックインビジブルテープ、3/4 "x 1000"、クリア</td><td>スコッチ&nbsp;</td><td></td><td></td>305289</tr><tr><td>小動物用ヒーテッドパッド</td><td>K&株式会社Hマニュファクチャリング</td><td>モデル:HM10</td><td></td></tr>カ<tr><td>コジル酸ナトリウムバッファー0.2M、pH7.4</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>11623</td><td></td></tr>滅菌<tr><td>綿先端アプリケーター&nbsp;</td><td>ピューリタンメディカルプロダクツ&nbsp;</td><td>25-806 1WC</td><td></td></tr><tr><td>Steromaster イルミネーター&nbsp;</td><td>フィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>12-562-21</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Dumont #7 Forceps&nbsp;</td><td>ファインサイエンスツール&nbsp;</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>チオカルボヒドラジド (TCH)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>88535</td><td></td></tr><tr><td>ユニバーサル低保持ピペットチップリロード (0.1-10 &micro;L)</td><td>VWR</td><td>76323-394</td><td></td></tr><tr><td>酢酸ウラニル</td><td>電子顕微鏡サービス&nbsp;</td><td>22400</td><td></td></tr><tr><td>ヴィート ジェル クリーム ヘア リムーバー</td><td>レキット ベンキーザー</td><td>3116875</td><td></td></tr><tr><td>ホワイト 帯電防止 六角形 計量ボート ミディアム 64 x 15 x 19 mm</td><td>フィッシャー サイエンティフィック&nbsp;</td><td>S38975</td><td></td></tr><tr>Windows <td>DATAQ Instruments, Inc.</td><td>用WinDAQ/100ソフトウェア</td><td>バージョン3.38</td><td>無料でダウンロード可能</td></tr> <tr><td>https://www.dataq.com/products/windaq/ ZEISS AxioCam Icc 1</td><td>ZEISS</td><td>57615</td><td></td></tr></tbody></table>

塩化第二鉄誘発動脈血栓症および3d電子顕微鏡分析のためのサンプル収集

Ferric Chloride-Induced Arterial Thrombosis and Sample Collection for 3D Electron Microscopy Analysis

心血管疾患は、世界中の死亡率と罹患率の主な原因です。異常な血栓症は、糖尿病や肥満などの全身状態、およびアテローム性動脈硬化症、癌、自己免疫疾患などの慢性炎症性疾患の一般的な特徴です。血管損傷時には、通常、凝固系、血小板、および内皮が調整された方法で作用し、損傷部位に血餅を形成することによって出血を防ぎます。このプロセスの異常は、過度の出血または制御不能な血栓症/不十分な抗血栓活性のいずれかを引き起こし、血管閉塞とその後遺症につながります。FeCl3誘発頸動脈損傷モデルは、血栓症が in vivoでどのように開始および進行するかを調べる上で貴重なツールです。このモデルには、内皮の損傷/露出とそれに続く損傷部位での血餅形成が含まれます。これは、さまざまな程度の血管損傷に応答して血管損傷と血餅形成を監視するための高感度で定量的なアッセイを提供します。最適化されると、この標準的な手法を使用して、血栓症の根底にある分子メカニズム、および成長する血栓における血小板の微細構造変化を研究することができます。このアッセイは、抗血栓薬および抗血小板薬の有効性を研究するのにも有用である。この記事では、FeCl3誘発動脈血栓症を開始および監視する方法、および電子顕微鏡による分析のためにサンプルを収集する方法について説明します。

データは一般に、閉塞までの時間、または完全に閉塞性の血栓を形成するのに必要な時間として提示されます。これらのデータは、Kaplan-Meier生存曲線(図4A)19、血流の停止時または実験終了時の終末血流を示すバー付きのドットプロット(図4B)、または折れ線グラフ(図4C)としてプロットできます。血栓安定性はこの技術を用いて研究することができる。ほとんどの場合、FeCl3損傷時に血栓が徐々に形成され、それが成長するにつれて血流は徐々に減少し、血管が完全に閉塞するとゼロに達する。場合によっては、数分間徐々に減少した後、血流が突然増加します。これは、成長する血栓の部分的な脱落として解釈され、塞栓術イベントと見なすことができます(図4D)。閉塞性血栓の形態(図7A)もこの方法を用...

本プロトコルは、FeCl3媒介傷害を使用して動脈血栓症を誘発する方法、および電子顕微鏡分析のために血栓症の様々な段階で動脈損傷サンプルを収集して調製する方法を記載している。

塩化第二鉄誘発動脈血栓症および3D電子顕微鏡分析のためのサンプル収集

Cardiovascular diseases are a leading cause of mortality and morbidity worldwide. Aberrant thrombosis is a common feature of systemic conditions like ...

この方法では、血小板のどの成分と止血系が血栓症にとって重要であるかを判断できます。さらに、この方法は、血栓の成長と構造が細胞レベルでどのように影響を受けるかを決定することができます。この技術の主な利点は、構造レベルで血栓症の多くの段階を研究するための再現可能な方法を可能にすることです。この技術に不慣れな人は、手術領域の組織を過剰に取り扱うことを避ける必要があります。これは出血につながる可能性があり、頸動脈の識別を過度に複雑にする可能性があります。頸動脈を露出させた後、0.1ミリメートルのサイズを有する2本の外科用糸の間の領域を緩く囲むことによって損傷部位のマーキングを開始する。プローブを下糸から遠位の動脈の下に置きます。2本の糸の間の動脈の下にプラスチック片を挿入して、塩化鉄損傷の部位をマークします。怪我をする前に流量を測定して、基礎の流れに注意してください。塩化鉄に浸したろ紙を動脈に3分間置いて怪我をします。怪我の程度が変動するのを防ぎ、プローブによる流量カウントを容易にするために、3分後にろ紙を取り除きます。損傷部位に生理食塩水を追加して、余分な残留塩化鉄を取り除きます。フローの読み取り値を監視します。流量が初期値の50%を下回ったら、プローブを取り外します。その領域をすばやく乾かし、固定剤を追加して損傷領域を外部に固定します。次に、速やかに損傷部位近くの動脈を鉗子で保持します。下ねじの下流と上ねじの上流をカットします。組織を採取したのと同じ向きでプラスチック組織培養皿に置き、固定液を数滴加えます。メスを使用して、動脈の周りの余分な組織をきれいにします。一方の端を水平に切断し、もう一方の端を先細りまたは斜めに切断することにより、血流の向きを確実に記録します。サンプルを室温で1時間固定液に入れ、電子顕微鏡分析のために湿った氷に送るまで、摂氏4度の1%パラホルムアルデヒドでサンプルを保存します。データは、Kaplan-Meier生存曲線、血流の停止時または実験終了時の終末血流を示すバー付きのドットプロット、または折れ線グラフとしてプロットされました。血流は、成長している血栓の部分的な脱落を示す数分間の漸進的な減少に続いて突然増加し、塞栓術イベントと見なされました。閉塞性血栓の形態もこの方法を用いて研究した。血栓症プロセス中のサンプルの迅速な収集は、このプロセスの遅延が構造分析の誤解につながる可能性があるため、最も重要なステップです。

ferric-chloride-induced-arterial-thrombosis-sample-collection-for-3d

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Medicine

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マウスにおけるFeCl3誘発血栓症モデルは、ここで説明されています。腸間膜血管の生体内顕微鏡観察と頸動脈の血流測定により血栓の成長を監視する方法が提示されます。...

塩化第二鉄誘発性頚動脈および腸間膜血管に血栓症のマウスモデル

私たちの目標は、内皮細胞の捕捉のための強磁性体のステントを設計、製造、テストしました。十ステントは、骨折のために試験し、10以上のステント保持磁力を試験しました。最後に、10のステントは、 インビトロで試験したところ、8複数のステントは、細胞捕獲および保持を示すために、4匹のブタに移 ​​植しました。...

内皮細胞捕捉および保持のための強磁性ベアメタルステント

このプロトコルは、脳の血栓塞栓を可視化するための複合近赤外蛍光（NIRF）イメージングおよびマイクロコンピュータ断層撮影（マイクロCT）の適用を説明します。この技術は、血栓負担と進化の定量化を可能にします。 NIRFイメージング技術は、マイクロCT技術は、金ナノ粒子を用いた動物生体の内部に血栓を視覚化しながら、蛍光、切除した脳内の血栓標識可視化します。...

直接脳血栓塞栓を可視化するための複合近赤外蛍光イメージングおよびマイクロコンピュータ断層撮影

私たちは、塩化第二鉄（FeCl 3を）の洗練された手順は、頸動脈や腸間膜動脈ならびに静脈に血栓症モデルを誘発血栓形成を閉塞性までの時間を監視するために生体顕微鏡を用いて、効率的特徴を報告しています。...

塩化第二鉄誘発性マウス血栓症モデル

大型動物の血管損傷モデルの利用にも特徴とし、一般的に使用される小さな動物塩化第二鉄誘起 (した FeCl3)...

塩化第二鉄によるイヌ総頚動脈血栓症: 血管損傷の大動物モデル

フィブリン凝固組織に及ぼす β-アミロイドを分析する個別にまたは組み合わせて使用することができます 2...

Β アミロイド誘起分光と電子顕微鏡によるフィブリン血栓構造異常の解析

この研究では、血栓の溶解、細胞染色、および定期的な血液検査による脳血栓の細胞成分分析のための迅速かつ効果的な方法について説明します。...

脳血栓の細胞成分を包括的に解析する

止血血栓形成のための穿刺創傷手順がここで紹介されています。形成された血栓は大きく、直径は数百ミクロンです。したがって、ボリュームイメージングアプローチが適切です。私たちは、多くの人が利用できる高解像度のアプローチとして、モンタージュされた広域透過型電子顕微鏡法を提案し、準備プロトコルを詳述します。...

穿刺創の止血とモンタージュ広域電子顕微鏡分析のためのサンプルの準備

本研究は、塩化鉄による上矢状洞血栓症の再現可能かつ低侵襲ラットモデルを確立するためのプロトコルを提示し、シルク縫合法とレーザースペックルコントラストイメージングおよび高分解能超音波を組み合わせて評価します。...

修正された塩化鉄誘発性上矢状洞血栓症の確立

大動脈洞と上行大動脈の精密切片化と組織化学的および免疫組織化学的分析を組み合わせて、マウスモデルのアテローム性動脈硬化病変を定量化し、特徴付ける手順について説明します。...

マウス大動脈洞におけるアテローム性動脈硬化症の病変の定量分析とキャラクタリゼーション

学ぶFeCl₃誘発動脈血栓症のサンプル収集と3D電子顕微鏡分析。血小板と止血系の構成要素を特定し、血栓の構造的変化を可視化する再現性のある手法です。

塩化第二鉄誘発動脈血栓症および3D電子顕微鏡分析のためのサンプル収集

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