Name: 細胞骨格ネットワークの可視化のためのカスタマイズ可能な単一対物レンズライトシート蛍光顕微鏡の設計と構築 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-01-26T12:50:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学ぶ単一対物レンズライトシート蛍光顕微鏡の構築法。細胞骨格ネットワークの三次元可視化により、光漂白を最小限に抑えながら高密度サンプルの長時間観察が可能になり、細胞力学研究に貢献します。

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この研究は、全米科学財団(NSF)のRUI賞(DMR-2203791)の支援を受けました。アライメントの過程でBin Yang博士とManish Kumar博士が提供してくれた指導に感謝しています。Jenny Ross博士とK. Alice Lindsay氏には、キネシンモーターの調製手順をいただき、感謝いたします。

細胞骨格ネットワークを可視化するカスタマイズ可能な蛍光顕微鏡

<ol><li>Girkin, J. M., Carvalho, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+light-sheet+microscopy+revolution%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Optics%22%5BJournal%5D)">The light-sheet microscopy revolution.</a> Journal Optics. 20 (5), 053002(2018).</li>
<li>You, R., McGorty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+sheet+fluorescence+microscopy+illuminating+soft+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physics%22%5BJournal%5D)">Light sheet fluorescence microscopy illuminating soft matter.</a> Frontiers in Physics. 9, 760834(2021).</li>
<li>Fuchs, E., Jaffe, J. S., Long, R. A., Azam, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thin+laser+light+sheet+microscope+for+microbial+oceanography%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Thin laser light sheet microscope for microbial oceanography.</a> Optics Express. 10 (2), 145-154 (2002).</li>
<li>Huisken, J., Swoger, J., Del Bene, F., Wittbrodt, J., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+sectioning+deep+inside+live+embryos+by+selective+plane+illumination+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Optical sectioning deep inside live embryos by selective plane illumination microscopy.</a> Science. 305 (5686), 1007-1009 (2004).</li>
<li>Dunsby, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optically+sectioned+imaging+by+oblique+plane+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Optically sectioned imaging by oblique plane microscopy.</a> Optics Express. 16 (25), 20306-20316 (2008).</li>
<li>Bouchard, M. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swept+confocally-aligned+planar+excitation+%28SCAPE%29+microscopy+for+high-speed+volumetric+imaging+of+behaving+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Photonics%22%5BJournal%5D)">Swept confocally-aligned planar excitation (SCAPE) microscopy for high-speed volumetric imaging of behaving organisms.</a> Nature Photonics. 9 (2), 113-119 (2015).</li>
<li>Smith, C. W., Botcherby, E. J., Wilson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+oblique-plane+images+in+sectioning+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Resolution of oblique-plane images in sectioning microscopy.</a> Optics Express. 19 (3), 2662-2669 (2011).</li>
<li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epi-illumination+SPIM+for+volumetric+imaging+with+high+spatial-temporal+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Epi-illumination SPIM for volumetric imaging with high spatial-temporal resolution.</a> Nature Methods. 16 (6), 501-504 (2019).</li>
<li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+multiview+capture+and+fusion+improves+spatial+resolution+in+wide-field+and+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optica%22%5BJournal%5D)">Simultaneous multiview capture and fusion improves spatial resolution in wide-field and light-sheet microscopy.</a> Optica. 3 (8), 897-910 (2016).</li>
<li>Sahasrabudhe, A., Vittal, V., Ghose, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peeping+in+on+the+cytoskeleton%3A+Light+microscopy+approaches+to+actin+and+microtubule+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Science%22%5BJournal%5D)">Peeping in on the cytoskeleton: Light microscopy approaches to actin and microtubule organization.</a> Current Science. 105 (11), 1562-1570 (2013).</li>
<li>Kumar, M., Kishore, S., Nasenbeny, J., McLean, D. L., Kozorovitskiy, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+one-+and+two-photon+scanned+oblique+plane+illumination+%28SOPi%29+microscopy+for+rapid+volumetric+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Integrated one- and two-photon scanned oblique plane illumination (SOPi) microscopy for rapid volumetric imaging.</a> Optics Express. 26 (10), 13027-13041 (2018).</li>
<li>Kim, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oblique-plane+single-molecule+localization+microscopy+for+tissues+and+small+intact+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">Oblique-plane single-molecule localization microscopy for tissues and small intact animals.</a> Nature Methods. 16 (9), 853-857 (2019).</li>
<li>Sapoznik, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+oblique+plane+microscope+for+large-scale+and+high-resolution+imaging+of+subcellular+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">A versatile oblique plane microscope for large-scale and high-resolution imaging of subcellular dynamics.</a> eLife. 9, e57681(2020).</li>
<li>Bernardello, M., Marsal, M., Gualda, E. J., Loza-Alvarez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-sheet+fluorescence+microscopy+for+the+in+vivo+study+of+microtubule+dynamics+in+the+zebrafish+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Light-sheet fluorescence microscopy for the in vivo study of microtubule dynamics in the zebrafish embryo.</a> Biomedical Optics Express. 12 (10), 6237-6254 (2021).</li>
<li>Shelden, E. A., Colburn, Z. T., Jones, J. C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focusing+super+resolution+on+the+cytoskeleton%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Res%22%5BJournal%5D)">Focusing super resolution on the cytoskeleton.</a> F1000Res. 5, F1000 Faculty Rev-998 (2016).</li>
<li>Wulstein, D. M., Regan, K. E., Garamella, J., McGorty, R. J., Robertson-Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology-dependent+anomalous+dynamics+of+ring+and+linear+DNA+are+sensitive+to+cytoskeleton+crosslinking%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Advances%22%5BJournal%5D)">Topology-dependent anomalous dynamics of ring and linear DNA are sensitive to cytoskeleton crosslinking.</a> Science Advances. 5 (12), (2019).</li>
<li>Sheung, J. Y., Garamella, J., Kahl, S. K., Lee, B. Y., McGorty, R. J., Robertson-Anderson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor-driven+advection+competes+with+crowding+to+drive+spatiotemporally+heterogeneous+transport+in+cytoskeleton+composites%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physics%22%5BJournal%5D)">Motor-driven advection competes with crowding to drive spatiotemporally heterogeneous transport in cytoskeleton composites.</a> Frontiers in Physics. 10, 1055441(2022).</li>
<li>Zeiss Lightsheet 7. Light-Sheet Multiview Imaging of Living and Cleared Specimens. Zeiss. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.zeiss.com/microscopy/en/products/light-microscopes/light-sheet-microscopes/lightsheet-7.html">https://www.zeiss.com/microscopy/en/products/light-microscopes/light-sheet-microscopes/lightsheet-7.html</a> (2023).</li>
<li>Zeiss Lattice Lightsheet 7. Long-Term Volumetric Imaging of Living Cells. Zeiss. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.zeiss.com/microscopy/en/products/light-microscopes/light-sheet-microscopes/lattice-lightsheet-7.html">https://www.zeiss.com/microscopy/en/products/light-microscopes/light-sheet-microscopes/lattice-lightsheet-7.html</a> (2023).</li>
<li>Kumar, M., Kishore, S., McLean, D. L., Kozorovitskiy, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossbill%3A+An+open+access+single+objective+light-sheet+microscopy+platform%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Crossbill: An open access single objective light-sheet microscopy platform.</a> bioRxiv. , (2021).</li>
<li>Olarte, O. E., Andilla, J., Gualda, E. J., Loza-Alvarez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light-sheet+microscopy%3A+A+tutorial%5BTitle%5D)+AND+%22Advances+in+Optics+and+Photonics%22%5BJournal%5D)">Light-sheet microscopy: A tutorial.</a> Advances in Optics and Photonics. 10 (1), 111-179 (2018).</li>
<li>Pitrone, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OpenSPIM%3A+An+open-access+light-sheet+microscopy+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Methods%22%5BJournal%5D)">OpenSPIM: An open-access light-sheet microscopy platform.</a> Nature Methods. 10 (7), 598-599 (2013).</li>
<li>Sheung Lab, Single Objective Light Sheet Microscope (SOLS) Guide. Sheung Lab. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://sites.google.com/view/sheunglab/microscopy/single-objective-light-microscope-sols">https://sites.google.com/view/sheunglab/microscopy/single-objective-light-microscope-sols</a> (2023).</li>
<li>Lamb, J. R., Ward, E. N., Kaminski, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Open-source+software+package+for+on-the-fly+deskewing+and+live+viewing+of+volumetric+lightsheet+microscopy+data%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Open-source software package for on-the-fly deskewing and live viewing of volumetric lightsheet microscopy data.</a> Biomedical Optics Express. 14 (2), 834-845 (2023).</li>
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<li>Watkins, S. C., St. Croix, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+sheet+imaging+comes+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Light sheet imaging comes of age.</a> Journal of Cell Biology. 217 (5), 1567-1569 (2018).</li>
<li>Ndlec, F. J., Surrey, T., Maggs, A. C., Leibler, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+microtubules+and+motors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-organization of microtubules and motors.</a> Nature. 389 (6648), 305-308 (1997).</li>
<li>Sanchez, T., Chen, D. T. N., DeCamp, S. J., Heymann, M., Dogic, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+motion+in+hierarchically+assembled+active+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spontaneous motion in hierarchically assembled active matter.</a> Nature. 491 (7424), 431-434 (2012).</li>
<li>Berezney, J., Goode, B. L., Fraden, S., Dogic, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extensile+to+contractile+transition+in+active+microtubule-actin+composites+generates+layered+asters+with+programmable+lifetimes%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Extensile to contractile transition in active microtubule-actin composites generates layered asters with programmable lifetimes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 119 (5), e2115895119(2022).</li>
<li>Kim, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isomorphic+coalescence+of+aster+cores+formed+in+vitro+from+microtubules+and+kinesin+motors%5BTitle%5D)+AND+%22Physical+Biology%22%5BJournal%5D)">Isomorphic coalescence of aster cores formed in vitro from microtubules and kinesin motors.</a> Physical Biology. 13 (5), 056002(2016).</li>
<li>Millett-Sikking, A., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMillett-Sikking%2C+A+%22High+NA+single-objective+lightsheet%22">High NA single-objective lightsheet</a>. , (2019).</li>
<li>Bourgenot, C., Saunter, C. D., Taylor, J. M., Girkin, J. M., Love, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((3D+adaptive+optics+in+a+light+sheet+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">3D adaptive optics in a light sheet microscope.</a> Optics Express. 20 (12), 13252-13261 (2012).</li>
<li>Bernardello, M., Gualda, E. J., Loza-Alvarez, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modular+multimodal+platform+for+classical+and+high+throughput+light+sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Modular multimodal platform for classical and high throughput light sheet microscopy.</a> Scientific Reports. 12 (1), 1969(2022).</li>
<li>Crombez, S., Leclerc, P., Ray, C., Ducros, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computational+hyperspectral+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Optics+Express%22%5BJournal%5D)">Computational hyperspectral light-sheet microscopy.</a> Optics Express. 30 (4), 4856-4866 (2022).</li>
</ol>

著者は何も開示していません。すべての調査は、利益相反と解釈される可能性のある商業的または金銭的関係がない状態で実施されました。

このプロトコルに関する 2 つの重要な詳細は、システムの全体的なコストと、予想される構築および調整時間です。正確なコストは変動しますが、このSOLSまたは同様のDIYシステムの TOTO コストは85,000米ドルの範囲に収まると快適に見積もることができます。この見積もりは、すべてのコンポーネントの小売価格を考慮しているため、この全体的な価格は、中古コンポーネントを調達することで大幅に削減される可能性があることに注意してください。構築時間に関しては、光学の経験がほとんどないユーザーが、すべてのコンポーネントが利用可能で準備ができている場合、このSOLSシステム全体を1〜2か月以内に構築して調整することを期待するのが妥当です。プロトコルの長さと複雑さにもかかわらず、書かれた原稿の詳細の量とビデオプロトコルを組み合わせることで、このプロトコルは簡単かつ迅速に従うことができるはずです。
このプロトコルには 2 つの重要なステップがあります。まず、ガルボは3つの別々の4fレンズペアの一部であるため、ガルボの配置によって多くのレンズの配置が決まります。ガルボがO1とO2の後焦点面と共役し、傾き不変スキャンを確実にするために正しくセンタリングされていることが重要です。第二に、画質はO2とO3の互いの位置合わせに非常に敏感です。ここでは、まず、O3とO2のアライメント角度が励起ライトシートの傾きと一致し、同様に傾いたFoV全体で最大限に平坦な照明を提供するように注意する必要があります。第2に、O3を正しい軸方向距離に配置して、できるだけ広い面積で平坦なFoVを維持する必要があります。第 3 に、O3 と O2 のインターフェースを通過する信号を最大化するには、O2 から正しい横方向の距離に配置する必要があります。

使用可能なFoVに関しては、このシステムは、80μm x 80μmの領域にわたって一貫した照明を備えた、平坦で信頼性の高いフィールドを達成しました。この領域はカメラが提供する最大FoVよりも小さいため、使用可能なFoVは 図13の黄色のボックスで示されています。分解能に関しては、このシステムはx軸に沿って432 nm、y軸に沿って421 nmの最小分解可能距離を達成し、これは良好なFoVの点像分布関数(PSF)に対するガウスフィットの平均σxとyを求め、2を掛けることによって測定されました。なお、このシステムはトータルNAの面で最適化されていないため、ユーザーがこのシステムよりも高い解像力を望むのであれば、大幅な改善の余地があります。このタイプのSOLS構築には互換性のある対物レンズオプションが多数あり、その多くはシステム分解能の向上に貢献しますが、リレーインターフェース8、11、13、20でのコストが高く、FoVが小さく、アライメント技術が複雑になるという欠点があります。これとは別に、ユーザーがより大きなFoVを望む場合、2Dスキャンを可能にするために2番目のガルボを組み込むことでこの目標は達成されるが、設計に統合するために追加の光学系と制御力学が必要になるだろう32。システムの変更に関する詳細は、設計プロセスに関する他の有用なリソースへのリンクとともに、当社のWebサイトページ23で提供しました。

この特定の設計のために特定のコンポーネントを改善するだけでなく、他の高解像度顕微鏡技術やモダリティをこのビルドに追加することは非常に現実的です。そのような改善の1つは、追加の励起レーザーを元の励起経路8に整列させることを含む多波長照明を組み込むことである。さらに、このタイプのSOLS設計ではサンプルにアクセスできるため、光ピンセット、マイクロ流体工学、レオメトリーなどの機能を顕微鏡に追加するのは比較的簡単です2,33。

これまでに公開されている無数のライトシートガイドと比較して、このプロトコルは、光学の経験があまりないユーザーでも役立つ理解できるレベルの指示を提供します。従来のサンプルスライドマウント機能を備えたユーザーフレンドリーなSOLSビルドをより多くの人が利用できるようにすることで、装置が利用されている、または利用できるすべての分野で、SOLSベースの研究の用途をさらに拡大できることを期待しています。SOLS機器の用途は2,34,35件と急速に増加していますが、SOLSタイプの機器には多くの利点と利用がまだ未開拓であると考えており、このタイプの機器の可能性に期待を寄せています。

ライトシート蛍光顕微鏡(LSFM)は、選択面照明顕微鏡(SPIM)、掃引共焦点面励起(SCAPE)、斜め面顕微鏡(OPM)3,4,5,6,7など、励起光をシート状に成形する高分解能蛍光イメージング技術のファミリーです1,2.落射蛍光法、全反射蛍光顕微鏡法(TIRFM)、共焦点顕微鏡法などの他の顕微鏡法とは異なり、LSFMでは光毒性が最小限に抑えられ、アクティブに画像化されているサンプルの平面のみが照射されるため、サンプルはより長い時間スケールでイメージングできます8,9,10.したがって、LSFM技術は、特に共焦点顕微鏡技術には厚すぎる3Dサンプルでさえ、長期間にわたってイメージングするのに非常に役立ちます。これらの理由により、2004年の最初の開発以来、LSFMは、生きたゼブラフィッシュやショウジョウバエの胚などの生物全体を視覚化するために、多くの生理学者、発生生物学者、神経科学者に選ばれるイメージング技術となっています3,4,6,11.この20年間で、LSFMの利点は、in vivoおよびin vitro13,14,15,17の両方で、組織11,12、細胞、および細胞内スケールを含む、徐々に小さなスケールで構造とダイナミクスを視覚化するために活用されてきました。
文献には成功したユースケースの報告があるにもかかわらず、商用LSFMシステムの高コスト(執筆時点で~25万米ドル)18,19が、この技術の普及を妨げています。DIYビルドを研究者にとって実現可能な代替手段にするために、オープンアクセスの取り組みOpenSPIM22を含む複数のビルドガイドが8,13,20,21公開されています。しかし、これまでのところ、光学の経験がほとんどない研究者は、従来のスライドマウントサンプルと互換性のない以前のLSFM設計しか使用できません(図1A)。最近の単一対物レンズライトシート(SOLS)の実装では、励起と検出の両方に単一の対物レンズを使用するため(図1C)、互換性に関する制限が克服されています5、6、8、13、20。しかし、SOLS設計の汎用性に対するコストは、イメージングのために物体面を中継、傾斜解除、および再画像化するための2つの追加対物レンズを必要とするため、ビルドの複雑さが大幅に増加することです(図1D)。複雑なSOLSスタイルのセットアップへのアクセスを容易にするために、この論文では、設計、構築、アライメントプロセス、およびスライド互換のSOLSシステムの使用に関するステップバイステップのガイドを提示します。
プロトコル自体は簡潔ですが、読者は準備手順中に他のリソースを参照して、設計またはハードウェアの考慮事項の特定の部分について詳しく知る必要があります。ただし、読者がこの設計の仕様に従う場合は、特定の光学部品の選択方法を理解する必要はないかもしれません。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65411/65411fig01.jpg"> 図1:さまざまなLSFM構成の特性。 (A)初期のLSFM設計で共通する2つの直交対物レンズを使用したセットアップ。この構成では、キャピラリーチューブまたはゲルのシリンダーを使用してサンプルを収容しますが、これは従来のスライド取り付け技術とは互換性がありません。(B)以下を示すSOLSライトシート設計の概略図:(C)サンプル面(O1)での励起と発光の両方の収集に使用される単一の対物レンズ。これにより、従来のスライドを上部に取り付けることができ、(D)リレー対物レンズシステムをSOLS放射経路に取り付けることができます。O2は発光光を集め、画像を拡大縮小します。O3は、カメラセンサーに正しい傾斜角度で飛行機を撮像します。略語:LSFM = light-sheet fluorescence microscopy;SOLS = 単一目的ライトシート;O1-O3 = 対物レンズ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65411/65411fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>

<table><tbody><tr><td>1インチ 平凹レンズ f = -50 mm</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>LC1715-A-ML</td><td>アライメントレーザー 推定コスト:$49.5</td></tr><tr><td>1" アクロマティックダブレット f = 100 mm (x3)</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-100-A-ML</td><td>L2、L4、アライメントレーザー 推定コスト:$342.42</td></tr><tr><td>1インチ アクロマティックダブレット f = 125 mm</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-125-A-ML</td><td>SL2 推定コスト:$114.14</td></tr><tr><td>1インチ アクロマティックダブレット f = 150 mm</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-150-A-ML</td><td>L3 推定コスト: $114.14</td></tr> 1<tr><td>" アクロマティックダブレット f = 150 mm</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-150-A-ML</td><td>TL2 推定コスト: $114.14</td></tr><tr><td>1" アクロマティックダブレット f = 45 mm</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-045-A-ML</td><td>L1 推定コスト: $114.14</td></tr> 1<tr><td>" アクロマティックダブレット f = 75 mm</td><td>Thorlabs</td><td>AC254-075-A-ML</td><td>SL1 推定コスト: $114.14</td></tr><tr><td>1インチ シリンドリカル レンズ f = 100 mm</td><td>Thorlabs</td><td>LJ1567RM</td><td>CL3 推定コスト: $117.62</td></tr><tr><td>1" シリンドリカル レンズ f = 200 mm</td><td>Thorlabs</td><td>LJ1653RM</td><td>CL2 推定コスト: $111.22</td></tr><tr><td>1インチ シリンドリカル レンズ f = 50 mm</td><td>Thorlabs</td><td>LJ1695RM</td><td>CL1 推定コスト: $117.62</td></tr><tr><td>1" マウント ピンホール、30 & マイクロ;m ピンホール径</td><td>Thorlabs</td><td>P30K</td><td>推定コスト: $77.08</td></tr> 1<tr><td>" シルバー ミラー (x3)</td> <td>Thorlabs</td><td>PF10-03-P01</td><td>M1, M2, 1 for alignment 推定コスト: $168.78</td></tr> 2<tr><td>" 楕円形ミラー</td><td>Thorlabs</td><td>PFE20-P01</td><td>M3 推定コスト: $179.98</td></tr><tr><td>2" ポスト ホルダー (x11)</td><td>Thorlabs</td><td>PH2</td><td>カスタムレーザーマウント、NDホイール、安全スクリーンの場合 推定コスト:$ 98.45</td></tr><tr><td>2"ポスト(x47)</td><td>Thorlabs</td><td>TR2</td>カスタム<td>レーザーマウントおよび光学部品の場合 推定コスト:$ 277.3</td></tr><tr><td>3"ポスト(x4)&nbsp;</td><td>ソーラブス&nbsp;</td><td>TR3</td><td>M3サポートおよびその他のマウント用 推定コスト: $24.6</td></tr><tr><td>3" ポストホルダー (x4)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>PH3</td><td>推定コスト: $38.48</td></tr><tr><td>30 から 60 mm ケージアダプター&nbsp;</td><td>Thorlabs</td><td>LCP33</td><td>O1 を取り付けるには 推定コスト: $45.42</td></tr><tr><td>30mm ケージ フィルター ホイール</td><td>Thorlabs</td><td>CFW6</td><td>NDフィルターを取り付けるには 推定コスト: $172.36</td></tr><tr><td>30mm ケージプレート (x6)</td><td>Thorlabs</td><td>CP33</td><td>アライメントケージとアライメントを構築するには laser 推定コスト: $114.54</td></tr><tr><td>30mm 直角キネマティックミラーマウント (x3)</td><td>Thorlabs</td><td>KCB1</td><td>M1とM2をマウントし、アライメントレーザー 推定コスト:$ 463.95</td></tr><tr><td>4 "ポストホルダー(x30)</td><td>Thorlabs</td><td>PH4</td><td>推定コスト:$ 320.1</td></tr><tr><td>561 nmレーザーと電源&nbsp;</td><td>オプトエンジンLLC</td><td>MGL-FN-561-100mW</td><td>励起レーザー 推定コスト: $6000</td></tr><tr><td>60mm ケージプレート (x2)</td><td>Thorlabs</td><td>LCP01</td><td>TL1 と M3 マウント 推定コスト: $88.52</td></tr><tr><td>60mm 直角キネマティック ミラー マウント</td><td>Thorlabs</td><td>KCB2</td><td>M3 マウント 推定コスト: $187.26</td></tr><tr><td>90&deg;フリップマウント</td><td>ソーラブス&nbsp;</td><td>TRF90</td><td>アライメント用 レーザー 推定コスト: $95.5</td></tr><tr><td>外部 C マウント スレッドと内部 SM1 スレッド</td><td>Thorlabs 付きアダプター&nbsp;</td><td>SM1A9</td><td>レンズチューブをカメラに接続するには 推定コスト: $20.96</td></tr><tr><td>外部 SM1 スレッドと内部 C マウント スレッド付きアダプター</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>SM1A10</td><td>チューブレンズをレンズマウントに接続するには 推定コスト: $21.82</td></tr><tr><td>外部 SM1 スレッドと内部 M25 スレッド (x2) アダプター (x2)</td><td>Thorlabs</td><td>SM1A12</td><td>O1 と O2 を取り付けるには 推定コスト: $47.06</td></tr><tr><td>外部 SM1 スレッドと内部 M26 スレッド付きアダプター</td><td>Thorlabs</td><td>SM1A27</td><td>O3 を取り付けるには 推定コスト: $22.38</td></tr><tr><td>アライメントディスク</td><td>ソーラブ&nbsp;</td><td>SM1A7</td><td>推定コスト: $20.45</td></tr><tr><td>アライメントレーザー</td><td>BISKEE</td><td></td><td>https://www.amazon.com/Tactical-Presentation-Teaching-Interactive-Adjustable/dp/B09B1VXPNM 推定費用:$ 16.98</td></tr><tr><td>自動光沢プラスチックスライド、赤&nbsp;</td><td>Chroma</td><td>92001</td><td>推定コスト: $20</td></tr><tr><td>ビームシャッター&nbsp;</td><td>ソーラブス&nbsp;</td><td>SM1SH1</td><td>レーザー光を遮断するには 推定コスト: $65.8</td></tr><tr><td>ケージ回転マウント (x3)</td><td>Thorlabs</td><td>CRM1T</td><td>CL1-3 マウントするには 推定コスト: $282.15</td></tr><tr><td>ケージシステムロッド 1" (x8)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>ER1</td><td>M3 と O1 を取り付けるには 推定コスト: $44.8</td></tr><tr><td>ケージ システム ロッド 3" (x2)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>ER3</td><td>O3 を取り付けるには 推定コスト: $14.28</td></tr><tr><td>ケージ システム ロッド 4" (x4)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>ER4</td><td>スリットを取り付けるには 推定コスト: $30.76</td></tr><tr><td>ケージ システム ロッド 8" (x2)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>ER8</td><td>チューブレンズのアライメント用 推定コスト: $25.3</td></tr><tr><td>ケージシステムロッド 12" (x8)</td><td>Thorlabs</td><td>ER12</td><td>アライメントケージ用 推定コスト: $145.36</td></tr><tr><td>カメラ</td><td>Andor</td><td>Zyla 4.2 sCMOS</td><td>推定コスト: ~$14,000</td></tr><tr><td>クランプフォーク (x35)</td><td>Thorlabs</td><td>CF125</td><td>ポストマウントをクランプダウンするには 推定コスト: $338.8</td></tr><tr><td>カバーガラス、22 x 22 mm&nbsp;</td><td>Corning</td><td>2850-22</td><td>スライドサンプル用 推定コスト: $265</td></tr><tr><td>ダイクロイック&nbsp;</td><td>AVR</td><td>DI01-R405/488/561/635-25x36</td><td>励起/発光経路を分割するには 推定コスト: $965</td></tr><tr><td>ダブテール変換ステージ</td><td>Thorlabs</td><td>DT12</td><td>ピンホールを翻訳するには 推定コスト: $90.55</td></tr><tr><td>エミッション フィルター</td><td>Thorlabs</td><td>FELHO600</td><td>推定コスト: $140.99</td></tr><tr><td>すりガラス アライメント ディスク (x2)</td> <td>Thorlabs</td><td>DG10-1500-H1</td><td>アライメントケージと中間平面の場合 推定コスト: $75.14</td></tr><tr><td>Function Generator</td><td>Hewlett-Packard</td><td>HP 33120A 15 MHz</td><td>ガルボを制御するには 推定コスト: $900</td></tr><tr><td>ガルバノメーター - 1D 大ビーム径システム</td><td>Thorlabs</td><td>GVS011</td><td>推定コスト: $1715.78</td></tr><tr><td>ガルバノメーター 電源</td><td>Siglent</td><td>SPD3303C</td><td>推定コスト: $300</td></tr><tr><td>Gelrite</td><td>研究製品インターナショナル</td><td>G35020-100.0</td><td>3Dビーズサンプル用ゲランガム 推定費用:$ 68.25</td></tr><tr><td>FIJIソフトウェア</td><td>オープンソース</td><td></td><td>https://imagej.net/software/fiji/downloads からダウンロード推定コスト:無料</td></tr><tr><td>ホットプレート/スターラー</td><td>コーニング</td><td>6795-220</td><td>サンプル溶液の準備用 推定コスト:$ 550</td></tr><tr><td>K-Cubeブラシ付きモーター</td><td>コントローラーThorlabs</td><td>KDC101</td><td>ドライブZ825B 推定コスト:$ 757.51</td></tr>キ<tr><td>ネマティックマウント</td>ThorlabsKM100Sダイ<td></td><td></td><td>クロイック マウントする推定コスト:$ 92.01</td></tr><tr><td>キネシスソフトウェア</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td></td><td>https://www.thorlabs.com/newgrouppage9.cfm?objectgroup_id=10285 からダウンロード費用の目安:無料の</td></tr><tr><td>レーザーライトブロッカー&nbsp;</td><td>ソーラブス&nbsp;</td><td>LB1</td><td>NDフィルター反射用 推定コスト:$57.65</td></tr><tr><td>レーザーマウント</td><td>カスタムメイド</td><td></td><td>3Dプリント 推定コスト:N/A</td></tr><tr><td>レーザー安全スクリーン(x2)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>TPS4</td><td>迷走レーザー光を遮断するための 推定コスト: $92.02</td></tr><tr><td>レーザー スキャニング チューブ レンズ</td><td>Thorlabs</td><td>TTL200MP</td><td>TL1 推定コスト: $1491</td></tr><tr><td>レンズ マウント (x10)&nbsp;</td><td>Thorlabs</td><td>LMR1</td><td>すべてのレンズと追加のアライメントミラーを取り付けるには. 推定コスト: $164.7</td></tr><tr><td>マグネティックルーラー</td><td>Thorlabs</td><td>BHM4</td><td>アライメントを確認する 推定コスト: $52.74</td></tr><tr><td>Micro-Manager ソフトウェア&nbsp;</td><td></td><td></td>オープンソース<td>のダウンロード https://micro-manager.org/Download_Micro-Manager_Latest_Release 費用の目安:無料の</td></tr><tr><td>顕微鏡スライド</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック&nbsp;</td><td>12550400</td><td>スライドサンプルの場合 推定費用: $123.9</td></tr><tr><td>顕微鏡ステージ&nbsp;</td><td>ASI</td><td>FTP-2000 カスタムパーツ付き</td><td>サンプルを細かく翻訳するには 推定コスト: ~$16,000</td></tr><tr><td>ミニボルテックスミキサー&nbsp;</td><td>VWR</td><td>10153-688</td><td>サンプル調製用 推定コスト: $152.64</td></tr><tr><td>電動アクチュエータ</td><td>Thorlabs</td><td>Z825B</td><td>M1 推定コスト: $729.07</td></tr><tr><td>マウント 標準アイリス (x2)</td><td>Thorlabs</td><td>ID20</td><td>アライメント用少なくとも 2 個 推定コスト: $118.02</td></tr><tr><td>ND フィルターセット&nbsp;</td><td>ソーラブ</td><td>NDK01&nbsp;</td><td>加振強度を下げるには 推定コスト: $726.73</td></tr><tr><td>対物レンズ1</td><td>ニコン&nbsp;</td><td>Plan Apo 60X/ 1.20 WI</td><td>O1 推定コスト: ~$15,000</td></tr><tr><td>対物レンズ 2</td><td>Nikon</td><td>TU Plan Fluor 100X/0.90&nbsp;</td><td>O2 推定費用: ~$6,000</td></tr><tr><td>対物レンズ 3</td><td>ミツトヨ</td><td>Plan Apo HR 50X/0.75</td><td>O3 推定コスト: ~$6,800</td></tr><tr><td>OPM 傾き補正ソフトウェア</td><td>オープンソース</td><td></td><td>画像処理用。https://github.com/QI2lab/OPM からダウンロード推定コスト:無料の</td></tr><tr><td>フォトダイオードパワー</td><td>センサーThorlabs&nbsp;</td><td>S121C</td><td>レーザー強度の測定用 推定コスト: $379.68</td></tr><tr><td>ポジティブ グリッド歪み ターゲット</td><td>Thorlabs</td><td>R1L3S3P</td><td>明視野アライメント 推定コスト: $267.87</td></tr><tr><td>パワー メーター デジタル コンソール</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>PM100D</td><td>レーザー強度の測定用 推定コスト: $1245.48</td></tr><tr><td>Rhodamine 6G</td><td>Thermo Scientific&nbsp;</td><td>J62315.14</td><td>蛍光コーティングスライドサンプルの場合 推定コスト:27.7ドル</td></tr>ポスト<tr><td>Thorlabs用直角クランプ</td><td>&nbsp;</td><td>RA90</td><td>M3サポートとフリップダウンミラーの場合 推定コスト:$ 32.46</td></tr><tr><td>RMSスレッドケージプレート(x2)&nbsp;</td><td>ソーラブス&nbsp;</td><td>CP42</td><td>アライメント用レーザー 推定コスト: $70.56</td></tr><tr><td>せん断板 2.5-5.0 mm</td><td>Thorlabs</td><td>SI050P&nbsp;</td><td>推定費用: $182.85</td></tr><tr><td>せん断プレート5.0-10.0 mm</td><td>Thorlabs</td><td>SI100P</td><td>推定コスト:$ 201.47</td></tr>せん断<tr><td>プレート10.0-25.4 mm</td><td>Thorlabs</td><td>SI254P</td><td>推定コスト:$ 236.42</td></tr>せん断<tr><td>プレート表示画面</td><td>Thorlabs</td><td>SIVS</td><td>推定コスト:$ 337.74</td></tr><tr><td>1-3 mmプレートThorlabs</td><td></td><td>SI035</td><td>コリメーションチェック用 推定コスト:$ 465.85</td></tr><tr><td>スリッポンポストカラー(x35)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>R2</td>ポスト<td>を維持するため 推定コスト:$ 208.25</td></tr>ス<tr><td>リット</td><td>ThorlabsVA100</td><td></td><td>推定コスト:$ 294.64</td></tr><tr><td>スロット付きレンズチューブ、3 "</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>SM1L30C</td><td>アライメントレーザーの場合 推定コスト:77.45ドル</td></tr><tr><td>スクエアミラー、1 x 1 "</td><td></td><td></td><td>https://www.amazon.com/Small-Square-Mirror-Pieces-Mosaic/dp/B07FBNMDC1/ref=asc_df_B07FBNMDC1/?tag=hyprod-20&linkCode=df0&hva did = 642191768069&hvpos=&hvne tw=g&hvrand=1336734911900437 4691&hvpone=&hvptwo=&hvqmt= &hvdev=c&hvdvcmdl=&hvlocint=& hvlocphy=9031212&hvtargid=pla-1 943952718742&gclid=Cj0KCQiA6L yfBhC3ARIsAG4gkF_AYBpn5EdGL q3mc-RU-nanT5vM4ac9r3-obbzqJoWKPkIPIJU6e1caAjWmEA Lw_wcB&th=1 推定コスト: $14.76</td></tr><tr><td>スタッカブル レンズ チューブ 1/2" (x3)</td> <td>Thorlabs</td><td>SM1L05</td><td>CL1-3 マウント 推定コスト: $40.86</td></tr><tr><td>スタッカブル レンズ チューブ 1"</td> <td>Thorlabs</td><td>SM1L10</td><td>O3 マウント 推定コスト: $15.41</td></tr><tr><td>スタッカブル レンズ チューブ 2" (x2)</td><td>Thorlabs</td><td>SM1L20</td><td>カメラ パス 推定コスト: $35.7</td></tr><tr><td>スタッズ付き台座ベースアダプター (x37)</td><td>Thorlabs&nbsp;</td><td>BE1</td><td>ポスト マウントをテーブルに取り付けるには 推定コスト: $400.71</td></tr><tr><td>トランスレーション レンズ マウント (x3)</td> <td>Thorlabs</td><td>LM1XY</td><td>ピンホール、O2、O3 を細かく翻訳するには 推定コスト: $441</td></tr><tr><td>標準マイクロメータ付きトランスレーション ステージ (x2)</td> <td>Thorlabs</td><td>PT1/M</td><td>TS1-2 推定コスト: $647.54</td></tr><tr><td>トラベル マニュアル トランスレーション ステージ</td><td>Thorlabs</td><td>CT1A</td><td>O3ケージ変換マウント 推定コスト:497.3ドル</td></tr><tr><td>チューブレンズ</td><td>ニコン</td><td>MXA20696</td><td>TL3 推定コスト:359ドル</td></tr><tr><td>ホワイトマウントLED</td><td>ソーラブ&nbsp;</td><td>MNWHL4</td><td>明視野光源 推定コスト:171.28ドル</td></tr><tr><td>&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;&nbsp;</td><td>推定総費用: $84,858.98</td></tr><tr><td>&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;&nbsp;</td><td>&nbsp;&nbsp;</td><td>著者らは、多くの部品が中古で購入されたことを指摘しています。ここでは、すべての商品の小売価格を反映させようと試みましたので、特定の中古商品、特に高価な商品を購入することで、総コストを大幅に削減することができます。</td></tr><tr><td>オプションコンポーネント</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Grasshopper3 USB3</td><td>FLIR&</td><td>nbsp;GS3-U3-23S6C-C</td><td>アライメント中の診断チェック用。代わりにAcquisitonカメラを使用できますが、後で再調整する必要があります. 推定コスト: $1089</td></tr></tbody></table>

細胞骨格ネットワークの可視化のためのカスタマイズ可能な単一対物レンズライトシート蛍光顕微鏡の設計と構築

Design and Building of a Customizable, Single-Objective, Light-Sheet Fluorescence Microscope for the Visualization of Cytoskeleton Networks

再構成された細胞骨格複合体は、非平衡ソフトマターを研究するための貴重なモデル系として浮上しています。これらの3D高密度ネットワークのダイナミクスを忠実に捉えるには、蛍光共焦点顕微鏡によく見られる光学セクショニングが必要です。しかし、ライトシート蛍光顕微鏡(LSFM)の最近の開発により、費用対効果が高く、時には優れた代替法として確立されています。光学系にあまり馴染みのない細胞骨格研究者がLSFMを利用できるようにするために、既製のコンポーネントから汎用性の高いライトシート蛍光顕微鏡を構築するためのステップバイステップの初心者向けガイドを紹介します。従来のスライドサンプルでのサンプルマウントを可能にするために、このLSFMは、励起と発光の両方の収集に単一の対物レンズを使用する単一対物レンズライトシート(SOLS)設計に従っています。SOLSの各コンポーネントの機能については、読者が特定のニーズに合わせて計測器を変更し、設計できるように十分に詳細に説明しています。最後に、キネシン駆動の微小管ネットワークにおけるアスターを可視化することにより、このカスタムSOLS装置の使用を実証します。

ジェランガムに埋め込まれた1μmビーズの体積スキャンを実施しました。 図14 は、傾き補正されたボリュームスキャンのx、y、z方向に沿った最大強度投影を示しています。
<img alt="Figure 14" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65411/65411fig14.jpg"> 図14:ジェランガム中の1 μm蛍光ビーズの体積イメージング。 傾き補正されたボリュームスキャンの最大強度投影が表示されます。スケールバー = 30 μm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65411/65411fig14large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
私たちは、微小管アスターのサンプルの体積スキャンを行うことにより、再構成された細胞骨格ネットワークを特徴付けるために、単一対物レンズのライトシート顕微鏡を使用することを実証しました。簡単に言うと、ローダミン標識されたタキソール安定化された微小管は、GTPによって再構成された二量体から重合されました。次に、重合後、ストレプトアビジンベースのキネシンモータークラスターをATPとともにサンプルに混合し、最終濃度が6 μMの微小管、0.5 μMのキネシン二量体、および10 mM ATPになりました。タキソール安定化微小管およびキネシンモータークラスターの調製のための広範なプロトコルおよびガイドは、Mitchson LabおよびDogic LabのWebサイト25,26で見つけることができます。サンプルを顕微鏡スライドに静かにピペットで移し、密封し、8時間放置してからイメージングし、運動活動を停止してサンプルがアスターに似た安定した構造状態に達するようにしました。
再構成された細胞骨格系の研究では、共焦点顕微鏡または落射蛍光顕微鏡を使用して標識フィラメントを画像化することが最も一般的です。しかしながら、これらの技術は両方とも、高密度の3D試料を画像化する能力において制限されている27。in vitroの細胞骨格を用いた活性物質研究では、試料を準2D2Dに制約することで多くの進歩が見られましたが28,29、細胞骨格ネットワークは本質的に3Dであり、現在の多くの努力は、3D試料でしか生じない効果を理解することにあり29,30、したがって、高解像度の3Dイメージングの必要性を生み出しています。
<img alt="Figure 15" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65411/65411fig15.jpg"> 図15:単一対物ライトシート顕微鏡による再構成された細胞骨格サンプルの3D可視化の促進。 (A)Leica DMi8レーザー走査型共焦点顕微鏡で取得した蛍光微小管アスターの画像。画像は、z-スキャンのさまざまな平面を示しています。スケールバー = 30 μm。 (B)同じサンプルの単一対物レンズライトシートセットアップで実行されたボリュームスキャンからのデコンボリューションされたデスキュー画像。スケールバー = 30 μm。ここでの傾き補正された画像領域は、 図13Bに示した使用可能なFoV(黄色のボックス)に対応しています。共焦点はカバーガラス付近の単一平面のイメージングに優れていますが、蛍光サンプルの密度は、イメージング面の下方からの追加の信号により、より高い平面でのイメージング時に複雑さを引き起こします。ライトシートは、イメージング面のみを照らすことでこの問題を回避し、zの異なる平面で均一にシャープなイメージングを可能にします。略語:SOLS = 単一目的ライトシート;FoV = 視野。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65411/65411fig15large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
図15では、キネシンモータークラスターによってアスター様構造に収縮した再構成された微小管ネットワークの体積イメージングを示しています。先行研究28,31で示したように、これらの3次元構造は中心に向かって高密度になる傾向があり、その結果、シグナルに優勢な明るい蛍光領域が生じます。カバーガラス付近(低z準位)のイメージング面では、共焦点顕微鏡(図15A)により、アスターの周囲の単一フィラメントを解像できますが、上方からの焦点の合っていない蛍光シグナルにより、中心に向かってバックグラウンドが付加されます。ただし、zで数ミクロン移動すると、アスターの焦点が合っていない密な部分がイメージング面の信号で優勢になるため、画像の品質が急速に低下します。ライトシートの単一面照明(図15B)は、撮像面の上下のアスターの高密度部分からの焦点の合っていない信号を排除し、したがって、平面間で同等の画質を可能にします。高品質で信頼性の高い体積スキャンデータを生成するライトシートの能力は、再構成された細胞骨格系における3D現象の視覚化と特性評価の可能性を開きます。

このプロトコルでは、単一対物レンズのライトシート蛍光顕微鏡の構築方法と、細胞骨格ネットワークを可視化するためのその使用法について詳しく説明します。

Reconstituted cytoskeleton composites have emerged as a valuable model system for studying non-equilibrium soft matter. The faithful capture of the ...

私たちの研究は、平衡状態から遠く離れた材料におけるトランスワークダイナミクス、局所構造、および機械的特性の関係に関する知識を深めることを目的としています。細胞骨格ネットワークのような平衡状態から遠く離れた物質を可視化するには、蛍光ライトシート顕微鏡が最適である技術的に困難な作業である光退色による損傷を最小限に抑えながら、サンプルの体積全体にわたって同等の画質で高密度の3次元サンプルをイメージングする能力が必要です。蛍光ライトシート顕微鏡システムは、優れた光学セクショニング機能を備えているため、光退色を最小限に抑えながら、これらの厚い3次元サンプルを長時間の時間スケールでイメージングすることができます。特に、今回紹介する単一対物レンズライトシートシステムは、従来のスライドマウントサンプルと互換性があり、非常に汎用性の高いツールです。単独の対物レンズライトシートガイドの圧倒的多数は、光学に関する豊富な経験を持つユーザー向けに書かれています。複雑な単一対物レンズのライトシートスタイルのセットアップをよりアクセスしやすくするために、この詳細なガイドでは、エントリーレベルの光学コースの深い知識を持つユーザーが従うことができる手順を提供します。

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Research

JoVE Journal

Biology

生物学

彼らはネイティブの微小環境での進化として、多くの生物学的および臨床的状況では、細胞プロセスを研究するのが有利である。ここでは、細胞培養、動物実験、および患者の臨床試験ではリアルタイムイメージングを提供できる低コストの光ファイバ顕微鏡の組み立てと使用方法を説明します。...

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このプロトコルは、シート光顕微鏡のセットアップとCのin vivoイメージングのために、その実装について説明します虫の胚。...

のための簡単​​なシート光顕微鏡を設定する<em&gt;トトで</em&gt;イメージングの<em&gt; C.虫</em&gt;開発

単一平面照明顕微鏡法のためのモジュール（SPIM）を容易に反転広視野顕微鏡に適合し、3次元細胞培養に最適化されて記載されている。試料は、長方形のキャピラリー内に配置され、マイクロ流体システムを介して蛍光色素、薬剤または薬物は、少量で適用することができる。...

単一平面照明モジュールと広視野顕微鏡用マイクロキャピラリーアプローチ

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学ぶ単一対物レンズライトシート蛍光顕微鏡の構築法。細胞骨格ネットワークの三次元可視化により、光漂白を最小限に抑えながら高密度サンプルの長時間観察が可能になり、細胞力学研究に貢献します。

細胞骨格ネットワークの可視化のためのカスタマイズ可能な単一対物レンズライトシート蛍光顕微鏡の設計と構築

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