2023年11月10日
このプロトコルは単一セルの分類方法を使用して人間のmesenchymal幹細胞の蛍光活動化させたセル分類の使用を記述する。具体的には、シングルセルソーティングの使用は、マルチパラメトリックフローサイトメトリーベースのアプローチと組み合わせることで、不均一な集団から免疫表現型細胞の99%の純度を達成することができます。
このプロトコルは、単一のプラットフォームでヒト間葉系幹細胞を正確に特徴付け、精製するための重要な方法を詳述し、幹細胞移植などの効率的なダウンストリームアプリケーションを可能にします。これは、人工幹細胞または天然幹細胞の正確な単一細胞選別を通じて分子および細胞遺伝学的アッセイを強化する臨床ラボにとって特に重要です。精製された幹細胞集団の単離に一般的に使用される方法は、免疫磁気分離、密度勾配、またはマイクロ流体細胞ソーティングなどの技術を指します。
インデックスソーティングなどの手法により、ソートされた各細胞のトランスクリプトーム情報を抽出できるシングルセルRNAプロファイリングにリンクできます。主な課題は、サンプル品質の維持、ソーティング中およびソーティング後の細胞密度や生存率など、細胞培養条件の最適化です。さらに、装置に適したノズルサイズを選択し、ソーターにタイムリーにアクセスできるようにすることも考慮されます。
このプロトコルは、イムノフェノタイピングと目的の細胞集団の選別のための精密な汚損パネルを示しています。標準化されたサンプル品質、最適な細胞生存率、細胞集団ソーティングの密度を保証し、FACSDivaソフトウェアでソーティング実験パラメータを定義します。この方法により、特定のバイオマーカーを発現する幹細胞集団の簡単な選択とイムノフェノタイピングが可能になります。
このシンプルなプラットホームにより、ターゲット集団に基づいた効率的な選別が可能になり、その後のダウンストリームアプリケーションのための精製サンプルの取得に役立ちます。
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本プロトコルでは、蛍光活性化細胞分取(FACS)を用いたヒト間葉系幹細胞(MSC)の精密な単離および特性解析の手法について概説します。このプロトコルにより、幹細胞集団の純度を99%まで高めることができ、幹細胞移植などのさらなる応用への利用が容易になります。
ヒト脱落乳歯から免疫表現型解析済みの間葉系幹細胞(MSCs)をシングルセルソートすることは、再生研究における細胞の不均一性という重要な課題を解決します。均一なMSCサブポピュレーションの精密な分離を可能にすることで、このワークフローはダウンストリームの分化能および機能アッセイにおける予測信頼性を向上させます。本アプローチは、強固なターゲットバリデーションを支援し、初期段階の細胞治療および再生医療ポートフォリオにおける意思決定のリスクを軽減します。
この単一細胞ソーティングプロトコルは、機能解析および分化アッセイに用いる高純度で免疫表現型解析済みのMSCを提供することにより、創薬から前臨床に至る連続的な研究プロセスに統合されます。