Name: 自動セルプロセッサーでのキメラ抗原受容体T細胞製造 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-18T14:15:00.000+00:00
Duration: 6 min 18 s
Description: 学ぶ自動セルプロセッサーを用いたCAR T細胞の半自動製造法。閉鎖システムで臨床グレードの細胞を低コストかつ柔軟に生産する手法を解説し、がん免疫療法への応用可能性を示す。

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著者らは、この研究に対するいくつかの個人および組織の貢献に感謝したいと思います。Cell and Gene Therapy LaboratoryとPenn Translational and Correlative Studies Laboratoryは、IND申請のためのプロセス開発と準備において貴重な支援を提供しました。Melissa Varghese と Amanda DiNofia は、この原稿の根底にある IND 提出のプロセス開発と準備に貢献しました。この研究は、フィラデルフィア小児病院の細胞・遺伝子治療共同の加速助成金の支援を受けました。また、Miltenyi Biotecの技術および研究支援にも感謝の意を表します。 図1 は、Copyright © 2023 Miltenyi Biotec B.V. & Co. KGによって保護されています。無断転載を禁じます。

臨床規模のCAR-T細胞製造のための自動処理装置

<ol><li>Maude, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tisagenlecleucel+in+children+and+young+adults+with+B-cell+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Tisagenlecleucel in children and young adults with B-cell lymphoblastic leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 378 (5), 439-448 (2018).</li>
<li>Shah, N. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bispecific+anti-CD20%2C+anti-CD19+CAR+T+cells+for+relapsed+B+cell+malignancies%3A+A+phase+1+dose+escalation+and+expansion+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bispecific anti-CD20, anti-CD19 CAR T cells for relapsed B cell malignancies: A phase 1 dose escalation and expansion trial.</a> Nature Medicine. 26 (10), 1569-1575 (2020).</li>
<li>Maude, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor+T+cells+for+sustained+remissions+in+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor T cells for sustained remissions in leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 371 (16), 1507-1517 (2014).</li>
<li>Grupp, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+antigen+receptor-modified+T+cells+for+acute+lymphoid+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric antigen receptor-modified T cells for acute lymphoid leukemia.</a> New England Journal of Medicine. 368 (16), 1509-1518 (2013).</li>
<li>Maude, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+humanized+CD19-targeted+chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29-modified+T+cells+in+children+and+young+adults+with+relapsed%2Frefractory+acute+lymphoblastic+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Efficacy of humanized CD19-targeted chimeric antigen receptor (CAR)-modified T cells in children and young adults with relapsed/refractory acute lymphoblastic leukemia.</a> Blood. 128 (22), 217(2016).</li>
<li>Mock, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+manufacturing+of+CAR-T+cells+for+adoptive+immunotherapy+using+CliniMACS+Prodigy%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Automated manufacturing of CAR-T cells for adoptive immunotherapy using CliniMACS Prodigy.</a> Cytotherapy. 18 (8), 1002-1011 (2016).</li>
<li>Fernández, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GMP-compliant+manufacturing+of+NKG2D+CAR+memory+T+cells+using+CliniMACS+Prodigy%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">GMP-compliant manufacturing of NKG2D CAR memory T cells using CliniMACS Prodigy.</a> Frontiers in Immunology. 10 (10), 2361(2019).</li>
<li>Zhu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-system+manufacturing+of+CD19+and+dual-targeted+CD20%2F19+chimeric+antigen+receptor+T+Cells+using+CliniMACS+Prodigy+device+at+an+academic+medical+center%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Closed-system manufacturing of CD19 and dual-targeted CD20/19 chimeric antigen receptor T Cells using CliniMACS Prodigy device at an academic medical center.</a> Cytotherapy. 20 (3), 394-406 (2018).</li>
<li>Zhang, W., Jordan, K. R., Schulte, B., Purev, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+clinical+grade+CD19+chimeric+antigen+receptor+T+cells+produced+using+automated+CliniMACS+prodigy+system%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Design%2C+Development+and+Therapy%22%5BJournal%5D)">Characterization of clinical grade CD19 chimeric antigen receptor T cells produced using automated CliniMACS prodigy system.</a> Drug Design, Development and Therapy. 12 (12), 3343-3356 (2018).</li>
<li>Abou-El-Enein, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scalable+manufacturing+of+CAR+T+cells+for+cancer+immunotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Cancer+Discovery%22%5BJournal%5D)">Scalable manufacturing of CAR T cells for cancer immunotherapy.</a> Blood Cancer Discovery. 2 (5), 408-422 (2021).</li>
<li>Miltenyi Biotec. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22CliniMACS+Prodigy+User+Manual%22">CliniMACS Prodigy User Manual</a>. , https://static.miltenyibiotec.com/asset/150655405641/document_h0fd9i4al17q32uhfuf4h7lu25?content-disposition=inline (2021).</li>
<li>Ghassemi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+manufacturing+of+non-activated+potent+CAR+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biomedical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Rapid manufacturing of non-activated potent CAR T cells.</a> Nature Biomedical Engineering. 6 (2), 118-128 (2022).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Chemistry%2C+manufacturing%2C+and+control+%28CMC%29+information+for+human+gene+therapy+investigational+new+drug+applications+%28INDs%29+guidance+for+industry%22">Chemistry, manufacturing, and control (CMC) information for human gene therapy investigational new drug applications (INDs) guidance for industry</a>. , https://www.fda.gov/media/113760/download (2020).</li>
<li>U.S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Considerations+for+the+development+of+chimeric+antigen+receptor+%28CAR%29+T+cell+products+draft+guidance+for+industry%22">Considerations for the development of chimeric antigen receptor (CAR) T cell products draft guidance for industry</a>. , https://www.fda.gov/media/156896/download (2022).</li>
</ol>

S.K.、S.G.、およびY.W.は、Miltenyi Biotecから研究支援を受けています。

CAR-T細胞療法は、B細胞やその他の悪性腫瘍に対する有望な治療アプローチとして浮上しています。しかし、従来のCAR-T細胞の製造方法には、高コスト、労働集約的な生産、汚染のリスクを高めるオープンステップなど、いくつかの制限があります。最近では、Miltenyi CliniMACS Prodigy(「プロセッサ」)を含むいくつかの半自動プラットフォームが登場し、これらの制限に対処しています。T細胞形質導入(TCT)プロセスは、本稿で説明するプロセッサに統合されており、閉鎖系におけるT細胞の濃縮、活性化、ウイルス形質導入、培養増殖、および回収を網羅しています。競合する自動細胞処理プラットフォームは、現時点ではあまり広く使用されていませんが、培養パラメータの工程内モニタリングが優れている場合、機器や材料コストが有利であるか、設置面積が小さいため、専用のクリーンルームスペースではなくバイオセーフティキャビネットで使用できる可能性があります。特定のアプリケーションと環境に最適なプラットフォームを選択することが重要です。
CAR-T細胞療法などの細胞・遺伝子治療の大きな限界は、市販品のコスト...

キメラ抗原受容体(CAR)を発現するように操作されたT細胞の養子移植は、難治性B細胞悪性腫瘍患者の治療において顕著な有効性を示しています1,2,3,4,5。しかし、CAR-T細胞の従来の製造方法は、労働集約的で時間がかかり、高度に専門的な手順を実行するために高度な訓練を受けた技術者を必要とします。例えば、自家CAR-T細胞製剤の従来の製造プロセスでは、密度勾配遠心分離、水簸または磁気分離によるT細胞の濃縮、活性化、滅菌フラスコ内のウイルスベクターによる形質導入、回収および製剤化前のバイオリアクターでの増殖が含まれます。最近では、このプロセスを部分的に自動化することを目的としたさまざまなシステムが登場しています。例えば、Miltenyi CliniMACS Prodigy(以下、「プロセッサ」と呼ぶ)は、これらのステップの多くを自動化された方法で実行できる自動細胞処理デバイスである6,7,8,9。従来のCAR-T製造方法と自動化されたCAR-T製造方法の詳細な議論は、最近のレビュー記事10で紹介されています。
このプロセッサは、造血前駆細胞の処理用に米国食品医薬品局(FDA)が承認した医療機器であるCliniMACS Plusの機能に基づいて構築されています。プロセッサは、細胞の自動洗浄、分画、および培養を可能にする細胞培養ユニットを備えています(図1)。T細胞形質導入(TCT)プロセスは、手作業によるCAR-T細胞製造をほぼ再現するプロセッサデバイス内のプリセットプログラムです。TCTでは、グラフィカル・ユーザー・インターフェースを使用してカスタマイズ可能なセル処理が可能です(「アクティビティ・マトリックス」、 図2)。プロセッサは多くのステップを自動化し、複数のデバイスの機能を1台のマシンに統合するため、技術者によるトレーニングや専門的なトラブルシューティングスキルが少なくて済みます。すべてのステップは密閉されたシングルユースのチューブセット内で実行されるため、プロセッサは、オープンな製造プロセスで許容できると見なされるよりも厳格でない空気処理インフラストラクチャを備えた施設で操作できます。たとえば、ISOクラス8(EUグレードCに相当)として認定された施設でプロセッサを運用しています。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65488/65488fig01.jpg"> 図1:T細胞形質導入システムを用いたCAR-T細胞の作製。 図は、チューブセットを取り付けたCPUです。チューブセットにより、処理バッファー、培地、レンチウイルスベクターを含むバッグなどの他のコンポーネントを滅菌溶接で接続できます。白血球アフェレーシス産物をアプリケーションバッグに加えると、T細胞選択ビーズで標識し、分離カラムに通してから、再アプリケーションバッグに移すことができます。次に、選択した細胞を培養用の機器の培養ユニットに向け、活性化試薬で活性化します( 材料表を参照)。最終産物はターゲットセルバッグに集められます。プロセス全体を通して、品質管理のためにサンプルを無菌的に除去することが可能です。円の内側の灰色の数字は、チューブセットに液体経路を通すプロセッサ上の番号付きバルブを表します。 11より許可を得て転載。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65488/65488fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65488/65488fig02.jpg"> 図2:アクティビティマトリクス T細胞の選択と活性化の後、CAR-T細胞製造プロセスの残りの部分は完全にカスタマイズ可能です。アクティビティの追加や削除、適切な日時のスケジュール設定が可能で、アクティビティ後の培養量(Volume)を指定できます。例えば、形質導入活性は、1日目の午前10:00に開始するように構成され、活性終了時の培養量は100mLとして設定されました。アクティビティマトリクスは、栽培期間中に編集することができます。プロセスの状態は、処理装置の統合画面で監視できます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65488/65488fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるには、ここをクリックしてください。</a>
この原稿の目的は、プロセッサーを使用したCAR-T細胞の製造の詳細なウォークスルーを提供し、さらに、規制当局が治験薬(IND)申請を承認するために必要とする可能性のある工程内および製品リリース試験に関するガイダンスを提供することです。提示されたプロトコルは、ベンダーが推奨するアプローチに近いものであり、現在、単一施設の医師主導の第I/II相臨床試験で評価されているIND 28617の基礎となるプロトコルです。この試験は、このプロセッサを使用して、B細胞性急性リンパ芽球性白血病(B-ALL)またはB系統リンパ芽球性リンパ腫(B-Lly)の患者に対するヒト化CD19指向自家CAR-T細胞を製造することの安全性と有効性を判断することを目的としています[NCT05480449]。この試験は2022年9月に開始され、0歳から29歳のB-ALLまたはB-Llyの患者さん89人までを登録する予定です。試験の結果を原稿で報告します。
この原稿は、従うべき手順を含むプロトコルとして提示されていますが、他の人が独自のCAR-T細胞製造プロセスの最適化を開始するための出発点と見なされるべきであることを指摘したいと思います。提示されたプロトコルの可能なバリエーションの非包括的なリストには、次のものが含まれます:凍結保存されたT細胞の代わりに新鮮なT細胞を出発物質として使用する。T細胞濃縮の異なる方法を使用するか、またはそれを完全に省略する。IL2の代わりにIL7 / IL15などの異なる培地およびサイトカインカクテルを使用する。ヒトAB血清の濃度を変化させるか、またはそれを完全に省略する。形質導入のタイミング「マルチヒット」形質導入を使用する。さまざまな攪拌、培養量、および給餌スケジュール。核酸または非レンチウイルスベクターのエレクトロポレーションを含むさまざまな遺伝子導入方法を使用する。異なる最終製剤緩衝液および/または凍結保護剤を使用する。CAR-T細胞を凍結保存する代わりに、後で注入するために新鮮に注入します。これらの変動は、治療薬の細胞組成および効力に重大な影響を与える可能性がある。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>プロセス全体のステップ</td>
			<td>プロセス日</td>
			<td colspan="4">製品仕様</td>
		</tr><tr><td>細胞エンリッチメント</td>
			<td rowspan="2">0日目</td>
			<td colspan="4">CD4+/CD8+ T細胞の選択</td>
		</tr><tr><td>細胞の活性化</td>
			<td colspan="4">T細胞培養の播種と活性化</td>
		</tr><tr><td>細胞形質導入</td>
			<td>1日目</td>
			<td colspan="4">レンチウイルス形質導入(培養量100 mL)</td>
		</tr><tr><td rowspan="12">細胞増殖(細胞の合成)</td>
			<td>2日目</td>
			<td colspan="4">--</td>
		</tr><tr><td>3日目</td>
			<td colspan="4">培養洗浄(1サイクル);シェーカーが作動しました。培養容量が200 mLに増加</td>
		</tr><tr><td>4日目</td>
			<td colspan="4">--</td>
		</tr><tr><td>5日目</td>
			<td colspan="4">フィード(50 mL);培養量が最終容量250 mLに達する</td>
		</tr><tr><td>6日目</td>
			<td colspan="4">インプロセスサンプル;培地交換 (-125 mL / +125 mL)</td>
		</tr><tr><td>7日目</td>
			<td colspan="4">培地交換(-150 mL / +150 mL)またはハーベスト</td>
		</tr><tr><td>8日目</td>
			<td colspan="4">インプロセスサンプル;培地交換(-150 mL / +150 mL)またはハーベスト</td>
		</tr><tr><td>9日目</td>
			<td colspan="4">培地交換(-180 mL / +180 mL)またはハーベスト</td>
		</tr><tr><td>10日目</td>
			<td colspan="4">インプロセスサンプル;培地交換(-180 mL / +180 mL)またはハーベスト</td>
		</tr><tr><td>11日目</td>
			<td colspan="4">培地交換(-180 mL / +180 mL)またはハーベスト</td>
		</tr><tr><td>12日目</td>
			<td colspan="4">培地交換(-180 mL / +180 mL)またはハーベスト</td>
		</tr><tr><td>13日目</td>
			<td colspan="4">収穫</td>
		</tr></tbody></table>表1:プロセスのタイムラインと概要。この表は、現在の臨床試験で採用されているTCTプロセスステップをまとめたものである[NCT05480449]。このプロセスは、CD4+/CD8+の選択、培養播種、および0日目の活性化によるT細胞濃縮から始まり、1日目に形質導入が続きます。細胞を48時間休ませた後、培養洗浄、培養容量を200mLに増やし、振とう機構を用いて撹拌します。6日目に、最初の工程内サンプルが採取されます。細胞は、少なくとも 3 回の全用量の CAR-T 細胞 (患者が &lt; 50 kg の場合は 5 × 106 CAR-T 細胞/kg、それ以外の場合は 2.5 × 10 8 CAR-T 細胞) および品質管理試験 (~2 × 10 6 CAR-T 細胞) に十分な細胞が利用可能になったら回収します。または、培養物が合計4〜5 x 109細胞に達したら。略語:TCT = T細胞形質導入;CAR-T = キメラ抗原受容体T細胞;MACS = 磁気活性化セルソーティング。

<table><tbody><tr><td>12 x 75ホウケイ酸チューブ</td><td>Charles River</td><td>TL1000</td><td></td></tr><tr><td>20 mL 試薬バッグ</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-631</td><td></td></tr><tr><td>50 mL コニカルチューブ</td><td>Fisher</td><td>05-539-10</td><td></td></tr><tr><td>150 mL トランスファーセット</td><td>Fenwal</td><td>4R2001</td><td></td></tr><tr><td>2,000 mL トランスファーセット</td><td>Fenwal</td><td>4R2041</td><td></td></tr><tr><td>7AAD</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td></td><td></td>BDB559925</tr><tr><td>アルコール プレップ</td><td>タイコ/ヘルスケア</td><td></td><td></td></tr><tr><td>バッグ アクセス</td><td>Medline</td><td>2300E-0500</td><td></td></tr><tr><td>CD19 APC-Vio770 REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-113-643</td><td></td></tr><tr><td>CD19 CAR 検出試薬 Biotin</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-129-550</td><td></td></tr><tr><td>CD19 PE</td><td>BD</td><td>555413</td><td></td></tr><tr><td>CD3 APC</td><td>BD</td><td>340440</td><td></td></tr><tr><td>CD4 VioBright FITC REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-113-229</td><td></td></tr><tr><td>CD45 VioBlue REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-637</td><td></td></tr><tr><td>CD8 APC-Vio770 REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-681</td><td></td></tr><tr><td>セロメータ リファレンスビーズ 10um</td><td>Nexcelom</td><td>B10-02-020</td><td></td></tr><tr><td>セロメータ リファレンスビーズ 15um</td><td>Nexcelom</td><td>B15-02-010</td><td></td></tr><tr><td>セロメーター リファレンス ビーズ 5um</td><td>Nexcelom</td><td>B05-02-050</td><td></td></tr><tr><td>セロメーター スライド</td><td>Nexcelom</td><td>CHT4-SD100-002</td><td></td></tr><tr><td>CliniMACS CD4 GMP MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>276-01</td><td>CD4 試薬</td></tr><tr><td>CliniMACS CD8 GMP MicroBeads</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>275-01</td><td>CD8 試薬</td></tr><tr><td>CliniMACS PBS/EDTA緩衝液</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-021-201</td><td>緩衝液</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Origen</td><td>CP-10</td><td></td></tr><tr><td>凍結バッグ 50 mL</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>200-074-400</td><td></td></tr><tr><td>凍結バイアル、1.8 mL</td><td>Nunc</td><td>12565171N</td><td></td></tr><tr><td>凍結バイアル、4.5 mL</td><td>Nunc</td><td>12565161N</td><td></td></tr><tr><td>ヒト AB 血清</td><td>バレー バイオメディカル</td><td></td><td>滅菌ろ過、熱不活化</td></tr><tr><td>ヒト血清アルブミン 25%</td><td>Grifols</td><td>68516-5216-1</td><td></td></tr><tr><td>ヒト血清アルブミン 5%</td><td>Grifols</td><td>68516-5214-1</td><td></td></tr><tr><td>MACS GMP 組換えヒト IL-2</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-148</td><td>サイトカイン</td></tr><tr><td>MACS GMP T Cell TransAct</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>200-076-202</td><td>活性化試薬</td></tr><tr><td>MycoSeq Mycoplasma検出キット</td><td>Life Technologies</td><td>4460623</td><td></td></tr><tr><td>針、皮下 14G</td><td>メドライン</td><td>SWD200573</td><td></td></tr><tr><td>針、SlideSafe 18G</td><td>BD</td><td>B-D305918</td><td></td></tr><tr><td>ピペット チップ、2-200 &mu;L、個包装</td><td>Eppendorf</td><td>022492209</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ、50-1000 &mu;L、個包装</td><td>エッペンドルフ</td><td>022492225</td><td></td></tr><tr><td>ピペット 10 mL</td><td>フィッシャー</td><td>13-678-27F</td><td></td></tr><tr><td>ピペット 25 mL</td><td>フィッシャー</td><td>13-675-30</td><td></td></tr><tr><td>ピペット 5 mL</td><td>フィッシャー</td><td>13-678-27E</td><td></td></tr><tr><td>プラズマライト A</td><td>バクスター</td><td>2B2544X</td><td>電解液</td></tr><tr><td>プロディジー TS520 チューブ セット</td><td>ミルテニー バイオテック</td><td>170-076-600</td><td>チューブセット</td></tr><tr><td>滅菌フィールド</td><td>メドライン</td><td>NON21001</td><td></td></tr><tr><td>ストレプトアビジン PE-Vio770</td><td>ミルテニー バイオテック</td><td>130-106-793</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 1 mL</td><td>BD 309628</td><td>シ</td><td></td></tr><tr><td>リンジ 10 mL</td><td>BD</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 3 mL</td><td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 30 mL</td><td>BD</td><td>302832</td><td></td></tr><tr><td>シリンジ 50 mL</td><td>BD</td><td>309653</td><td></td></tr><tr><td>TexMACS GMP Medium</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-306</td><td>The medium</td></tr><tr><td>Triple Sampling Adapter</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>170-076-609</td><td></td></tr><tr><td>ウイルスベクター</td><td>CHOP 臨床ベクターコア</td><td></td><td>huCART19</td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biological Safetyキャビネット</td><td>The Baker Co</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Cellometer Auto 2000</td><td>Nexcelom</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CliniMACS Prodigy</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>200-075-301</td><td>プロセッサ</td></tr><tr><td>制御レート フリーザー</td><td>プレーナー/Kryosave</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Endosafe nexgen-PTS150K</td><td>チャールズ リバー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>メトラー バランス</td><td>メトラー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離</td>機 <td>サーモフィッシャー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離</td>機 <td>フィッシャー SCD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>滅菌チューブ溶接機</td><td>テルモ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>セブラチューブシーラー</td><td>セブラ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>バリサーム</td><td>バーキー</td><td></td><td>乾式融解装置</td></tr><tr><td>XN-330 血液分析装置</td><td>シスメックス</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

自動セルプロセッサーでのキメラ抗原受容体t細胞製造

Chimeric Antigen Receptor T Cell Manufacturing on an Automated Cell Processor

キメラ抗原受容体(CAR)-T細胞は、さまざまな悪性および非悪性疾患の治療のための有望な免疫療法アプローチです。CAR-T細胞は遺伝子組み換えT細胞で、細胞表面の標的を認識して結合するキメラタンパク質を発現し、標的細胞を死滅させます。従来のCAR-T細胞の製造方法は、労働集約的で高価であり、汚染のリスクを伴う可能性があります。自動化された細胞プロセッサーであるCliniMACS Prodigyは、クローズドシステムで臨床スケールで細胞治療製品を製造することを可能にし、汚染のリスクを最小限に抑えます。処理はコンピュータの制御下で半自動的に行われるため、プロセスへの人間の関与が最小限に抑えられ、時間を節約し、ばらつきやエラーを減らします。
この原稿とビデオでは、このプロセッサーを使用してCAR-T細胞を製造するためのT細胞形質導入(TCT)プロセスについて説明します。TCTプロセスには、CD4+/CD8+ T細胞の濃縮、活性化、ウイルスベクターによる形質導入、増殖、および回収が含まれます。これらのステップの順序付けとタイミングを可能にする機能であるアクティビティマトリクスを使用して、TCTプロセスを広範囲にカスタマイズすることができます。現行の適正製造基準(cGMP)に準拠したCAR-T細胞製造のウォークスルーを提供し、治験薬(IND)申請をサポートするために必要なリリーステストと前臨床試験について説明します。臨床CAR-T細胞製造に半自動プロセスを使用することの実現可能性を実証し、長所と短所について説明します。最後に、小児B細胞悪性腫瘍を標的とする現在進行中の医師主導治験[NCT05480449]を、この製造プロセスを臨床現場でどのように適用できるかの例として説明します。

NCT05480449試験の最初の3回のCAR-T製造実行の結果を 以下の表3に示します。出発物質、ベクター、培養サイトカイン、AB血清濃度は、各分析で一定に保たれました。収穫は7日目か8日目でした。1日平均細胞増殖率は46%(総細胞数の増加)であり、TCTプロセスが細胞増殖の促進に有効であることが示された。これらの結果は、プロセッサが一貫性のある再現性のあるCAR-T細胞製品を製造できることを示唆しています。
表4に要約した最終製品の試験結果は、CAR-T細胞が品質管理基準に合格したことを示しています。細胞生存率は88%から94%の間であり、CD3 T細胞の純度は89%から93%であった。重要なことに、エンドトキシン、マイコプラズマ、不妊性、複製能力レンチウイルス、および残存白血病細胞は検出されませんでした。これらの結果は、TCTプロセスが臨床使用の規制基準を満たす高品質のCAR-T細胞を産生することを裏付けるものです。
この手順のために、3つのフローサイト...

本稿では、臨床用のキメラ抗原受容体T細胞の製造プロセス、特にT細胞のウイルス形質導入および培養を行うことができる自動細胞プロセッサーの使用について詳述する。私たちは、初期段階の臨床試験のプロセス開発と実施中に考慮すべき推奨事項を提供し、落とし穴について説明します。

自動セルプロセッサーでのキメラ抗原受容体T細胞製造

Chimeric antigen receptor (CAR)-T cells represent a promising immunotherapeutic approach for the treatment of various malignant and non-malignant ...

当社のプロトコルの利点は、半自動化されたクローズドシステムでありながら、柔軟性を備えていることです。手間のかかる手順は、コンピューターによって実行される自動化に置き換えられ、コンピューターによって実行されるため、ユーザーはプロトコルをカスタマイズできます。これもすべてクローズドシステムで行われます。私たちは、病院に一般的に存在する幹細胞検査室が、市販の代替品よりも大幅に低コストで臨床グレードのCAR-T細胞を製造する能力を持っていることを発見しました。私たちのプロセスは、CAR-T細胞を他の標的に特異的に作ることや、他の種類の細胞治療や遺伝子治療薬を製造するために簡単に適応できると考えています。私たちのチームは、他のCAR-T細胞標的や新しい遺伝子治療を探求する準備ができています。より広い規模で、細胞治療と遺伝子治療は急速に拡大しており、私たちはこのエキサイティングな分野でサポートと革新を続けられることを嬉しく思います。

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このビデオは、キメラ抗原受容体(CAR)T細胞をex...

キメラ抗原受容体T細胞を作製するex vivo技術

このプロトコルの目標は、閉鎖性サイトカイン捕捉システムを組み込み、専任のスタッフやGMP施設の使用を必要としないベンチトップの自動化された第2世代細胞濃縮デバイスを使用して、病原体特異的な臨床グレードのT細胞を製造することです。作製したサイトメガロウイルスpp65特異的T細胞は、患者に直接投与することができます。...

サイトカインキャプチャシステムを用いた臨床応用のためのサイトメガロウイルス特異的T細胞の自動化された細胞濃縮

液体および固形腫瘍細胞を標的とするキメラ抗原受容体T細胞の効力を評価する定量的なインビトロ細胞質アッセイシステムを説明する。このプロトコルは、他の免疫エフェクター細胞、ならびに組み合わせ治療を評価するために拡張することができる。...

固体および造形癌細胞を標的とするキメラ抗原受容体T細胞のリアルタイム効力アッセイ

キメラ抗原受容体(CAR)T細胞を確実に生成し、その分化と機能をインビトロとインビボでテストするアプローチについて説明します。...

キメラ抗原受容体(CAR)T細胞の養子免疫療法用

このプロトコルは、適正製造基準(GMP)規格との互換性を確保し、関心のある遺伝子を持つ初代ヒトT細胞を形質導入するプロセスを概説します。...

遺伝子改変T細胞の作製のためのGMP準拠手順

このプロトコルは、レトロウイルスベクターの生産とマウスT細胞の形質導入を合理化し、マウスCAR-T細胞の効率的な生成を促進します。...

マウスキメラ抗原受容体(CAR)-T細胞の効率的な作製

このプロトコールは、ヒトキメラ抗原受容体制御性T細胞(CAR制御性T細胞)を生成および試験するための合理化されたワークフローを提供します。...

ヒトキメラ抗原受容体制御性T細胞の作製

このプロトコルは、一次T細胞の培養に必要な手順、すなわち単離、活性化、増殖、そしてmRNA電気穿孔による一時的なトランスフェクションを説明しています。さらに、表現型、活性化マーカー、生存可能性、キメラ抗原受容体(CAR)発現のフローサイトメトリー解析のためのワークフローおよび抗体パネルも提案されています。...

一次ヒトT細胞の分離、培養、そして一時的なトランスフェクションによるキメラ抗原受容体(CAR)T細胞の生成

タンパク質治療薬を製造するための製造の細胞株開発のハイスループット、自動化されたプラットフォームが記載されている。 BD...

タンパク質治療薬の製造細胞株の開発のためのハイスループット自動化されたプラットフォーム

このプロトコルは1つが糖尿病の治療のための潜在的な治療標的を見つけるために機能的なβ細胞量を調節する因子を同定することができます。プロトコルは、アデノウイルスによる遺伝子発現の操作後に膵島の複製と分離されたラット膵島のβ細胞機能を評価するための効率的な方法で構成されています。...

Adenovirally形質分離されたげっ歯類膵島におけるレプリケーションおよびβ細胞機能を評価する

学ぶ自動セルプロセッサーを用いたCAR T細胞の半自動製造法。閉鎖システムで臨床グレードの細胞を低コストかつ柔軟に生産する手法を解説し、がん免疫療法への応用可能性を示す。

自動セルプロセッサーでのキメラ抗原受容体T細胞製造

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