Name: 領域特異的脱細胞化肺組織の解剖と単離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-09-29T14:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 25 s
Description: 学ぶ領域特異的脱細胞化肺組織の単離法。気道・血管・肺胞の解剖学的部位ごとに細胞外基質を解析し、健康肺と疾患肺のプロテオームシグネチャの違いを明らかにする組織工学の手法です。

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著者らは、ヒト肺調達のためのUVM剖検サービスと、解剖技術全体への貢献に対してRobert Pouliot博士に感謝しています。これらの研究はR01 HL127144-01(DJW)の支援を受けた。

すべての動物実験は、バーモント大学(UVM)のIACUCに従って実施されています。すべてのヒト肺はUVM剖検サービスから取得され、関連する研究はUVMのIRBのガイドラインに従って実施されました。
注:ブタおよびヒト肺の脱細胞化は、我々のグループ7,8,9,10,21によって以前に説明されている。簡単に言うと、肺葉全体は、蠕動ポンプを使用して一連の2 L洗剤および酵素溶液で気道および血管系を順次灌流することによって脱細胞化される:0.1%Triton-X 100、2%デオキシコール酸ナトリウム、1 M塩化ナトリウム、30 μg/mL DNase/1.3 mM MgSO 4/2 mM CaCl2、0.1%過酢酸/4%エタノール、 脱イオン水洗浄。効率的な脱細胞化を確認するための標準的な方法には、脱細胞化肺内の<50 ng/mg残留二本鎖DNAの測定、ゲル電気泳動によるDNA断片の不存在、およびヘマトキシリンおよびエオジン(H&E)染色による核染色が含まれます9,21。
1. セットアップ
<ol><li>ガラス製のキャセロール皿、2対の外科用ピンセット、1対の鉗子、1対の外科用はさみ、使用前にオートクレーブなど、解剖手順に必要なすべての機器を集めてください。</li>
	<li>肺の一部を取得し、ガラスのキャセロール皿に入れ、気道の上端がはっきりと見えるように向きを変えます。</li>
	<li>血管系の近位端を特定し、後のステップまで無傷のままにします。血管系の端部ははっきりと見え、色が完全に不透明な白色でなければなりません。</li>
	<li>ピンセットと外科用ハサミを使用して、肺の外側を覆っている可能性のある胸膜を取り除き、廃棄します。</li>
</ol>2.気道を露出させる
<ol><li>外科用ハサミで広げる技術を使用して、追加の気道を露出させるように穏やかに働きます。<ol><li>通常、直径が約2〜4 cmの最大の気道を見つけます。気道を特定する別の方法は、軟骨リングの観察であり、これは視覚的にまたは組織の触診 を介して 検出することができる。</li>
		<li>一対の鉗子を使用して、気道の長さを触診して、見えない気道の位置を約1インチの深さまで決定します。 注:軟骨リングで裏打ちされているため、気道は他の肺組織よりも特徴的に硬いです。そのため、目に見えない気道を見つけて触診することは比較的簡単なはずです。</li>
		<li>外科用ハサミを気道と平行に持ち、閉じた先端を見えない気道を直接囲む組織に挿入します。</li>
		<li>手術用ハサミをゆっくりと開いて、周囲の膜をそっと引き離します。その後、外科用ハサミを外し、組織を切らないようにします。</li>
		<li>解剖手順全体でこのプロセスを断続的に繰り返して、気道を露出させ続けます。</li>
	</ol></li>
	<li>外科用ハサミを使用して、分岐点で気道を切断し、いずれかの枝に沿って独立して解剖します。 注意: 分岐点は、1つの気道が2つの別々の気道に分かれる場所です。</li>
	<li>気道の切断領域は、無傷の端が確実であると確信すると、識別可能なままであり、さらなる解剖のために簡単に見つけることができます。</li>
	<li>気道の切断された領域を対応するチューブに配置します。切断された領域のサイズはサンプルによって異なりますが、一般に、長さは1〜5 cmの範囲です。幅は気道樹に沿った相対的な位置に基づいて変化し、遠位領域はより近位領域よりも狭い幅を維持します。</li>
</ol>3.血管系の領域の露出と切除
<ol><li>血管系に穏やかな圧力をかけ、ゆっくりと気道から引き離します。血管系をわずかに伸ばし、外科用ハサミを使用して血管系を気道からさらに分離します。 注:圧力がかかりすぎると血管系が裂けます。血管系が裂けた場合は、血管系のその部分を対応するラベル付きチューブに配置し、その無傷の端を特定するだけです。</li>
	<li>血管樹の分岐点が露出している場合は、外科用ハサミとピンセットを使用して、血管系のより劣った領域を露出させます。<ol><li>まず、外科用ハサミの閉じた先端を分岐点のすぐ下、対応する2つの血管系領域の間に挿入します。</li>
		<li>はさみをゆっくりと開いて、下にある組織を広げます。</li>
		<li>断続的に、ピンセットのペアを使用して、外科用ハサミを使用して広げられた組織、および血管系を直接囲む他の組織を取り除きます。</li>
	</ol></li>
	<li>血管系が気道の領域を覆っている場合、または解剖手順のいずれかのステップに煩雑になっている場合は、分岐点で血管系を切断し、さらにいずれかの枝に沿って独立して解剖します。</li>
	<li>血管系の切断領域は、無傷の端が無傷であると確信すると、識別可能なままであり、さらなる解剖のために容易に特定されます。</li>
</ol>4.肺胞組織の識別と切除
<ol><li>鉗子またはピンセットを使用して、肺胞組織の小さな領域をつまんでからそっと引き裂きます。<ol><li>気道または血管系の直接近くにない組織の領域を見つけます。</li>
		<li>ピンセットを使用して、血管系や気道がないように見える組織の小さな領域をつまみます。</li>
		<li>肺から組織のつまんだ領域を引き裂きます。</li>
	</ol></li>
	<li>摘出した組織の領域を観察し、肺胞組織であるかどうかを確認します。 注:肺胞組織は肺全体に存在するため、解剖手順全体で除去することができ、また除去する必要があります。主に肺胞、血管系、または気道として簡単に識別できない組織は、バルク組織として分類し、対応するラベル付きチューブに配置する必要があります。</li>
</ol>

細胞間および細胞-ECM相互作用を研究するための局所脱細胞化肺組織単離

<ol><li>López-Campos, J. L., Tan, W., Soriano, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Global burden of COPD.</a> Respirology. 21 (1), 14-23 (2016).</li>
<li>Raherison, C., Girodet, P. -O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Review%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of COPD.</a> European Respiratory Review. 18 (114), 213-221 (2009).</li>
<li>Glass, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Idiopathic+pulmonary+fibrosis%3A+Current+and+future+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22The+Clinical+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Idiopathic pulmonary fibrosis: Current and future treatment.</a> The Clinical Respiratory Journal. 16 (2), 84-96 (2022).</li>
<li>Dickinson, K. M., Collaco, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cystic+Fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics+in+Review%22%5BJournal%5D)">Cystic Fibrosis.</a> Pediatrics in Review. 42 (2), 55-67 (2021).</li>
<li>DeFreitas, M. R., McAdams, H. P., Azfar Ali, H., Iranmanesh, A. M., Chalian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complications+of+lung+transplantation%3A+update+on+imaging+manifestations+and+management%5BTitle%5D)+AND+%22Radiology%3A+Cardiothoracic+Imaging%22%5BJournal%5D)">Complications of lung transplantation: update on imaging manifestations and management.</a> Radiology: Cardiothoracic Imaging. 3 (4), e190252(2021).</li>
<li>Young, K. A., Dilling, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+future+of+lung+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">The future of lung transplantation.</a> Chest. 155 (3), 465-473 (2019).</li>
<li>Wagner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+decellularization+and+recellularization+of+normal+versus+emphysematous+human+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Comparative decellularization and recellularization of normal versus emphysematous human lungs.</a> Biomaterials. 35 (10), 3281-3297 (2014).</li>
<li>Booth, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acellular+normal+and+fibrotic+human+lung+matrices+as+a+culture+system+for+in+vitro+investigation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acellular normal and fibrotic human lung matrices as a culture system for in vitro investigation.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 186 (9), 866-876 (2012).</li>
<li>Uhl, F. E., Wagner, D. E., Weiss, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+decellularized+lung+matrices+for+cell+culture+and+protein+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Preparation of decellularized lung matrices for cell culture and protein analysis.</a> Methods in Molecular Biology. 1627, 253-283 (2017).</li>
<li>Wagner, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+scaffolds+of+acellular+human+and+porcine+lungs+for+high+throughput+studies+of+lung+disease+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional scaffolds of acellular human and porcine lungs for high throughput studies of lung disease and regeneration.</a> Biomaterials. 35 (9), 2664-2679 (2014).</li>
<li>Uhl, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+role+of+glycosaminoglycans+in+decellularized+lung+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Functional role of glycosaminoglycans in decellularized lung extracellular matrix.</a> Acta Biomaterialia. 102, 231-246 (2020).</li>
<li>Saldin, L. T., Cramer, M. C., Velankar, S. S., White, L. J., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+hydrogels+from+decellularized+tissues%3A+structure+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix hydrogels from decellularized tissues: structure and function.</a> Acta Biomaterialia. 49, 1-15 (2017).</li>
<li>Giobbe, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+matrix+hydrogel+derived+from+decellularized+tissues+enables+endodermal+organoid+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Extracellular matrix hydrogel derived from decellularized tissues enables endodermal organoid culture.</a> Nature Communications. 10 (1), 5658(2019).</li>
<li>Petrou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clickable+decellularized+extracellular+matrix+as+a+new+tool+for+building+hybrid-hydrogels+to+model+chronic+fibrotic+diseases+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Materials+Chemistry.+B%22%5BJournal%5D)">Clickable decellularized extracellular matrix as a new tool for building hybrid-hydrogels to model chronic fibrotic diseases in vitro.</a> Journal of Materials Chemistry. B. 8 (31), 6814-6826 (2020).</li>
<li>Nizamoglu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+of+fibrosis+using+crosslinked+native+extracellular+matrix-derived+hydrogels+to+modulate+biomechanics+without+changing+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Biomaterialia%22%5BJournal%5D)">An in vitro model of fibrosis using crosslinked native extracellular matrix-derived hydrogels to modulate biomechanics without changing composition.</a> Acta Biomaterialia. 147, 50-62 (2022).</li>
<li>Marhuenda, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+extracellular+matrix+hydrogels+enhance+preservation+of+type+ii+phenotype+in+primary+alveolar+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Lung extracellular matrix hydrogels enhance preservation of type ii phenotype in primary alveolar epithelial cells.</a> International Journal of Molecular Sciences. 23 (9), 4888(2022).</li>
<li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+tissue+extracellular+matrix-derived+hydrogels+protect+against+radiation-induced+lung+injury+by+suppressing+epithelial-mesenchymal+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Lung tissue extracellular matrix-derived hydrogels protect against radiation-induced lung injury by suppressing epithelial-mesenchymal transition.</a> Journal of Cellular Physiology. 235 (3), 2377-2388 (2020).</li>
<li>Pouliot, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+characterization+of+a+naturally+derived+lung+extracellular+matrix+hydrogel%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research.+Part+A%22%5BJournal%5D)">Development and characterization of a naturally derived lung extracellular matrix hydrogel.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part A. 104 (8), 1922-1935 (2016).</li>
<li>Pouliot, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Porcine+lung-derived+extracellular+matrix+hydrogel+properties+are+dependent+on+pepsin+digestion+time%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Porcine lung-derived extracellular matrix hydrogel properties are dependent on pepsin digestion time.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 26 (6), 332-346 (2020).</li>
<li>de Hilster, R. H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+lung+extracellular+matrix+hydrogels+resemble+the+stiffness+and+viscoelasticity+of+native+lung+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Human lung extracellular matrix hydrogels resemble the stiffness and viscoelasticity of native lung tissue.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 318 (4), L698-L704 (2020).</li>
<li>Hoffman, E. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+and+disease+specific+human+lung+extracellular+matrix+composition%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Regional and disease specific human lung extracellular matrix composition.</a> Biomaterials. 293, 121960(2023).</li>
<li>Sicard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+and+anatomical+variations+in+lung+tissue+stiffness%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology.+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Aging and anatomical variations in lung tissue stiffness.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 314 (6), L946-L955 (2018).</li>
</ol>

著者の誰も利益相反を持っていません。

ヒトおよび他の種からの脱細胞化組織は、3Dヒドロゲルを含むex vivo培養モデルにおけるECM組成および細胞-ECM相互作用を研究するための生体材料として頻繁に利用されている12,13。他の臓器と同様に、脱細胞化肺は、以前は健康な肺と罹患した肺(すなわち、気腫性およびIPF)のECM組成の違いを決定するために利用されており、ECMダイナミクスおよび細胞-ECM相互作用を研究するためのヒドロゲルとしてますます利用されています7、8、9、10、11、14、15、16、17...

慢性閉塞性肺疾患(COPD)、特発性肺線維症(IPF)、嚢胞性線維症(CF)などの肺疾患は、現在、治療法のないままです1,2,3,4。肺移植は、多くの場合、後期の患者にとって唯一の選択肢ですが、適切なドナー肺の供給と移植後の急性および慢性の両方の拒絶反応の両方のために、これは限られた選択肢のままです3,5,6。そのため、新しい治療戦略が非常に重要です。呼吸生物工学における有望なアプローチの1つは、脱細胞化された天然肺組織から調製された組織由来足場の適用です。無細胞全肺足場は、天然の細胞外マトリックス(ECM)組成と生物活性の複雑さの多くを保持しているため、全臓器工学のために、また肺疾患メカニズムを研究するための改良モデルとして集中的に研究されてきました7,8,9,10。並行して、オルガノイドおよび他の組織培養モデルにおける細胞間および細胞-ECM相互作用を研究するためのヒドロゲルおよび他の基質として、肺を含む異なる器官からの脱細胞化組織を利用することへの関心が高まっている11,12,13,14,15,16,17.これらは、腫瘍源に由来するマトリゲルなどの市販の基質よりも関連性の高いモデルを提供します。しかしながら、ヒト肺由来ヒドロゲルに関する情報は、現時点では比較的限られている。我々は以前に脱細胞化ブタ肺に由来するヒドロゲルを記載し、それらの機械的および材料的特性の両方を特徴付け、ならびに細胞培養モデルとしてのそれらの有用性を実証した18,19。最近の報告は、脱細胞化された正常および罹患(COPD、IPF)ヒト肺に由来するヒドロゲルの初期機械的および粘弾性特性を詳述した20。また、脱細胞化正常およびCOPDヒト肺のグリコサミノグリカン含有量を特徴付ける初期データ、および細胞間および細胞-ECM相互作用の研究へのそれらの適用性も提示しました11。
これらの例は、調査目的で脱細胞化ヒト肺ECMを利用することの力を示しています。しかし、肺は複雑な器官であり、構造と機能の両方が、ECM組成やこわばりなどの他の特性など、肺のさまざまな領域で異なります21,22。そのため、気管と大気道、中小気道、肺胞、大血管、中血管、小血管など、肺の個々の領域でECMを研究することは興味深いことです。この目的のために、私たちは、脱細胞化されたヒトおよびブタの肺を解剖し、続いてそれらの解剖学的領域のそれぞれを単離するための信頼性が高く再現性のある方法を開発しました。これにより、正常な肺と罹患した肺の両方における局所タンパク質含量の詳細な差異分析が可能になった21。

<table><tbody><tr><td>ボンはさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14184-09</td><td></td></tr>デュ<tr><td>モン#5 - ファイン鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11254-02</td><td></td></tr><tr><td>鉗子、湾曲、S / S、鈍器、鋸歯状 - 130mm</td><td>CellPath</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>硬化ファインはさみ</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14090-11</td><td></td></tr>モ<tr><td>リアアイリス鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11373-22</td><td></td></tr><tr><td>パイレックスガラスキャセロールディッシュ</td><td>コールパー</td><td>マー3175-10</td><td></td></tr></tbody></table>

領域特異的脱細胞化肺組織の解剖と単離

Dissection and Isolation of Region-Specific Decellularized Lung Tissue

肺移植は、重度の肺疾患の後期段階の患者にとって唯一の選択肢であることがよくありますが、これは適切なドナー肺の供給と移植後の急性および慢性の両方の拒絶反応の両方のために制限されています。病気の肺の交換のための新しいバイオエンジニアリングアプローチを確認することは、患者の生存率を改善し、現在の移植方法論に関連する合併症を回避するために不可欠です。代替アプローチは、典型的には急性および慢性拒絶反応の原因である細胞成分を欠く脱細胞化全肺の使用を含む。肺は非常に複雑な器官であるため、血管系、気道、肺胞組織など、特定の領域の細胞外マトリックス成分を調べることは興味深いことです。このアプローチの目的は、研究者が完全に脱細胞化された肺から領域特異的組織を解剖および分離できる簡単で再現性のある方法を確立することです。現在のプロトコルはブタとヒトの肺のために考案されていますが、他の種にも適用される可能性があります。このプロトコルでは、組織の4つの領域、すなわち気道、血管系、肺胞、およびバルク肺組織が指定されました。この手順により、従来のバルク分析方法とは対照的に、脱細胞化肺組織の内容をより正確に表す組織のサンプルを調達できます。

プロトコルの全体図を図1に示します。一度習得すると、脱細胞化肺組織の局所解剖は容易に再現可能である。切断された各組織サンプルの分類を決定することは、解剖手順の成功に不可欠です。血管組織は気道よりも実質的に弾力性があるため、鉗子を使用して組織を伸ばすことは、特定のサンプルが血管系か気道かの強力な指標となることがよくあります。典型的には、血管組織は気道と平行に走る(図2A)。血管組織はまた、気道組織(図2C)よりも色が白く不透明に見える傾向があります(図2B)。プロトコルに記載されている外科的はさみ拡散技術を図3に示します。気道の大きなサンプルは、気道自体よりもわずかに白く見える軟骨の輪に囲まれています。したがって、軟骨リングを観察することは、問題のサンプルが気道であることの即時の指標です(図4</str...

ここに提示されるのは、局所脱細胞化肺組織の単離のためのプロトコルである。このプロトコルは、細胞外マトリックスおよび細胞-マトリックス相互作用の複雑さを研究するための強力なツールを提供します。

Lung transplantation is often the only option for patients in the later stages of severe lung disease, but this is limited both due to the supply of ...

脱細胞化された臓器は、さまざまな組織工学用途で継続的に使用されています。ただし、これらの研究のほとんどは、個々の解剖学的領域ではなく、臓器全体を考慮しています。この方法は、脱細胞化されたヒト肺の個々の解剖学的領域を調べて、ダウンストリームアプリケーション向けのより正確なモデルシステムを調べるために開発されました。モデルシステムを開発するときは、システムが通常の生物学を最もよく再現できるように、さまざまな設計面を考慮することが重要です。肺の場合、これには環境ストレス、周期的な機械的ストレス、弾力性などの要因が含まれ、肺の独立した領域間で異なる場合があります。この方法を利用することで、健康な肺と病気の肺の両方の個々の解剖学的肺領域に由来する細胞外マトリックスが明確なプロテオミクスシグネチャーを持っていることを示すことができました。これにより、肺疾患をさらに理解し、新しい治療法を考え出すことができます。この研究を継続するために、私たちの研究室では現在、健康で病気の肺細胞外マトリックスから三次元ヒドロゲルを開発しています。これらのヒドロゲルは、対応する細胞挙動に対する細胞外マトリックス相互作用の役割を解明するために、in vitroオルガノイドモデリングを実行することを可能にします。

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Research

JoVE Journal

Bioengineering

バイオエンジニアリング（生体工学）

私たちは、脱細胞肺癌細胞外マトリックスと機能的な肺組織を生成するために使用することができる新規バイオミメティックバイオリアクターを開発している。バイオリアクターにおけるマトリックスと培養に細胞を播種することにより、我々は短期間のためのin...

肺のエンジニアリングのための手順

マウス肺樹状細胞の高度に精製された調製物が記載されている。特定の重点は、従来の樹状細胞サブセットの分離に与えられます。...

マウス肺樹状細胞の分離

このビデオでは、血管系を通じて界面活性剤の順行性灌流を適用することにより、脱細胞化細胞外マトリックスまたはECMスキャフォールドを生成する方法を示します。その後、構造ECMスキャフォールドを使用して、心肺疾患に関連するECMリモデリングを解析できます。...

心肺複合体の脱細胞化:マウスモデルから心臓と肺を脱細胞化する技術

全臓器の脱細胞化は、再生医療に使用できる可能性のある天然の生物学的足場を生成します。肺全体の細胞が脱細胞化され、血管循環と液体媒体の換気を促進するバイオリアクターで成体幹細胞と内皮細胞が播種される肺再生の非ヒト霊長類モデルの説明が提示されます。...

非ヒト霊長類の肺脱細胞化と特殊大型臓器バイオリアクターを用いた再細胞化

このプロトコルは、効率的に気道上皮細胞を成熟するために、マウスの胚性幹細胞由来の胚体内胚葉を指示します。この分化技術は、定義された、無血清培養の設定において、肺系統の仕様を指示するために3次元の脱細胞化肺足場を使用します。...

脱細胞肺足場を使用してESC由来のマウス気道上皮細胞の生成

ここでは、プロトコルを提案前のヴィヴォ肺がんモデルの腫瘍の進行の手順を模倣し、原発巣を特定するのに役立ちます循環腫瘍細胞と転移巣。...

無細胞性と細胞の肺転移モデル

このプロトコルは、マウスの心臓と肺の細胞化を解除することを目的としています。得られた細胞外マトリックス(ECM)足場は、免疫染色され、それらの成分の位置およびトポロジーをマッピングするために画像化することができる。...

マウス心肺複合体の脱細胞化

このプロトコールは、脱細胞化された精密切断肺スライスに肺胞上皮2型細胞、線維芽細胞、および内皮細胞を再移入することによって、再現性のある小規模の操作された肺組織を生成する方法を記載している。...

脱細胞化肺スライスから調製された人工肺組織

プロトコルは原産の牛のような肺のティッシュに加えられる2つの明瞭な脱cellularizationの方法を解明し、それぞれの性格描写の広範囲の記述を提供する。...

脱細胞化肺細胞外マトリックスハイドロゲルの開発と特性評価

この論文では、脱細胞化および再細胞化法を使用してバイオエンジニアリングされたマウス肺を作成する方法を説明します。また、その後の同所性肺移植についても詳しく説明しています。...

脱細胞化マウス肺と初代ヒト内皮細胞を用いた生体工学的肺移植

以下に記載するプロトコルは、特異的なレチノイド自家蛍光を利用し、蛍光活性化細胞ソーティングを採用することにより、非常に不均一な肺細胞集団からレチノイド含有細胞を単離する簡単で効果的な方法です。...

細胞選別による肺レチノイド含有細胞の単離

学ぶ領域特異的脱細胞化肺組織の単離法。気道・血管・肺胞の解剖学的部位ごとに細胞外基質を解析し、健康肺と疾患肺のプロテオームシグネチャの違いを明らかにする組織工学の手法です。

領域特異的脱細胞化肺組織の解剖と単離

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