2023年4月28日
ここでは、3次元蛍光顕微鏡を用いたゼブラフィッシュ仔魚の in vivo 全脳イメージングのプロトコルを紹介します。実験手順には、サンプル調製、画像取得、および視覚化が含まれます。
脳全体の神経活動を高い空間分解能と時間分解能で記録・解析するための光学免疫系や計算アルゴリズムを開発しています。実験用魚は研究に理想的なモデル動物です。それぞれの光透過性と多様な遺伝的ツールの利用可能性のおかげで、サンプルマウントに使用されるアガロースゲルによってもたらされる収差により光学画質が低下し、記録中に魚が移動して画像にモーションアーチファクトが発生したり、画像からの正確な信号抽出が妨げられたりする可能性があります。
公開されているプロトコルは、実験手順の簡単な概要、アガロース凝固の正確な取り付け技術、簡単な位置決めなど、詳細のかなりの部分を示しています。したがって、高品質の画像データを取得するには、効果的で再現性のあるプロトコルが必要です。最小限のノイズと動きで。
当社のプロトコルは、最適化され、再現性のある実験手順を提供します。このプロトコルは、長期間にわたるin vivo全脳イメージングと、取得したイメージングデータの視覚化を可能にします。ワークフローは全脳イメージングに焦点を当てていましたが、多くのゼブラフィッシュの他の臓器のイメージングにも簡単に適用できます。
私たちの目標は、神経計算の根底にある原理を解明することです。そのために、神経活動や構造の大規模イメージングや、体系的な脳マッピングのための計算解析を含むパイプラインに引き続き取り組んでいきます。
本記事では、三次元蛍光顕微鏡を用いたゼブラフィッシュ幼魚のin vivo全脳イメージングの詳細なプロトコルを提示します。ゼブラフィッシュモデルは、光学的な透明度が高く、遺伝子操作へのアクセスが容易であるため、神経計算や活動の研究に適しています。本プロトコルでは、モーションアーティファクトやアガロースゲルの収差といった一般的な問題に対処し、高品質な画像データの取得を可能にします。
ゼブラフィッシュ幼魚の脳における三次元蛍光イメージングは、神経構造と活動の高解像度なin vivoマッピングを可能にし、初期段階の神経科学的発見を支援します。本プロトコルでは、再現性の向上とアーティファクトの低減に取り組み、神経生物学的研究におけるメカニズムのリスク低減およびターゲットバリデーションのための強固な基盤を提供します。その適応性と定量的出力により、神経回路解析および機能スクリーニングに焦点を当てた企業の研究開発パイプラインにおいて、再利用可能な能力として位置付けられています。
このイメージングプロトコルは、基礎研究から前臨床試験へと至る一連の流れに統合されており、脊椎動物の神経科学モデルにおける仮説検証、パスウェイマッピング、および定量分析を可能にします。