Name: 2次元(2D)単一培養から3次元(3D)多文化まで、さまざまな用途に対応するスキンモデルの構築 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-20T14:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学ぶ 3Dスキンモデル構築法。ハンギングドロップ法と細胞接着制限法を用いて、ケラチノサイトや線維芽細胞など複数細胞を含む球体を作成し、成分試験や細胞毒性評価のための現実的なプラットフォームを実現します。

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この研究は、ヘルシンキ宣言のガイドラインに従って実施され、ワルシャワ医科大学の倫理委員会 (KB/7/2022) によって承認されました。インフォームドコンセントは、研究に関与するすべての被験者から得られました。
注:高度な皮膚モデル調製物に記載されている手順は、市販の初代皮膚細胞および細胞株のいずれかを使用して、または患者から単離された初代細胞を用いて実施することができる。市販のセルには関連文書が付属しており、ほとんどの国での研究での使用には追加の承認は必要ありません。ただし、一部の国では義務であるため、地方倫理委員会の規則で確認する必要があります。患者から単離された初代細胞を研究に使用する必要がある場合、まず、研究は地元の倫理委員会によって承認されなければならず、それは彼らの厳格なガイドラインに従って実施される必要があります。さらに、書面によるインフォームドコンセントは、すべての皮膚組織ドナーから収集する必要があります。初代皮膚細胞の単離は本稿の主題ではなかったが、例示的な単離手順は、Kostenら(ケラチノサイト)18、Ścieżyńskaら(メラノサイト)19、Krögerら(線維芽細胞および肥満細胞)20に見出すことができる。正常な皮膚細胞と細胞株のほとんどは、BSL1クラスの安全性レベルを持っています。彼らは脅威を引き起こさない。ただし、使用される実験装置は、制御された条件下での動物およびヒトの細胞培養の基準を満たす必要があります。
1. 皮膚細胞培養
注:皮膚細胞の培養は、接着細胞または浮遊細胞専用のフラスコ(細胞の種類によって異なります)で、インキュベーター内で37°C、二酸化炭素含有量5%で実施する必要があります。それらの栽培および研究のための使用に関連する活動は、無菌状態を必要とし、紫外線C(UVC)に15〜30分間さらされた後、層流チャンバーで行わなければなりません。細胞懸濁液を採取し、それを用いて二次元モデルおよび三次元モデルを作成するには、細胞の種類に応じた手順を実施する必要があります(ケラチノサイト、線維芽細胞、メラノサイトなどの接着細胞の場合はステップ1.1、肥満細胞の非接着細胞の場合はステップ1.2)(図3)。異なる培養フラスコサイズについて、記載されている方法で使用したすべての試薬(培地、リン酸緩衝生理食塩水、トリプシン溶液など)の容量を 表3に示します。細胞の種類(試薬の濃度と組成、遠心分離方法など)に依存するパラメータを 表4に示します。播種に用いた細胞密度を 表5に示します。これらの表はすべて、このセクションの最後にあります。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig03.jpg"> 図3:接着細胞培養と非接着細胞培養。 接着細胞培養と非接着細胞培養の一般的なステップバイステップの手順(番号はステップ1.1および1.2の説明に対応しています)。図はMS PowerPointで作成されました。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig03large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<ol><li>接着細胞の懸濁液を得る<ol><li>培養フラスコから培地を取り出します。</li>
		<li>リン酸緩衝生理食塩水で細胞を穏やかに洗浄します(PBS、 表3)。</li>
		<li>エチレンジアミンテトラ酢酸にトリプシン溶液を添加します(トリプシン-EDTA溶液、 表3)。フラスコを37°Cでインキュベートし、光学顕微鏡で表面からの細胞の剥離を制御します。</li>
		<li>分離した細胞を少なくとも2倍の全増殖培地またはトリプシン中和剤に懸濁して、トリプシン(2:1)を不活性化します(容量については表3を、試薬については 表4を参照してください)。フラスコの内容物を15mLチューブに定量的に移します。</li>
		<li>少量(20 μL)の細胞懸濁液を1.5 mLチューブに取り、手動または自動の血球計算盤で細胞をカウントします。</li>
		<li>チューブを遠心分離し( 表4のパラメータ)、上清の大部分を取り除き、細胞ペレットを残りの液体の少量に再懸濁します。次に、細胞密度が新しい培地の必要量を播種または再計算するのに適切な場合は、遠心分離前の容量( 表3の容量)を得るのに十分な新鮮な培地を追加します。 注:メラノサイトなどの一部の細胞は遠心分離に非常に敏感であるため、短時間の距離で再度遠心分離する必要がなくなります。</li>
		<li>実験(皮膚細胞の2D/3D単培養または多培養)に必要な密度(細胞/mL、 表5の細胞密度)の細胞懸濁液を調製します。 注:細胞をさらに培養する場合は、5,000〜8,000細胞/ mLを新しいフラスコに戻し、新しい培地( 表3の容量)を追加します。</li>
	</ol></li>
	<li>非接着性細胞の懸濁液を得る<ol><li>細胞懸濁液を入れた培地を培養フラスコから取り出し、15 mLチューブに定量的に移します。</li>
		<li>少量(20 μL)の細胞懸濁液を新しい1.5 mLチューブに取ります。手動または自動の血球計算盤で細胞をカウントします。</li>
		<li>チューブを遠心分離し( 表4のパラメータ)、上清の大部分を取り除き、細胞を残りの液体の少量に再懸濁します。次に、新しい培地の必要量を播種または再計算するのに細胞密度が適切である場合は、新鮮な培地を添加して予備遠心分離容量( 表3を参照)を得ます。</li>
		<li>実験(皮膚細胞の2D/3D単培養または多培養)に必要な密度( 表5で提案されているように、mLあたりの細胞数)の細胞懸濁液を調製します。 注:細胞をさらに培養する場合は、5,000〜8,000細胞/ mLを新しいフラスコに戻し、新しい培地を追加します。</li>
	</ol></li>
</ol>    
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td>25 cm2 カルチャーフラスコ</td>
			<td>75 cm2 カルチャーフラスコ</td>
		</tr><tr><td>培地 [mL]</td>
			<td>4–5</td>
			<td>8–12</td>
		</tr><tr><td>PBS樹脂 [mL]</td>
			<td>5</td>
			<td>10</td>
		</tr><tr><td>トリプシン-EDTA [mL]</td>
			<td>0.5–1</td>
			<td>1–2</td>
		</tr><tr><td>中和媒体 [mL]</td>
			<td>1–2</td>
			<td>2–4</td>
		</tr></tbody></table>表3:細胞懸濁液の培養および調製中に使用される試薬の量。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>皮膚細胞の単一培養</td>
			<td>トリプシン</td>
			<td>トリプシン不活性化剤</td>
			<td>遠心分離</td>
			<td colspan="2">2Dモノカルチャー用のミディアムタイプ</td>
		</tr><tr><td>ケラチノサイト</td>
			<td>0.25%</td>
			<td>トリプシン中和剤付き</td>
			<td>300 x g、5分、室温</td>
			<td colspan="2">ケラチノサイト増殖培地2</td>
		</tr><tr><td>線維芽細胞</td>
			<td>0.25%</td>
			<td>ミディアム付き</td>
			<td>300 x g、5分、室温</td>
			<td colspan="2"></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td><td colspan="2"></td></tr></tbody></table><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td colspan="2"></td><td colspan="2"></td></tr><tr><td rowspan="4"></td><td rowspan="4"></td><td></td><td rowspan="4"></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td rowspan="14"></td><td rowspan="5"></td><td></td><td rowspan="5"></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td rowspan="5"></td><td></td><td rowspan="5"></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td rowspan="4"></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td></tr></tbody></table><ol><li><ol><li></li><li></li><li></li><li><li> </li><li> </li><li> </li><li></li></ol></li><li><ol><li></li><li></li><li></li><li></li></ol></li></ol><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig04large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig05.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig05large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig06.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig06large.jpg" target="_blank"></a><ol><li><ol><li><li></li><li> </li><li> </li><li></li><li> </li><li><li> </li><li><li> </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="2" rowspan="2"></td><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="2" rowspan="2"><img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65773/65773eq01.jpg" style="margin: auto;"></td><td></td></tr><tr><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"><img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/65773/65773eq02.jpg" style="margin: auto;"></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"><img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/65773/65773eq03.jpg" style="margin: auto;"></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="2"><img alt="Equation 4" src="/files/ftp_upload/65773/65773eq04.jpg" style="margin: auto;"></td><td></td></tr></tbody></table><img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig07.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig07large.jpg" target="_blank"></a><ol><li><ol><li><li><li> </li><li><li><li><li><li> </li></ol></li><li><ol><li><li> </li><li> </li><li><li><li><li><li></ol></li><li><ol><li><li><li><li></li><li><li></li><li><li></li><li><li></ol></li><li><ol><li><li><li><li><li><li><li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="3"></td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td><td></td></tr></tbody></table>

<meta charset="utf8"></head><body>効率的な3Dスキンモデルによる柔軟な研究アプリケーション

皮膚は、この複雑な臓器の適切な機能と恒常性を明らかにする多細胞相互作用を伴う連続構造です。それは形態学的に異なる層から構築されています:内側の層 - 真皮、そして外側の層 - 表皮。表皮の上に、角質層(平らにされた死んだ細胞 - 角質細胞からなる)をさらに区別し、外部環境に対して最大の保護を提供します。皮膚の最も重要な受動的および能動的機能のいくつかは、外的要因に対する身体の保護、免疫学的プロセスへの参加、分泌、吸収、体温調節、およびセンシング1,2,3です。それは体内で最大の臓器の1つと考えられているため、さまざまな病原体、アレルゲン、化学物質、および紫外線(UV)放射との接触を避けることは不可能です。したがって、特定の機能を持つ多くの種類の細胞で構成されています。表皮に存在する細胞の主な種類は、ケラチノサイト(全細胞のほぼ90%、表皮の深部に構造的および免疫学的機能を持つが、後に角質化プロセスを経て表皮の最上層の角質細胞に変わる)、メラノサイト(表皮細胞集団のわずか3%〜7%で、UV保護色素メラニンを産生する)およびランゲルハンス細胞(免疫系から)です。真皮の場合、主な細胞は線維芽細胞(成長因子とタンパク質を産生する)、樹状細胞、および肥満細胞(免疫系の細胞タイプ)である4,5,6。さらに、皮膚にはいくつかの細胞外タンパク質(I型およびIV型コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンなど)が備わっています。図1)タンパク質繊維(コラーゲンとエラスチン)は、皮膚の特定の構造を確保するだけでなく、細胞結合、細胞接着、およびその他の相互作用を促進します7。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig01.jpg"> 図 1: スキン構造を示す概略図。 皮膚の構造は、その個々の層で発生する4つの基本的な細胞タイプを示し、細胞外マトリックスのタンパク質を区別しました。この図はMS PowerPointで作成されました。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
化粧品や医薬品の安全性は非常に重要な問題であり、消費者と患者の健康を保護することは優先事項です8。最近まで、動物で行われた研究を含む多数のテストによって保証されることになっていました。残念ながら、これらはしばしば抜本的な方法の使用を必要とし、研究目的で使用される動物(多くの場合、マウス、ラット、ブタ)に痛みと苦しみを引き起こしました。1959年、人道的実験技術の原則(3Rの原則)が導入されました:(1 - 交換)研究中の動物を in vitro、 in sillico、 または ex vivo モデルに置き換える、(2 - 削減)研究に使用する動物の数を減らす、(3 - 改良)研究にまだ必要な動物の健康を改善すると同時に、開発された代替方法を改善する9.さらに、欧州連合(EU)では、動物に対する化粧品試験は法律で規制されています。2004年9月11日から、動物実験による化粧品の禁止が施行されました。2009年3月11日、EUは化粧品原料の動物実験を禁止しました。新たに動物実験された成分で作られた化粧品の販売は許可されていませんでした。しかし、反復投与毒性、生殖毒性、トキシコキネティクスなどの複雑なヒトの健康問題について、動物で製品をテストすることは依然として許容されていました。2013年3月11日以降、EUでは、完成品またはその成分が動物実験された化粧品の販売は違法です10。そのため、現在、美容学では、 in vitro (細胞)、ex vivo (実組織)、 in vivo (ボランティア)の3つのレベルで研究が行われています11。医薬品の場合、動物実験の必要性は依然として残っています。ただし、大幅に削減され、厳密に管理されています12。
動物実験の代替方法として、また新規有効成分の有効性の初期評価には、 in vitro 皮膚細胞培養が使用されます。さまざまな種類の皮膚細胞を分離し、無菌の実験室条件でそれらを培養することで、活性物質の安全性と毒性を評価できます。また、皮膚細胞株は、認定企業から販売されており、その結果を異なる研究室で比較できるため、研究のモデルとして広く認識されています。これらの試験は通常、ヒト皮膚細胞の単一培養の単純な2Dモデルで実施されます。より高度なモデルのいくつかは、それらの共培養(例えば、線維芽細胞を有するケラチノサイトおよびメラノサイトを有するケラチノサイトなど)であり、ならびに、足場フリー培養(球体)および表皮、真皮、あるいは皮膚の全層代替品の足場ベースの皮膚同等物を含む3次元モデルである13。最後のタイプ(皮膚同等物)を除いて、残りは市販されておらず、必要に応じて科学者が自分で準備する必要があることに言及する価値があります。
これらのモデルの多くが維持され、今日では日常的に販売されていますが(表1)、ほとんどの結果を検証するためには常に追加のモデルが必要です。したがって、新たに設計されたモデルは、人体で起こっている実際の相互作用をよりよく再現する必要があります。このようなモデルを形成するために異なる種類の細胞の混合物を用いると、生体 内で の組織の多細胞性側面の再現が達成できます。その結果、器官型培養物が開発されます(図2)。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td></td>
			<td colspan="2">名前</td>
			<td colspan="4">形容</td>
		</tr><tr><td rowspan="6">普通肌</td>
			<td colspan="2">エピスキン</td>
			<td colspan="4">再構築されたヒト表皮 - コラーゲン膜上のケラチノサイト</td>
		</tr><tr><td colspan="2">スキンエシックRHE</td>
			<td colspan="4">再構築されたヒト表皮 - ポリカーボネート膜上のケラチノサイト</td>
		</tr><tr><td colspan="2">スキンエシック RHE-LC</td>
			<td colspan="4">ヒト表皮モデルランゲルハンス細胞 - ポリカーボネート膜上のケラチノサイトとランゲルハンス細胞</td>
		</tr><tr><td colspan="2">SkinEthic RHPEの</td>
			<td colspan="4">再構築されたヒト色素性表皮 - ポリカーボネート膜上のケラチノサイトとメラノサイト</td>
		</tr><tr><td colspan="2">Tスキン</td>
			<td colspan="4">再構築されたヒト全層皮膚モデル - ポリカーボネート膜上に成長した線維芽細胞の層上のケラチノサイト</td>
		</tr><tr><td colspan="2">フェニオンFTスキンモデル</td>
			<td colspan="4">ハイドロゲル中のケラチノサイトと線維芽細胞</td>
		</tr><tr><td rowspan="2">病気のある肌</td>
			<td colspan="2">メラノーマFTスキンモデル</td>
			<td colspan="4">正常なヒト由来のケラチノサイトおよびヒト悪性黒色腫細胞株A375の線維芽細胞</td>
		</tr><tr><td colspan="2">乾癬組織モデル</td>
			<td colspan="4">正常なヒトケラチノサイトと線維芽細胞</td>
		</tr></tbody></table>表1:さまざまな研究で最も人気のある市販の皮膚同等物。
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65773/65773fig02.jpg"> 図2:さまざまな in vitro モデルの複雑さ。 生物を再現するためのさまざまな in vitro モデルの複雑さと、人体で直接発生する実際の相互作用との関係。この図は、セルヴィエ(https://smart.servier.com/)のセルヴィエメディカルアートのセット「微生物学と細胞培養」から変更されています。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65773/65773fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
商用の同等物の最も重要な制限の1つは、数種類の細胞(通常は1〜2個、まれに3個)を持つ非常に一般的な研究モデルのみが利用できることです。それでも、皮膚にはさらに多くの細胞が存在し、それらの相互作用により、さまざまな成分の耐性が良好または悪くなる可能性があります14。一部の免疫成分が不足していると、免疫療法を含むいくつかの種類の研究でその価値が低下する可能性があります。黒色腫は、転移が早期に発症し、適用された治療に対する頻繁な耐性により生命を脅かす皮膚がんです15。人工皮膚モデルを改善するために、研究者は免疫細胞と細胞株およびオルガノイドとの共培養を確立しようと試みています16、これは研究されたモデルの大きな改善と考えられています。例えば、肥満細胞は、皮膚における多くの生理学的(創傷治癒、組織リモデリング)および病理学的(炎症、血管新生、および腫瘍進行)プロセスに関与している17。したがって、モデル内でのそれらの発生は、調査対象の化合物に対するモデルの応答を大幅に変化させる可能性があります。最後に、肌に関する情報はまだたくさん欠けており、それは基礎研究を行うことによってのみ発見することができます。そのため、さまざまな人工皮膚モデル(表2)を作成し、改良することが非常に重要な取り組みです。この記事では、球体やスキン同等物など、高度なスキン モデルを作成するためのいくつかの手順について説明します。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td>in vitro 皮膚モデル</td>
			<td>組織内で発生する相互作用の再現を試みる</td>
			<td>使用したセルの例</td>
		</tr><tr><td rowspan="12">2Dまたは3D細胞培養</td>
			<td rowspan="3">表皮</td>
			<td>ケラチノサイト</td>
		</tr><tr><td>メラノサイト</td>
		</tr><tr><td>ケラチノサイト + メラノサイト</td>
		</tr><tr><td rowspan="3">真皮</td>
			<td>線維芽細胞</td>
		</tr><tr><td>肥満細胞</td>
		</tr><tr><td>線維芽細胞+肥満細胞</td>
		</tr><tr><td rowspan="6">皮膚</td>
			<td>ケラチノサイト+線維芽細胞</td>
		</tr><tr><td>ケラチノサイト+マスト細胞</td>
		</tr><tr><td>メラノサイト + 線維芽細胞</td>
		</tr><tr><td>メラノサイト + マスト細胞</td>
		</tr><tr><td>ケラチノサイト + 線維芽細胞 + メラノサイト</td>
		</tr><tr><td>ケラチノサイト + 線維芽細胞 + 肥満細胞</td>
		</tr></tbody></table>表2:2Dおよび3D培養で皮膚組織を再現するための細胞型混合物の例。

<table><tbody><tr><td>接着細胞培養用24ウェルプレート</td><td>Biologix Europe GmbH</td><td>07-6024-35</td><td></td></tr><tr><td>%&ndash;38% HCL</td><td>Chempur</td><td></td> <td>115752837-60</td></tr> <tr><td>mm 細胞培養ペトリ皿&nbsp;</td><td>ネスト</td><td>705001</td><td>-</td></tr><tr><td>アビディン&マイナス;スルフォロダミン 101</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2348-5MG</td><td>-</td></tr><tr><td>明視野倒立顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>CKX41</td><td>-</td></tr><tr><td>塩化カルシウム</td><td>Avantor</td><td>874870116</td><td>-</td></tr><tr><td>細胞接着細胞用培養フラスコ T75</td><td>ジェノプラスト</td><td></td> <td>G77080033</td></tr><tr><td>-遠心チューブ 15 mL</td><td>GoogLab Scientific</td><td>G66010522-CO2</td><td></td></tr> <tr><td>インキュベーター</td>ウサギで産生された<td>ヒールフォース</td><td>ギャラクシー170R-Col1A2</td><td></td></tr><tr><td>抗体</td><td>Novus</td><td>NBP2-92790-Corning</td><td></td></tr><tr><td>(R) Transwell(R) ポリカーボネート</td><td>コーニング</td><td>CLS3422-48EA-Cytokeratin</td><td></td></tr> <tr><td>14抗体 マウスで産生</td>された <td>Novus</td><td>NBP1-79069-DPX</td><td></td></tr> <tr><td>組織学用マウンタント</td><td>Sigma Aldrich</td><td>06522-100ML-</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのモディファイドイーグルミディアム(DMEM)</td><td>VWRケミカルズ</td><td>L0102-500-Eosine</td><td></td></tr> <tr><td>Y</td><td>Kolchem-0.5</td><td></td><td>%水溶液</td></tr><tr><td>エッペンドルフチューブ1.5mL</td>ザ<td>ルスタット</td><td>72.690.001</td><td>-</td></tr><tr><td>エッペンドルフチューブ2mL</td>サル<td>スタット</td><td>72.691</td><td>-</td></tr><tr><td>エチルアルコール絶対99.8%</td><td>アバントール</td><td>396480111</td><td>超純水で必要に希釈濃度&nbsp;</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Gibco</td><td>10270106</td><td>-</td></tr><tr><td>蛍光倒立顕微鏡&nbsp;</td><td>オリンパス</td><td>IX71</td><td>-</td></tr><tr><td>ヤギ抗マウス二次抗体 FITC</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F0257-1mL</td><td></td></tr> ヤ<tr><td>ギ抗ウサギ二次抗体 FITC</td><td>Novus</td><td>NB7159-Harris</td><td></td></tr> <tr><td>Hematoxylin</td><td>Kolchem-1</td><td></td> <td>mg/mL 95% エタノール</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>ThermoFisher</td><td>H3570-Laminar</td><td></td></tr> で結合<tr><td>チャンバー</td><td>Heal Force</td><td>HFSafe-1200-Melan-A</td><td></td></tr> <tr><td>抗体 マウスで産生</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-20032-Microtome</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Microm</td><td>HM355S-NaOH</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>アバントール</td><td>810981997</td><td></td></tr><tr><td>-パラフィントローチ</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>1.07164</td><td>-</td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>1581227</td><td>-</td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン溶液</td><td>シグマ アルドリッチ</td><td>P4333-</td><td></td></tr><tr><td>ピペット チップ、1000 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.305</td><td>-</td></tr><tr><td>ピペットチップ、20 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.3021</td><td>-</td></tr><tr><td>ピペットチップ、200 & マイクロ;L</td><td>Sarstedt</td><td>70.303-Pluronic</td><td></td></tr> <tr><td>F-127</td><td>BASF</td><td>50401036</td><td></td></tr><tr><td>-血清学的ピペット 10 mL</td><td>GoogLab Scientific</td><td>G33270011</td><td></td></tr><tr><td>-血清学的ピペット 25 mL</td><td>GoogLab Scientific</td><td>G33280011</td><td></td></tr><tr><td>-血清学的ピペット 5 mL</td><td>GoogLab Scientific</td><td>G33260011</td><td>-</td></tr><tr><td>重炭酸ナトリウム</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761</td><td>-</td></tr><tr><td>重炭酸ナトリウム</td><td>Chempur</td><td>118105307</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン-EDTA 0.25% 溶液、フェノールレッド</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td> <td>25200072-Type</td></tr> <tr><td>1 コラーゲン</td><td>IBIDI</td><td>50201-U-bottom</td><td></td></tr> <tr><td>96-well plate</td><td>Sarstedt</td><td>83.3925500</td><td>-</td></tr><tr><td>キシレン</td><td>Sigma Aldrich</td><td>534056</td><td>-</td></tr></tbody></table>

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マイクロマシンマイクロ流体プラットフォームにおける簡単な3次元スキンオンチップモデルの生成

導電性金属インクの平面と立体印刷が説明されています。我々のアプローチは、マイクロスケールでの異常なレイアウトで印刷された電子、光、および生物医学的装置を製造するための新たな道を提供します。...

導電性インクの平面および三次元印刷

このプロトコルの目標は、自然な肌に似た3次元の全厚の皮膚等価物を構築することです。特別に構築された自動創傷装置により、無菌状態を維持しながら、正確で再現性のある創傷を生成することができます。...

三次元の全層皮膚等価物と自動傷つけ処理の発生

このプロトコルは、ゼラチンとコラーゲンIからなる2D混合マトリックスの調製法と、線状のinvadosomesを研究するための3DコラーゲンIプラグの作成方法を記載しています。これらのプロトコールは、線状のインベルソーム形成、マトリックス分解活性、および初代細胞および癌細胞系の浸潤能力の研究を可能にする。...

線状インベーゾームの形成および活性を研究するための2Dおよび3Dマトリックス

このプロトコルでは、直接書き込みモードで溶けるポリマー エレクトロスピニング足場を作製する包括的なガイドラインとして提供しています。我々...

組織工学的応用の制御可能な形態の三次元 Poly(ε-caprolactone) 足場のエレクトロスピニング記述を溶かす

軟骨や皮膚類似したナノセルロース アルギン酸ベース bioink を使用して bioprinted。Bioinks は、シングル ステップのパッシブ混合ユニットを介して印刷する前に cellularized いた。構成要素は、均一に cellularized...

軟骨と皮膚組織類縁ミキシング ユニット Bioink Precellularization の小説のパッシブ バイオプリンティング

学ぶ 3Dスキンモデル構築法。ハンギングドロップ法と細胞接着制限法を用いて、ケラチノサイトや線維芽細胞など複数細胞を含む球体を作成し、成分試験や細胞毒性評価のための現実的なプラットフォームを実現します。

2次元(2D)単一培養から3次元(3D)多文化まで、さまざまな用途に対応するスキンモデルの構築

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