Name: 実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系の炎症、脱髄、および軸索損傷のスコアリング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-02-23T14:35:00.000+00:00
Duration: 8 min 17 s
Description: 学ぶEAEモデルにおける組織学的スコアリング法。マウスの脊髄と脳の炎症、脱髄、軸索損傷を評価し、血清神経フィラメント軽鎖を定量することで、多発性硬化症の病態理解と治療開発に貢献する詳細なプロトコルを解説する。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. Raymond Sobel (Stanford University)には、脳と脊髄の切片をグロスで固定する方法を教えていただき、感謝します。トロント・センター・フォー・フェノゲノミクスのカイル・ロバートン氏とミラン・ガングリー氏には、埋め込み法を学び、脳と脊髄の切片の多くを切断してくれたことに感謝します。Matthew Cussick 博士と Robert Fujinami 博士 (ユタ大学) が、脊髄の髄膜下および血管周囲の炎症をスコアリングするためのプロトコルを共有してくれたことに感謝します。CD45抗体のクローンを共有してくださったShalina Ousmanに感謝します。聖ミカエル病院のKeenan Research Centre of Biomedical Researchで、ティッシュプロセッサーと組織包埋ステーションのトレーニングとこの機器のメンテナンスをしてくれたXiofang Luに感謝します。この研究は、MS Canada(SEDへの)生物医学助成金によって支援されました。カルメン・ウッチフェッリは、カナダ政府からの学生支援を受けています。ヌリア・アルバレス・サンチェスは、キーナンのポスドクフェローシップの支援を受けています。

EAE疾患の重症度を評価するための脊髄の組織学的染色

<ol><li>Constantinescu, C. S., Farooqi, N., O'Brien, K., Gran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29+as+a+model+for+multiple+sclerosis+%28MS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as a model for multiple sclerosis (MS).</a> Br J Pharmacol. 164 (4), 1079-1106 (2011).</li>
<li>Rasouli, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+GM-CSF+in+T+is+increased+in+multiple+sclerosis+and+suppressed+by+IFN-beta+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of GM-CSF in T is increased in multiple sclerosis and suppressed by IFN-beta therapy.</a> J Immunol. 194 (11), 5085-5093 (2015).</li>
<li>Zrzavy, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+%27homeostatic%27+microglia+and+patterns+of+their+activation+in+active+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Loss of 'homeostatic' microglia and patterns of their activation in active multiple sclerosis.</a> Brain. 140 (7), 1900-1913 (2017).</li>
<li>Kutzelnigg, A., Lassmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathology+of+multiple+sclerosis+and+related+inflammatory+demyelinating+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Handb+Clin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Pathology of multiple sclerosis and related inflammatory demyelinating diseases.</a> Handb Clin Neurol. 122, 15-58 (2014).</li>
<li>Glatigny, S., Bettelli, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29+as+animal+models+of+multiple+sclerosis+%28MS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) as animal models of multiple sclerosis (MS).</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 8 (11), (2018).</li>
<li>Kipp, M., Nyamoya, S., Hochstrasser, T., Amor, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis+animal+models%3A+A+clinical+and+histopathological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis animal models: A clinical and histopathological perspective.</a> Brain Pathol. 27 (2), 123-137 (2017).</li>
<li>Nikic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+reversible+form+of+axon+damage+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A reversible form of axon damage in experimental autoimmune encephalomyelitis and multiple sclerosis.</a> Nat Med. 17 (4), 495-499 (2011).</li>
<li>Croxford, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cytokine+GM-CSF+the+inflammatory+signature+of+CCR2%2B+monocytes+and+licenses+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The cytokine GM-CSF the inflammatory signature of CCR2+ monocytes and licenses autoimmunity.</a> Immunity. 43 (3), 502-514 (2015).</li>
<li>Jones, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+and+pathological+outcomes+in+MOG+35-55+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Behavioral and pathological outcomes in MOG 35-55 experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Neuroimmunol. 199 (1-2), 83-93 (2008).</li>
<li>Zuo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-dependent+gray+matter+demyelination+is+associated+with+leptomeningeal+neutrophil+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Age-dependent gray matter demyelination is associated with leptomeningeal neutrophil accumulation.</a> JCI Insight. 7 (12), 158144(2022).</li>
<li>Bannerman, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+pathology+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%3A+Studies+in+thy1-yfp+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Motor neuron pathology in experimental autoimmune encephalomyelitis: Studies in thy1-yfp transgenic mice.</a> Brain. 128, 1877-1886 (2005).</li>
<li>Cahill, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aged+hind-limb+clasping+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+models+aspects+of+the+neurodegenerative+process+seen+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Aged hind-limb clasping experimental autoimmune encephalomyelitis models aspects of the neurodegenerative process seen in multiple sclerosis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (45), 22710-22720 (2019).</li>
<li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1810-1819 (2006).</li>
<li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Passive+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Passive induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nat Protoc. 1 (4), 1952-1960 (2006).</li>
<li>Drohomyrecky, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor-delta+acts+within+peripheral+myeloid+cells+to+limit+the+expansion+of+myelin-reactive+T+cells+during+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28EAE%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor-delta acts within peripheral myeloid cells to limit the expansion of myelin-reactive T cells during experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE).</a> J. Immunol. 10, 2588-2601 (2019).</li>
<li>Osorio-Querejeta, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+innovative+animal+monitoring+device+for+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+%28%26%2334%3BI+am+D+EAE%26%2334%3B%29%3A+A+more+detailed+evaluation+for+improved+results%5BTitle%5D)+AND+%22Mult+Scler+Relat+Disord%22%5BJournal%5D)">The innovative animal monitoring device for experimental autoimmune encephalomyelitis (&#34;I am D EAE&#34;): A more detailed evaluation for improved results.</a> Mult Scler Relat Disord. 63, 103836(2022).</li>
<li>Wang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+diverse+assessment+indicators+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction and diverse assessment indicators of experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Vis Exp. (187), e63866(2022).</li>
<li>Shahi, S. K., Freedman, S. N., Dahl, R. A., Karandikar, N. J., Mangalam, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scoring+disease+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis+using+a+novel+infrared-based+automated+activity-monitoring+system%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Scoring disease in an animal model of multiple sclerosis using a novel infrared-based automated activity-monitoring system.</a> Sci Rep. 9, 19194(2019).</li>
<li>Kluver, H., Barrera, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+combined+staining+of+cells+and+fibers+in+the+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuropathol+Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">A method for the combined staining of cells and fibers in the nervous system.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 12 (4), 400-403 (1953).</li>
<li>Disanto, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+neurofilament+light%3A+A+biomarker+of+neuronal+damage+in+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Neurol%22%5BJournal%5D)">Serum neurofilament light: A biomarker of neuronal damage in multiple sclerosis.</a> Ann Neurol. 81 (6), 857-870 (2017).</li>
<li>Novakova, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+disease+activity+in+multiple+sclerosis+using+serum+neurofilament+light+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Monitoring disease activity in multiple sclerosis using serum neurofilament light protein.</a> Neurology. 89 (22), 2230-2237 (2017).</li>
<li>Pouzol, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Act-1004-1239%2C+a+first-in-class+CXCR7+antagonist+with+both+immunomodulatory+and+promyelinating+effects+for+the+treatment+of+inflammatory+demyelinating+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Act-1004-1239, a first-in-class CXCR7 antagonist with both immunomodulatory and promyelinating effects for the treatment of inflammatory demyelinating diseases.</a> FASEB J. 35 (3), 21431(2021).</li>
<li>Breakell, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Obinutuzumab-induced+B-cell+depletion+reduces+spinal+cord+pathology+in+a+CD20+double+transgenic+mouse+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Obinutuzumab-induced B-cell depletion reduces spinal cord pathology in a CD20 double transgenic mouse model of multiple sclerosis.</a> Int J Mol Sci. 21 (18), 6864(2020).</li>
<li>Aharoni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+effect+of+glatiramer+acetate+on+neurofilament+light+chain+leakage+and+glutamate+excess+in+an+animal+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective effect of glatiramer acetate on neurofilament light chain leakage and glutamate excess in an animal model of multiple sclerosis.</a> Int J Mol Sci. 22 (24), 13419(2021).</li>
<li>Sternberger, L. A., Sternberger, N. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+antibodies+distinguish+phosphorylated+and+nonphosphorylated+forms+of+neurofilaments+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Monoclonal antibodies distinguish phosphorylated and nonphosphorylated forms of neurofilaments in situ.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 80 (19), 6126-6130 (1983).</li>
<li>Mouse spinal brain map. , Available from: 
 <a target="_blank" href="Https://Mousespinal.Brain-Map.Org/Imageseries/Showref.Html">Https://Mousespinal.Brain-Map.Org/Imageseries/Showref.Html</a> (2023).</li>
<li>Kuhle, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+neurofilament+is+associated+with+progression+of+brain+atrophy+and+disability+in+early+MS%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Serum neurofilament is associated with progression of brain atrophy and disability in early MS.</a> Neurology. 88 (9), 826-831 (2017).</li>
<li>Benkert, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Serum+neurofilament+light+chain+for+individual+prognostication+of+disease+activity+in+people+with+multiple+sclerosis%3A+A+retrospective+modelling+and+validation+study%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Serum neurofilament light chain for individual prognostication of disease activity in people with multiple sclerosis: A retrospective modelling and validation study.</a> Lancet Neurol. 21 (3), 246-257 (2022).</li>
<li>D'Souza, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OGR1%2FGPR68+modulates+the+severity+of+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+regulates+nitric+oxide+production+by+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">OGR1/GPR68 modulates the severity of experimental autoimmune encephalomyelitis and regulates nitric oxide production by macrophages.</a> PLoS One. 11 (2), 0148439(2016).</li>
<li>Imagej. , Available from: 
 <a target="_blank" href="Https://www.imagej.nih.gov/lj/download.html">Https://www.imagej.nih.gov/lj/download.html</a> (2023).</li>
<li>Openmicroscopy. , Available from: 
 <a target="_blank" href="Https://www.openmicroscopy.org/bio-formats/downloads">Https://www.openmicroscopy.org/bio-formats/downloads</a> (2023).</li>
<li>Doroshenko, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Peroxisome+proliferator-activated+receptor-delta+deficiency+in+microglia+results+in+exacerbated+axonal+injury+and+tissue+loss+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Peroxisome proliferator-activated receptor-delta deficiency in microglia results in exacerbated axonal injury and tissue loss in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Front Immunol. 12, 570425(2021).</li>
<li>Soulika, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Initiation+and+progression+of+axonopathy+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Initiation and progression of axonopathy in experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> J Neurosci. 29 (47), 14965-14979 (2009).</li>
<li>Trapp, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axonal+transection+in+the+lesions+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Axonal transection in the lesions of multiple sclerosis.</a> N Engl J Med. 338 (5), 278-285 (1998).</li>
<li>Lassmann, H., Bradl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis%3A+Experimental+models+and+reality%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis: Experimental models and reality.</a> Acta Neuropathol. 133 (2), 223-244 (2017).</li>
</ol>

Shannon Dunn は、FSD Lucid Psycheceuticals のコンサルタントを務めています。

脊髄の組織学的染色は、EAE疾患の重症度を評価する上で重要なツールであり、特に疾患の急性期後の疾患回復の程度に治療群間で差がある場合に有用である。免疫細胞浸潤(CD45)、ミエリン(LFB)、軸索損傷(SMI-32)の染色は、マウスの臨床スコアの変化の根本的な原因を特徴づけるのに役立ちます。ここで説明する組織学的染色プロトコルは、炎症の視点と、ミエリンと軸索損傷の程度を提供します。さらに、示された結果は、EAEにおける全体的な神経損傷の程度を評価する方法としてsNF-L測定を検証しています。
この分析の重要なパラメータは、研究者が切片の同一性を知らされていないこと、および異なるマウスの脊髄の各レベルで同等のサンプリングがあることを確認することです。これは、炎症の重症度が臍帯のレベルが低いほど大きくなる可能性があるためです。もう一つの重要なパラメータは、実験グループのサイズです。脊髄と脳は、通常、エンドポイントでグループごとに6〜8匹のマウスから採取され、治療または遺伝子型が適度な効果サイズを持つグループ間で有意差が見られます。また、選択したマウスを平均したときに、グループ全体の代表的な平均スコアを持っていることを確認することも重要です。トラブルシューティングに関して、プロトコルの経験が浅い人が遭遇する一般的な問題は、脊髄が不十分な時間固定され、脊柱から簡単に押し出されないことです。この場合、細いハサミを使用して棘突起に沿って切り取り、柱を開いて脊髄を明らかにすることにより、脊髄を柱から手動で解剖することができます。あるいは、抗体染色の成功を妨げることなく、さらに数日間組織を固定することもできます。ここで説明する抗体クローンは、ホルマリンで最大2週間固定された組織で機能します。
脊髄の破片を埋め込むには、スキルと練習が必要です。アイルーペを着用し、ランプを埋め込みステーションに向け、断面が断面に落ちているのか縦断面にあるのかをよりよく視覚化することをお勧めします。グロッシング中に脊髄片の長さを2mm未満に保つと、断面が落ちるのを助けます。経験の浅いユーザーが遭遇するもう一つの一般的な問題は、一晩のインキュベーション中にLFBが蒸発し、スライドの半分が染色され、半分が染色されないことです。蒸発を防ぐために、ガラス染色皿は熱可塑性フィルムで密封してからラップで密封する必要があります。蒸発が起こり、切片が不均一に染色される場合は、炭酸リチウムでスライドを完全に青色除去し、LFBで一晩再染色することをお勧めします。もう1つの一般的な問題は、LFB後にユーザーが灰白質を完全に除去しないことです。プロトコルの他のステップに進む前に、個々の切片を顕微鏡で検査し、十分な量のブルーイング除去が達成されていることを確認することが重要です。さらに、CD45およびSMI-32 IHC染色は頑健に機能しますが、新しい抗体ロットごとに予備実験で抗体濃度をトラブルシューティングすることが重要です。これは、ポジティブコントロールセクション(EAE脊髄)でさまざまな濃度の抗体をテストすることによって行うことができます。初回染色には、一次抗体を添加せずに二次抗体のみで構成されるネガティブコントロールも含める必要があります。最後に、画像解析では、スライドや切片間で染色が不均一になる可能性があるため、個々の画像をしきい値にすることが重要です。
このプロトコルは、無料で入手できるソフトウェアを使用します。プロセッサー、包埋装置、またはミクロトームにアクセスできない場合、これらのステップは、これらのサービスを提供する病院ベースの病理学コアに供給できます。また、スライドスキャナーにアクセスできない場合は、ビデオカメラを備えた光学顕微鏡を使用して、脊髄または脳領域のTIFF画像を保存できます。顕微鏡ベースのワークフローでは、LFBまたはLFB/H&E切片を低倍率(倍率40倍)で撮影し、CD45およびSMI-32染色では、脊髄の腹側、背側、外側の中央にある少なくとも4つの窓を画像化します(CD45の場合は200倍、SMI-32の場合は400倍の倍率)。これらの画像に対して画像解析を行い、記載と同様の方法で染色を定量化することができる。
EAEをスコアリングするためにどのような組織学的アプローチを取るかの決定は、臨床スコアがグループ間でどの程度異なるかによって異なります。例えば、EAEの臨床スコアに著しい差がある場合(1つのグループがEAEを取得し、1つのグループがEAEを取得しなかった場合)、これは通常、末梢介性炎症の違いに関連しています。この場合、LFB / H&E染色切片の脱髄病変の存在をスコアリングするだけで十分であり、グループ間の違いが明らかになります。発症時の臨床スコアが類似しており、代わりに臨床的回復の程度に差がある場合(例: 図5Aの実験)、脳幹と小脳の脳炎症のスコアリングを含む、ここで概説されている完全な組織学的ワークフローを適用して、疾患の慢性の違いが炎症または組織損傷の違いに関連しているかどうかを区別するのが最善です。 CD45カウントによって評価された炎症の違いが見つかった場合は、T細胞(抗CD3)、浸潤単球/マクロファージ(Mac3)、およびミクログリア(Iba-1 / TMEM119)を染色するために、さらにIHC研究を行うことができます(推奨抗体クローンは 補足表3にあります)。ミクログリアの活性化は、二重標識Iba-1+TMEM-19+ ミクログリアにおけるIba-1染色の強度の増加と、セクション32のSholl分析によって評価できるミクログリア突起の収縮の増加によって反映されます。さらに、フローサイトメトリーやシングルセルRNAシーケンシングなどの技術を適用して、脳や脊髄の免疫集団の頻度と表現型をより深く特徴付けることができます。
SMI-32+軸索のカウントは、EAE32,33およびMS34の軸索損傷を検出するための高感度な方法です。SMI-32は、トランセクトされたニューロンの末端球に蓄積する重または中程度のニューロフィラメントの非リン酸化型を検出します。損傷した軸索を検出するための代替法は、軸索輸送の破壊の結果として軸索に蓄積する可能性のあるアミロイド前駆体タンパク質(APP)で染色することである33。SMI-32とAPPの染色パターンは、どちらも軸索損傷を反映しているが、通常は重なり合っておらず、異なる病状を検出していることを示している33。また、脊髄と脳の両方で進行中の軸索損傷の迅速かつ高感度な測定であるsNF-Lを測定することにより、軸索損傷の組織学的測定を補完することもできます。生きているネズミでは半日でできるという利点があります。この方法の欠点は、キットが高価であり、機械が非常に専門化されていることです。sNF-Lキットを販売する会社は、SIMOAマシンにアクセスできない人のためにサービス料金を提供しています。軸索損傷を評価する代替法は、脊髄のトルイジン青色染色切片の軸索を数えるか、または脊髄白質32の領域でSMI-31によって検出されたニューロフィラメント束を数えることによって軸索喪失をスコアリングすることである。これらはどちらも、SMI-32やsNF-L測定よりも手間のかかるアプローチです。
EAEの臨床スコアは群間で異なるが、炎症、脱髄、軸索損傷のスコアリングで群間の差が明らかにならない場合は、GFAPを用いてアストロサイトの活性化を染色することが有用である可能性がある(推奨抗体クローンについては 補足表3 を参照のこと)。アストロサイトの活性化はGFAP染色の増加と関連しており、これはDAラットの慢性EAEを含むいくつかのEAEモデルでEAEの進行と相関することが示されています35。
結論として、このプロトコルは、EAEの組織学的スコアリングを実施するための方法を説明し、分析ワークフローを提供します。

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、ヒト脱髄疾患である多発性硬化症(MS)1の最も一般的なマウスモデルです。IFN-γ(γ)およびIL-17産生ヘルパーT細胞の浸潤2、炎症性単球の浸潤3、血管周囲および髄膜下の炎症性脱髄病変の形成4、および中枢神経系(CNS)における軸索損傷4の発生を含む古典的なMS炎症性病理もEAEで観察されます5,6,7,8,9.EAEとMSの免疫メカニズムの類似性により、EAEは、ナタリズマブ、フィンゴリモド、フマル酸ジメチル、酢酸グラチラマーなど、MSに対する多くの承認された免疫ベースの治療法の有効性と作用機序をテストするための適切な前臨床モデルとなっています(1,5でレビュー)。特定のEAEレジメンは、脳内の髄膜下炎症の発症、慢性脱髄、脊髄萎縮、シナプス、およびニューロンの喪失など、軸索損傷以外の進行性MS病理学の他の側面をモデル化します6,10,11,12。したがって、EAEは、MSに対する神経保護療法の有効性をスクリーニングするための有用性を持っています。
EAEは、げっ歯類にさまざまな方法で誘導されます。能動免疫は最も一般的な誘導法であり、熱死結核菌を添加したCFAで乳化したミエリン抗原(全タンパク質またはペプチド)でげっ歯類を免疫する13。マウスの系統によっては、百日咳毒素(PTX)も免疫の0日目と2日目に投与され、疾患の浸透度が上昇します13。EAEは、ミエリン/CFAプライミングマウスから得られたミエリン特異的T細胞を健康なマウスに養子的に導入することによっても誘発され14、主要なミエリン抗原に特異的なT細胞受容体を過剰発現するマウスで自発的に発症することもあります5。
EAE疾患の重症度と進行は、通常、個別の5段階の臨床尺度を使用してスコアリングされます:1 – 尾のぐったり、2 –後肢または足の脱力感、3 –片方または両方の後肢の完全な麻痺、4 –前肢の脱力、5 –瀕死または死亡13。この臨床スコアリングシステムは、疾患発症時に発生する上行性麻痺の進行を記録するという点では健全ですが、CNS炎症発作からの回復の程度を捉える感度は低くなります。例えば、歩行が困難なマウスと、容易に歩行できるが足を掴むのが苦手なマウスの両方に、EAEスケールで2のスコアが割り当てられます。炎症反応の解消にもかかわらず、永久的な軸索損傷または喪失の存在により、EAEの急性期後のスコアは高いままである可能性があります9。EAE 9,16,17,18の臨床的欠損の違いをよりよく捉えるために、より洗練されたスコアリングシステム、行動テスト、後肢と握力の測定、および赤外線モニタリングシステムを開発するためのさまざまな試みがありました。しかし、これらのより複雑なスコアリング指標では、根本的な神経学的欠損に対する炎症と組織損傷の寄与を区別していません。したがって、EAEの重症度をスコアリングするためのゴールドスタンダードアプローチは、臨床的スコアリングと組織学的スコアリングの両方を実施することです。
ここでは、マウスの脊髄および脳標本を解剖し、パラフィンに埋め込む方法について、EAEで発生する病変形成の確率的過程を捉える方法について、プロトコルが説明されています。また、中枢神経系のミエリンを検出するKluverとBarrera19によって最初に作成されたLuxol fast blue(LFB)で切片を染色する方法のプロトコルも紹介されています。切片は、LFBのみで染色するか(脱髄解析用)、またはヘマトキシリンとエオシン(H&E)で対比染色して、炎症性病変の視覚化とスコアリングに役立てます。また、市販の抗体、免疫組織化化学(IHC)技術、および一般にアクセス可能なソフトウェアを使用して、脊髄における全白血球(CD45)、ミエリンの喪失、および損傷した軸索(SMI-32)の数を定量化するためのプロトコルも提供されています。脊髄の白血球を定量化するために使用されるプロトコルは、脳内の白血球の定量にも適用できます。
脳の軸索喪失と損傷の組織学的評価は、脳白質路が互いに平行に走っていないため、脊髄よりも比較的困難です。血清ニューロフィラメント光(sNF-L)の測定は、MS20,21における神経損傷の有望なバイオマーカーとして浮上しています。最近の研究では、この技術がEAE22,23,24に拡張されています。ここでは、低分子アッセイ(SIMOA)アッセイを用いて、生きたマウスの血清ニューロフィラメント光(sNF-L)を測定する方法を紹介します。この方法は、少量の血清しか必要とせず、生きたマウスでわずか半日で行うことができ、テストされた治療法が全体的なCNS損傷にどのように影響しているかについて迅速なフィードバックを提供します。ここに記載の方法の全ては、任意の性別または系統のマウスに適用することができる。

<table><tbody><tr><td>10% 中性緩衝ホルマリン</td><td>Σ アルドリッチ</td><td>HT501128-4L</td><td>脊髄と脳の標本の固定に使用</td></tr><tr><td>1000 mL ガラスビーカー</td><td>パイレックス</td><td>1000</td><td></td></tr><tr><td>15 mL ファルコンチューブ</td><td>スターシュテット</td><td>62.554.100</td><td>脊髄と脳の固定と保管</td></tr><tr><td>250 mL 三角フラスコ</td><td>パイレックス</td><td>4980</td><td></td></tr><tr><td>500 mL ガラスビーカー</td><td>パイレックス</td><td>1003</td><td></td></tr><tr><td>92 mm x 16 mm ペトリ皿</td><td>Starstedt</td><td>82-1473-001</td><td>組織グロッシング手順で使用</td></tr><tr><td>95% エチルアルコール</td><td>商業アルコール</td><td>P016EA95</td><td>脱水および再水和ステップ</td></tr><tr><td>ABC エリートキット</td><td>ベクター ラブラトリー</td><td>PK6100</td><td>免疫組織化学のラベリングに使用</td></tr><tr><td>アクアホールド 2 PAP ペン</td><td>コールパーマー</td><td>UZ-75955-53</td><td>免疫組織化学染色の組織切片の周りを描くために使用</td></tr><tr><td>アビジン/ビオチンブロッキングキット</td><td>ベクターラボラトリー</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>バイオセーフティキャビネット</td><td>任意の</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ビオチン化ウサギ抗ラットIgG</td><td>ベクターラブラトリー</td><td>BA-4000</td><td>CD45染色に使用</td></tr><tr><td>C57BL6/Jマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>ストック#664</td><td>これらのマウスは実験で使用されました紙で示されています。</td></tr><tr><td>遠心分離機</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ソルバル ST プラス</td><td></td></tr><tr><td>シトリソルブ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>04-355-121</td><td>ワックス脱脂に使用します。キシレン</td></tr><tr><td>DABキット</td><td>ベクターラトラト</td><td>リーSK-4100</td>の代替品です <td>免疫組織化学ddH2Oでの開発に使用されます</td></tr><tr><td></td><td>-</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>使い捨てメス</td><td>マグナ</td><td>M92-10</td><td>脊髄と脳のグロッシングに使用されます</td></tr><tr><td>DWKライフサイエンス(ウィートン)ガラス染色皿</td><td>コールパー</td><td>マーUZ-48585-60</td><td>組織化学染色と洗浄に使用されます</td></tr><tr><td>DWKライフサイエンス(ウィートン)ガラス染色ラック</td><td>コールパーマー</td><td>10061392</td><td>免疫組織化学および組織化学に使用</td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Bioshop</td><td>173772-87-1</td><td>染色 細胞質</td></tr><tr><td>羽 ミクロトームブレード</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12-634-1C</td><td>パラフィン濾紙</td></tr><tr><td></td><td>Whatman</td><td>1001110</td><td>ホルマリンの濾過に使用(グロッシング中)そしてルキソールの速い青い</td></tr><tr><td>細い外科はさみ</td><td>の精密科学用具</td><td>14160-10</td><td>頭脳および頭蓋骨の</td></tr><tr><td>Fumehood</td><td></td>を切るのに使用されて 任意の<td></td><td></td></tr><tr><td>Gibco DPBS</td><td>のフィッシャーの科学</td><td>的な14190944</td><td></td></tr><tr><td>氷河の酢酸</td><td>BioShop</td><td>ACE333.4</td><td>ルキソールの速い青い染色のプロシージャ</td></tr><tr><td>Histoplexの組織学の容器</td>Starplexで使用されて<td>Scientific</td><td>565-060-26</td><td>脊髄と脳の固定</td></tr><tr><td>過酸化水素</td><td>Fisher Chemicals</td><td>H325-500</td><td>組織内の内因性ペルオキシダーゼを除去するために使用</td></tr><tr><td>ImageJ</td><td>NIH</td><td></td><td>https://imagej.nih.gov/ij/download.html</td></tr><tr><td>Kimtech Science Kimwipes</td><td>Kimberly Clark Professional</td><td>34155</td><td>免疫組織化学に使用</td></tr><tr><td>レンズペーパー</td><td>VWR</td><td>52846-001</td><td>処理中にカセットに脊髄種を捕捉するために使用</td></tr><tr><td>光学顕微鏡 任意の</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>炭酸リチウム</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>554-13-3</td><td>ルクソールファストブルー染色後の脱ブルー化</td></tr><tr><td>ルクソールブルー</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>1328-51-4</td><td>染色 CNSミエリン</td></tr><tr><td>M.O.M 免疫検出キット</td><td>ベクターラブラトリー</td><td>BMK-2202</td><td>に使用染色 SMI-32</td></tr><tr><td>メタノール</td><td>フィッシャー ケミカルズ</td><td>A454.2</td><td>固定に使用</td></tr><tr><td>メイヤーのヘマトキシリン</td><td>電子顕微鏡 科学</td><td>26381-02</td><td></td></tr><tr><td>歯付き核マイクロアドソン鉗子</td>を染色 <td>ファイン サイエンス ツール</td><td>11027-12</td><td>解剖中に頭蓋骨を反射するために使用</td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>エッペンドルフ</td><td>モデル5417R</td><td></td></tr><tr><td>マイクロベットキャピラリーチューブCB 300 Z</td><td>Starstedt</td><td>16.440.100</td><td>採血に使用</td></tr><tr><td>マイクロスコープカバーガラス</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>12545A</td><td>カバースリップに使用</td></tr><tr><td>ミニシェー</td><td>カーVWR</td><td>12620-938</td><td>バッファーNF</td></tr><tr><td>ライトキット</td><td>Quanterix</td><td>103186</td><td>このキットは、血清中のマウスまたはヒトの可溶性ニューロフィラメントの検出に使用できます</td></tr><tr><td>ニトリル手袋</td><td>VWR</td><td>76307-462</td><td>安全性</td></tr><tr><td>正常なヤギ 血清</td><td>ベクター Labratories</td><td>S-1000</td><td>ブロッキング試薬</td></tr><tr><td>正常なウサギ 血清</td><td>ベクター Labratories</td><td>S-5000</td><td>ブロッキング試薬</td></tr><tr><td>OmniSette 組織カセット</td><td>フィッシャー サイエンティフィック M4935FS</td><td></td><td>脊髄と脳の埋め込みに使用</td></tr><tr><td>p1000ピペットとチップ</td><td>各種</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p200ピペットとチップ</td><td>各種</td><td></td><td></td></tr><tr><td>パラフィン埋め込みステーション</td><td>ライカバイオシステムズ</td><td>モデル EG1160</td><td></td></tr><tr><td>パラプラスト組織浸潤/埋め込み培地</td><td>ライカバイオシステム</td><td>ズ39601006</td><td>脊髄と脳の埋め込みに使用</td></tr><tr><td>パーマウントマウント マウント中</td><td>フィッシャーケミカルズ</td><td>SP15-100</td><td>スライドにカバースリップを取り付けるために使用</td></tr><tr><td>pHメーター</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>13636AB315B</td><td>pHイングバッファーに使用</td></tr><tr><td>プラスチックトランスファーピペット</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>13-711-20</td><td>pHイングバッファーに使用</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td>バイオショップ</td><td>7447-40-7</td><td>PBS</td></tr><tr><td>リン酸カリウムモノベーシック</td><td>の製造に使用BioShop</td><td>7778-77-0</td><td>PBS</td></tr><tr><td>圧力鍋</td><td>北欧陶器</td><td>テンダークッカー</td><td></td></tr><tr><td>精製ラット抗マウスCD45</td><td>ベクトルLabratories</td><td>を作る</td>ために使用されます <td>553076 白血球を検出します</td></tr><tr><td>試薬グレードのアルコール 100%</td><td>VWR</td><td>89370-084</td><td>脱水および再水和ステップ</td></tr><tr><td>試薬グレードのアルコール 70%</td><td>VWR</td><td>64-17-5</td><td>脱水と再水和ステップ</td></tr><tr><td>ロータリーミクロトーム</td><td>ライカバイオシステム</td><td>ズ モデル RM2235</td><td></td></tr><tr><td>シモアマシン</td><td>Quanterix</td><td>HD-X</td><td></td></tr><tr><td>スライドスキャナー</td><td>ツァイス</td><td>AxioScan.Z1</td><td></td></tr><tr><td>SMI-32 マウス IgG1 抗体</td><td>バイオレジェンド</td><td>801701</td><td>損傷した軸索を検出</td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>バイオショップ</td><td>7647-14-5</td><td>PBSの製造に使用</td></tr><tr><td>リン酸二塩基酸ナトリウム&nbsp;</td><td>Bioshop</td><td>7558-79-4</td><td>PBS</td></tr><tr><td>の標準的なAdsonの鉗子</td>を作るのに使用され<td>て 科学的な用具</td><td>11150-10</td><td>解剖のステップのために使用され</td></tr>なさい <tr><td>Superfrost Plus 顕微鏡のスライド</td><td>フィッシャー科学</td>的な <td>12-550-15</td><td>セクションを集めるのに使用され</td></tr>て <tr><td>外科的な切口</td><td>精密科学用具</td><td>14110-15</td><td>背骨、体壁および皮を通して切口を切るのに使用された</td></tr> ティ<tr><td>ッシュプロセッサ</td><td>ライカバイオシステムズ</td><td>モデル TP1020</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸トリソルジウム</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>03-04-6132</td><td>抗原賦活化に使用</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>バイオベーシック</td><td>9005-64-5</td><td>セクション</td></tr><tr><td>X-PピアスXP-100プレートシール</td>に使用 <td>エクセルサイエンティフィック</td><td>12-140</td><td>sNF-Lアッセイに使用</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>フィッシャーケミカル</td>ズ <td>1330-20-7</td><td>セクションの脱ワックスおよび清算に使用</td></tr><tr><td>漏斗</td><td>コールパーマー</td><td>RK-63100-64</td><td>組織をグロッシングする前にホルマリンをろ過するために使用されます</td></tr><tr><td>攪拌プレート</td><td>任意の</td><td></td><td>溶液を作るために使用されます</td></tr><tr><td>オーブン</td><td>任意の</td><td></td> パラフィルム<td>を切断した後に組織切片を焼くために使用されます</td></tr><tr><td></td><td>Bemis</td><td>13-374-10</td><td>LFB染色皿をシールするために使用されます</td></tr><tr><td>電子レンジ</td><td>どれでも</td><td></td><td>タイミングはマイクロ波モデルによって異なる場合があります</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td> <td>シグマ・アルドリッチ</td><td>9048-46-8</td><td>ブロッキングバッファー</td></tr><tr><td>1.5 mL マイクロ遠心チューブ</td>を作るために使用 <td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>05-408--129</td><td>マウス血清サンプルの保存に使用</td></tr><tr><td>ボルテック</td><td>ス 任意</td><td></td><td>sNF-Lアッセイのサンプル調製に使用</td></tr><tr><td>ウォーターバス</td><td>任意</td><td></td><td>sNF-Lアッセイ用の酵素基質の温めに使用</td></tr></tbody></table>

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系の炎症、脱髄、および軸索損傷のスコアリング

Scoring Central Nervous System Inflammation, Demyelination, and Axon Injury in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、多発性硬化症(MS)の一般的な免疫ベースのモデルです。この疾患は、ミエリン鞘のタンパク質成分とコンプリートフロイントアジュバント(CFA)による積極的な免疫、またはミエリンタンパク質/ CFAでプライミングされたげっ歯類からナイーブげっ歯類へのミエリン特異的Tエフェクター細胞の移行によってげっ歯類に誘発される可能性があります。EAE の重症度は通常、上行麻痺の程度を測定する 5 段階の臨床スケールで採点されますが、このスケールは EAE からの回復の程度を評価するのには最適ではありません。例えば、炎症が解消したにもかかわらず、一部のEAEモデル(例、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質[MOG]ペプチド誘導モデル)では、臨床スコアは高いままです。したがって、中枢神経系(CNS)における細胞損傷の根本的なメカニズムを研究する手段も提供するEAEの組織学的スコアリングで臨床スコアリングを補完することが重要です。
ここでは、マウスの脊髄と脳の切片を調製して染色し、脊髄の炎症、脱髄、軸索損傷を記録するための簡単なプロトコルが提示されます。脊髄における白血球浸潤をスコアリングする方法は、EAEにおける脳の炎症のスコアリングにも適用できます。また、低分子アッセイ(SIMOA)アッセイを用いてマウスの血清中の可溶性ニューロフィラメント光(sNF-L)を測定するためのプロトコルも記載されており、生きたマウスにおける中枢神経系損傷の程度に関するフィードバックを提供しています。

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、多発性硬化症の動物モデルとして機能します。この記事では、EAEにおける脊髄の炎症、脱髄、および軸索損傷をスコアリングするためのアプローチについて説明します。さらに、マウス血清中の可溶性ニューロフィラメント光レベルを定量化する方法が提示され、生きたマウスの軸索損傷の評価が容易になります。

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a common immune-based model of multiple sclerosis (MS). This disease can be induced in rodents by ...

私たちは、自己免疫と多発性硬化症(MS)がどのように始まるかを理解することに興味を持っています。この研究では、さまざまなアプローチを使用して、MSに関連する危険因子を研究します。自己免疫の発達につながります。実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、自己免疫に対するさまざまな危険因子の影響を調べるために使用できるMSのマウスモデルです。私たちは最近、MSの危険因子である肥満の1つが、マウスの自己免疫炎症の亢進にどのようにつながるかという生物学的経路を発見しました。EAEモデルの研究は、これらのメカニズムを解明する上で重要でした。EAE疾患の重症度は、多くの場合、5段階の臨床スケールで採点されます。ただし、この尺度の感度は限られており、臨床的欠損が炎症によって引き起こされるのか、組織損傷によって引き起こされるのかを区別することはできません。脊髄と脳の組織学は、EAEの炎症と組織損傷を評価するためのゴールドスタンダードの方法です。このプロトコルはEAEの間に脊髄および頭脳の発火そしてティッシュの損傷を測定するための簡単な方法を提供する。私たちのプロトコルは、EAEの重症度をよりよく特徴付けるために、臨床スケールと一緒に使用することができます。私たちのプロトコルは、免疫浸潤、脱髄、脊髄の軸索損傷、脳の炎症など、EAEの主要な組織学的特徴を測定します。また、中枢神経系損傷の程度を示すマウス血清中のニューロフィラメント光の測定も含まれます。この包括的なプロトコルは、1つのマーカーのみを使用するよりも、EAEのより詳細な特性評価を提供します。

scoring-central-nervous-system-inflammation-demyelination-axon-injury

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

DAラットの慢性再発性実験的自己免疫性脳脊髄炎：このビデオでは、多発性硬化症の動物モデルの誘導と臨床スコアを示しています。全体ラット脊髄と完全フロイントアジュバントを含むエマルジョンをラットを免疫することにより誘導される疾患は、、人間の病気に似た臨床症状を示しています。...

誘導および慢性-再発実験的自己免疫性脳脊髄炎の臨床スコアリング

このビデオは、ミエリン由来のペプチドにアジュバントを注入して自己反応性T細胞を活性化し、脳に移動することにより、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を誘発する方法を示しています。百日咳毒素は、血液脳関門の透過性を高めるために投与され、これらのT細胞や他の免疫細胞が脳に入ることを可能にします。これらの免疫細胞は脱髄を引き起こし、神経伝達の障害とEAEの発症につながります。...

マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の生成

このビデオでは、実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を使用して多発性硬化症のマウスモデルを確立しています。マウスにニューロンペプチドとアジュバントを含むエマルジョンを注入すると、自己反応性T細胞を活性化する免疫応答が引き起こされます。これに続いて、百日咳毒素(PTX)を注射して血液脳関門の透過性を高め、自己反応性T細胞が脳に浸潤できるようにします。この浸潤は、最終的にミエリン損傷をもたらすシグナル伝達カスケードを開始し、多発性硬化症の脱髄状態を模倣しています。...

マウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）は、多発性硬化症の確立された動物モデルである。 C57BL / 6マウスは、中枢神経系における自己反応性免疫細胞によって引き起こさ昇順弛緩性麻痺をもたらす、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG）ペプチド35-55（MOG 35-55）で免疫する。疾患の誘導およびモニタリングのためのプロトコルを説明する。...

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG<sub&gt; 35〜55</sub&gt;）C57BL / 6マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘発

この原稿は、実験的な自己免疫性脳脊髄炎(EAE)モデルの誘導と採点の方法、およびさまざまな疾患段階におけるフローサイトメトリーと定量的PCRをそれぞれ使用して、リンパ節、脾臓、血液、脊髄の免疫細胞分布とmRNAサイトカインレベルの評価を説明しています。...

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

生体内で実験的自己免疫性脳脊髄炎時単位の障害を調査するためのプロトコルを紹介します。具体的にはグリア limitans...

生体内で実験的自己免疫性脳脊髄炎時単位の内皮細胞およびグリアの障壁の障害の可視化

本稿は、マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)を誘発するプロトコルを提示する。中枢神経系(CNS)における浸潤リンパ球の単離および特徴付けの方法も提示され、リンパ球がCNS自己免疫疾患の発症にどのように関与しているかを示す。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系におけるリンパ球浸潤のフロー細胞量分析

本プロトコルは、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質を使用し、臨床スコアリングシステムを使用して疾患プロセスをモニタリングするマウスモデルにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘発を記載しています。実験的自己免疫性脳脊髄炎関連症状は、マウス大腿骨マイクロコンピューター断層撮影分析とオープンフィールドテストを使用して分析され、疾患プロセスを包括的に評価します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導と多様な評価指標

これまでのところ、すべての主要な中枢神経系常在細胞タイプを同じマウスから同時に単離するためのプロトコルは、満たされていない需要です。プロトコルはneuroinflammationの間に複雑な細胞ネットワークを調査し、同時に必須のマウス数を減らすために素朴で、実験的な自己免疫の脳脊髄炎のマウスで適当なプロシージャを示す。...

成体自己免疫性脳脊髄炎マウスからの主要な中枢神経系常在細胞型の同時単離

実験的自己免疫性脳脊髄炎(EAE)は、多発性硬化症(MS)の動物モデルであり、ヒトの疾患と強力な体液性自己免疫応答を共有しています。ここでは、EAE免疫マウスの血清中の自己抗体を定量するためのシンプルで柔軟なELISAプロトコルを報告します。...

実験的自己免疫性脳脊髄炎に対するマウスにおける自己反応性抗体の定量化

学ぶEAEモデルにおける組織学的スコアリング法。マウスの脊髄と脳の炎症、脱髄、軸索損傷を評価し、血清神経フィラメント軽鎖を定量することで、多発性硬化症の病態理解と治療開発に貢献する詳細なプロトコルを解説する。

実験的自己免疫性脳脊髄炎における中枢神経系の炎症、脱髄、および軸索損傷のスコアリング

さらに動画を探す