Name: 口腔顔面筋線維症モデルを確立するためのマウス咬筋の凍結損傷 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-12-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 33 s
Description: 学ぶマウス咬筋の凍結損傷法による口腔顔面筋線維症モデルの確立。前脛骨筋との再生能の違いを比較し、線維化メカニズムの解明に貢献する信頼性の高い実験系を提供します。

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本研究は、四川省健康福祉委員会(助成番号:21PJ063)および中国国家自然科学基金会(助成番号:82001031)からの助成を受けて行われました。

この研究のすべての動物手順は、四川大学西中国口腔病学学校の倫理委員会(WCHSIRB-D-2020-114)によってレビューされ、承認されました。雄のC57BL/6マウス(5週齢)を、湿度制御(53±2%)および温度制御(23±2°C)の施設で飼育し、12時間の明暗サイクルで飼育しました。このプロトコールで使用されるすべての材料、試薬、および機器に関連する詳細については、 材料の表 を参照してください。
1.凍結傷害
<ol><li>麻酔:イソフルランに浸した綿球でマウスを鎮静させ、チレタミン-ゾラゼパムを50 mg / kgの用量で腹腔内に注射します。.術前および術後の鎮痛は、1 mg / kgの投与量でメロキシカムの腹腔内注射によって提供されました。.獣医軟膏で目を保護してください。手術の全手順では、38°Cに保たれた加熱パッドを手術用ドレープの下に置いて、動物に熱サポートを提供しました。マウスを手術台に横向きに置いた後、粘着テープで固定します(図1)。まぶた反射、立ち直り反射、およびペダル離脱反射の喪失により、麻酔の十分性を評価します。 注:イソフルオラン麻酔を適用するときは、マウスを片手で持ち、イソフルオランに浸したコットンボールを別の手で持ちます。.不快感や皮膚の炎症を避けるために、コットンボールを動物から離してください。</li>
	<li>術前の脱毛:電気カミソリを使用してマウスのふくらはぎと顔の毛を剃り、綿棒で脱毛ペーストを皮膚に塗布し、咬筋と前脛骨筋を覆います。1〜2分後、エタノールベースの外科用ワイプ(図2A および 図2G)でペーストを洗い流します。手術部位は、ヨウ素ベースのスクラブと75%エタノールを3ラウンド使用して消毒しました。 注:電気カミソリだけでは、特に咬筋部分の脱毛には不十分でした。脱毛ペーストを塗布するときは、ペーストを過度に使用しないことが重要です。ペーストを洗い流すときは、皮膚の火傷を防ぐために皮膚をやさしく拭いてください。</li>
	<li>手術場への曝露:手術前に手術用ドレープで覆ってください。MAS筋の場合、最初に下顎骨の下縁に沿って触診します。端から5 mmのところで、口腔交連と耳珠を結ぶ線に沿って7 mmの切開を行います( 図2Bの破線は切開の位置を示しています)。</li>
	<li>TA筋の場合、最初にふくらはぎに沿って触診して、脛骨の前縁を見つけます。膝から足首まで、メスで皮膚の端から2 mm後方に切り込みます(破線は 図2Hの切開部の位置を示しています)。各マウスについて、左側のMASとTA筋が損傷している場合は、反対側のもう一方の筋肉をコントロールとして使用します。 注:このカットは、切開中に筋肉が損傷しないようにするための非常に表面的なものです。顔の切開部は耳珠に近すぎてはいけません。そうしないと、耳下腺が露出し、次の凍結プロセス中に過度の出血を引き起こします。</li>
	<li>ドライアイス凍結:MAS筋とTA筋の長軸に沿って、予冷された鉗子でドライアイスを1つ保持します(それぞれ図2C と 図2I)。ドライアイスを筋肉の表面に直接5秒間置きます。ドライアイスを取り除いた直後は筋肉が硬く淡白に見えることを確認しますが(図2D および 図2J)、隣接する損傷していない筋肉と同様に、22〜25秒以内に通常の色と質感に戻ることを確認します(図2E および 図2K)。 注意: ドライアイスを保持している鉗子は、ドライアイスの急激な昇華を避けるために予冷する必要があります。タイマーは、5秒の凍結損傷を実施し、筋肉の22〜25秒の回復時間を数えるために必須です。回復時間が22秒より短い、または25秒より長い筋肉は放棄する必要があります。この手順には練習が必要です。</li>
	<li>創傷閉鎖:筋肉が完全に回復した後、少なくとも3つの7-0縫合糸(図2F および 図2L)で皮膚創傷を閉じます。</li>
	<li>蘇生:縫合が完了したら、マウスを温支持付きのケージに入れ、すべての立ち直反射が回復するまでマウスを継続的に監視します。</li>
</ol>2.マッスルコレクション
<ol><li>イソフルランの過剰摂取でマウスを安楽死させ、続いて子宮頸部脱臼を行います。組織学的分析のために、両側のMAS筋とTA筋を採取します。</li>
	<li>MAS筋解剖:マウスの顔の皮膚を切り開き、耳下腺を切除してMAS筋の後部を露出させます。MASを前部の付着部から下顎骨の後部の付着部まで解剖します。白い点線の領域は、MASの露出部分を示しています(図3A)。 注:MAS筋は、下顎骨の表面に密接に付着した深いコンパートメントと表在するコンパートメントで構成されています。解剖中は、MASを完全に分離するために、はさみを下顎骨に押し付けてください。頬骨-下顎筋とMASを区別するには、頬骨と下顎骨の間の境界に注意してください。</li>
	<li>TA筋肉解剖:足首から膝までの皮膚を切り開き、筋膜を切除してTA筋肉を露出させます。マイクロ解剖鉗子の先端を使用してTAの腱を分離し、膝までスライドさせて脛骨に付着している繊維を切断します。次に、足首の腱を切断します(図3B)。 注:TA筋の場合、マウスの足首の周りにいくつかの筋腱があります。TAの腱、つまり脛骨に最も大きく、最も近い腱を見極めるには練習が必要です。</li>
	<li>予冷イソペンタン:2つの断熱バレルを準備します。小さな樽にイソペンタンを、大きな樽に液体窒素を入れます。筋肉解剖の10分前に、小さなバレルを大きなバレルの中に置きます(図3D)。</li>
	<li>埋め込み金型の準備:サンプルごとに円筒形の錫箔型を作成し、最適な切断温度(OCT)コンパウンドを充填します。</li>
	<li>新鮮凍結:筋肉をOCTに沈め、OCTコンパウンドに対して垂直に保持します(図3C)。ニードルホルダーを使用して、金型を事前に冷却したイソペンタンに移します。OCTが白く点灯するまで40秒待ちます(図3D)。 注意: 金型の位置が低すぎないことを確認してください。そうしないと、イソペンタンがOCTと混合し、筋肉の凍結プロセスが損なわれます。金型内のOCTのレベルは、筋肉サンプルの高さに匹敵する必要があります。OCTの過剰摂取は避け、迅速かつ効率的に凍結してください。</li>
	<li>サンプルの保管:新鮮な凍結筋肉サンプルは、明確にラベル付けされた24ウェルプレートで保存します。サンプルはすぐに切片化するか、長期間使用するために-80°Cで保存してください。</li>
</ol>3. 組織学的解析
<ol><li>クライオスタットを使用して、筋肉サンプルから厚さ10 μmの切片を表面処理されたスライドに切断します。</li>
	<li>スライドを氷冷アセトンに20分間入れ、ドラフトで20分間風乾します。</li>
	<li>スライドをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で3 x 5分間洗浄します。 注:このステップ以降、スライドは乾燥を避けるために湿度チャンバーに保管されました。</li>
	<li>シリウスレッド染色<ol><li>0.5 gのSirius Red粉末を500 mLの飽和ピクリン酸に溶解して、Sirius Red作業溶液を調製します。</li>
		<li>スライドをシリウスレッドワーキング溶液で室温で1時間染色します。</li>
		<li>スライドを0.5%酢酸で2 x 5分間洗浄します。</li>
		<li>染色プロセス後、サンプルは最初に95%エタノールで15秒間脱水し、続いて無水エタノールで1分間脱水する必要があります。最後のステップでは、スライドを中性バルサムで取り付けます。</li>
	</ol></li>
	<li>免疫組織学的染色<ol><li>0.3% Triton in PBSで切片を室温で20分間透過処理した後、PBS洗浄を行います。</li>
		<li>Pax7染色の場合は、参照されたキットに付属の試薬で切片をブロックします。ラミニンおよびPdgfrα染色の場合は、5%ウシ血清アルブミン(BSA)および5%ロバ血清をPBS中で室温で1時間ブロックします。</li>
		<li>Pax7、ラミニン、およびPdgfrαに対する一次抗体と切片を4°Cで一晩インキュベートした後、PBSで3 x 5分間洗浄します。</li>
		<li>切片を蛍光色素標識二次抗体と室温で1時間インキュベートした後、PBSで3×5分間洗浄します。</li>
		<li>4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール(DAPI)と室温で3分間インキュベートした後、PBSで3 x 5分間洗浄します。</li>
		<li>封入部に封入剤をセットし、カバーガラスを上に置き、マニキュアでカバーシートをシールします。</li>
	</ol></li>
</ol>

凍結傷害によるマウスの口腔顔面筋線維症モデルの確立

<ol><li>Yoshioka, K., Kitajima, Y., Seko, D., Tsuchiya, Y., Ono, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+body+region+specificity+in+murine+models+of+muscle+regeneration+and+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiologica%22%5BJournal%5D)">The body region specificity in murine models of muscle regeneration and atrophy.</a> Acta Physiologica. 231 (1), e13553(2021).</li>
<li>Worley, M. L., Patel, K. G., Kilpatrick, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleft+lip+and+palate%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Cleft lip and palate.</a> Clinics in Perinatology. 45 (4), 661-678 (2018).</li>
<li>Pai, B. C. J., Hung, Y. -T., Wang, R. S. H., Lo, L. -J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+patients+with+complete+unilateral+cleft+lip+and+palate%3A+20-year+follow-up+of+a+treatment+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Outcome of patients with complete unilateral cleft lip and palate: 20-year follow-up of a treatment protocol.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 143 (2), 359e-367e (2019).</li>
<li>Parsaei, Y., Chandler, L., Smetona, J. T., Lopez, J., Steinbacher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aesthetic+repair+of+unilateral+cleft+lip+using+the+modified+inferior+triangle+and+adjunctive+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Plastic+and+Reconstructive+Surgery%22%5BJournal%5D)">Aesthetic repair of unilateral cleft lip using the modified inferior triangle and adjunctive techniques.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 149 (1), 70e-73e (2022).</li>
<li>Schubert, F. R., Singh, A. J., Afoyalan, O., Kioussi, C., Dietrich, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+roll+the+eyes+and+snap+a+bite+-+function%2C+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+In+Cell+%26+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">To roll the eyes and snap a bite - function, development and evolution of craniofacial muscles.</a> Seminars In Cell & Developmental Biology. 91, 31-44 (2019).</li>
<li>Vyas, B., Nandkishore, N., Sambasivan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vertebrate+cranial+mesoderm%3A+developmental+trajectory+and+evolutionary+origin%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+and+Molecular+Life+Sciences%3A+CMLS%22%5BJournal%5D)">Vertebrate cranial mesoderm: developmental trajectory and evolutionary origin.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 77 (10), 1933-1945 (2020).</li>
<li>Sambasivan, R., Kuratani, S., Tajbakhsh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+eye+on+the+head%3A+the+development+and+evolution+of+craniofacial+muscles%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">An eye on the head: the development and evolution of craniofacial muscles.</a> Development. 138 (12), 2401-2415 (2011).</li>
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<li>Pavlath, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+among+muscle+precursor+cells+in+adult+skeletal+muscles+with+differing+regenerative+capacities%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity among muscle precursor cells in adult skeletal muscles with differing regenerative capacities.</a> Developmental Dynamics. 212 (4), 495-508 (1998).</li>
<li>Camacho-Alonso, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+lingual+musculature+in+rats+using+myoblasts+over+porcine+bladder+acellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Regeneration of lingual musculature in rats using myoblasts over porcine bladder acellular matrix.</a> Oral Diseases. 27 (6), 1580-1589 (2021).</li>
<li>LeBoff, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinician%27s+guide+to+prevention+and+treatment+of+osteoporosis%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoporosis+International%22%5BJournal%5D)">The clinician's guide to prevention and treatment of osteoporosis.</a> Osteoporosis International. 33 (10), 2049-2102 (2022).</li>
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<li>Mahdy, M. A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycerol-induced+injury+as+a+new+model+of+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Glycerol-induced injury as a new model of muscle regeneration.</a> Cell and Tissue Research. 374 (2), 233-241 (2018).</li>
<li>Guardiola, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+acute+skeletal+muscle+regeneration+by+cardiotoxin+injection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Induction of acute skeletal muscle regeneration by cardiotoxin injection.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (119), 54515(2017).</li>
<li>Larouche, J. A., Wallace, E. C., Spence, B. D., Buras, E., Aguilar, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+mapping+of+immune+and+stem+cell+dysregulation+after+volumetric+muscle+loss%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal mapping of immune and stem cell dysregulation after volumetric muscle loss.</a> JCI Insight. 8 (7), e162835(2023).</li>
<li>Anderson, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+a+critical+size+threshold+for+volumetric+muscle+loss+in+the+mouse+quadriceps%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering.+Part+C%2C+Methods%22%5BJournal%5D)">Determination of a critical size threshold for volumetric muscle loss in the mouse quadriceps.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 25 (2), 59-70 (2019).</li>
<li>Lukjanenko, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+disrupts+muscle+stem+cell+function+by+impairing+matricellular+WISP1+secretion+from+fibro-adipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Aging disrupts muscle stem cell function by impairing matricellular WISP1 secretion from fibro-adipogenic progenitors.</a> Cell Stem Cell. 24 (3), 433-446.e7 (2019).</li>
<li>Dong, J., Dong, Y., Chen, Z., Mitch, W. E., Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pathway+to+muscle+fibrosis+depends+on+myostatin+stimulating+the+differentiation+of+fibro%2Fadipogenic+progenitor+cells+in+chronic+kidney+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+International%22%5BJournal%5D)">The pathway to muscle fibrosis depends on myostatin stimulating the differentiation of fibro/adipogenic progenitor cells in chronic kidney disease.</a> Kidney International. 91 (1), 119-128 (2017).</li>
<li>Lemos, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nilotinib+reduces+muscle+fibrosis+in+chronic+muscle+injury+by+promoting+TNF-mediated+apoptosis+of+fibro%2Fadipogenic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Nilotinib reduces muscle fibrosis in chronic muscle injury by promoting TNF-mediated apoptosis of fibro/adipogenic progenitors.</a> Nature Medicine. 21 (7), 786-794 (2015).</li>
<li>Joe, A. W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nature Cell Biology. 12 (2), 153-163 (2010).</li>
<li>Biferali, B., Proietti, D., Mozzetta, C., Madaro, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro-adipogenic+progenitors+cross-talk+in+skeletal+muscle%3A+the+social+network%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+In+Physiology%22%5BJournal%5D)">Fibro-adipogenic progenitors cross-talk in skeletal muscle: the social network.</a> Frontiers In Physiology. 10, 1074(2019).</li>
</ol>

著者には、開示すべき利益相反はありません。

骨格筋の再生を研究するためのさまざまな損傷モデルがあり、これには物理的、化学的、および外科的刺激の使用が含まれます10,11,12,13,14,15,16。カルジオトキシンと塩化バリウムは、筋肉の再生を開始するために最も広く使用されている2つの化学物質です10,11が、~7 dpiで一過性の線維化を引き起こし、3週間後に完全な再生をもたらします12,14</...

口腔顔面筋は、咀嚼、発話、呼吸、表情などの日常的な生理活動において重要です1。しかし、先天性口腔顔面奇形では、これらの筋肉は萎縮性および線維性の変化を示し、身体の健康と社会的認知の障害につながります2。顔面再建手術は依然として第一選択治療ですが、術後患者の最大30〜70%が依然として筋肉の喪失と筋肉機能障害に苦しんでいます3,4 口腔顔面筋の再生の失敗は、手術だけでは修正できない内因性要因に起因しています。
口腔顔面筋の出現は進化的な新規性であり、複雑な脊椎動物の頭部と心室5,6を伴います。体節由来の四肢とは異なり、口腔顔面筋は分枝弓7に由来します。これらの系統発生的および個体発生的な特徴は、彼らを明確な再生行動の素因となる可能性があります8。咬筋(MAS)は、前脛骨筋(TA)が同程度の損傷にさらされた後に完全に再生した時点で、重度の線維化を発症したことが報告されています1,9。しかし、再生の根本的なメカニズムは、まだ十分に理解されていません。
本研究では、口腔顔面筋の再生に関する検討を容易にするために、マウスの咬筋の凍結損傷モデルを確立した。線維症の表現型を評価するための時点として、損傷後14日を選択しました。これは、2つの筋肉間で識別可能な分岐が検出可能な最も早い時点であったためです。損傷後のMASの完全な再生には、少なくとも40週間が必要です1。一貫して、この研究では、損傷後14日でのTAの通常の再生と比較して、MASの凍結損傷後のコラーゲンの顕著な沈着が明らかになりました。このモデルの助けを借りて、筋萎縮と線維症のさらなる機構研究を行うことができ、その結果、手術後の口腔顔面筋の再生を促進するための潜在的な治療法の開発に役立ちます。

<table><tbody><tr><td>1 mLシリンジ</td><td>Shifeng Medical Apparatus and Instrument (Chengdu, Sichuan, China)</td><td>1 ml シリンジ</td><td>/</td></tr><tr><td>Aceton</td><td>Chron Chemicals</td><td>アセトン</td><td>/</td></tr><tr><td>接着顕微鏡スライド</td><td>Citotest Scientific</td><td>188105</td><td>/</td></tr><tr><td>Animal depilatory</td><td>Phygene Scientific</td><td>PH1877</td><td>/</td></tr><tr><td>BSA (ウシ血清アルブミン)</td><td>Solarbio Life科学</td><td>A8010</td><td>/</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>、Solarbio、ライフサイエンス</td>、<td>C0065</td><td>/</td></tr><tr><td>ロバ、反ヤギ、アレクサ、Fluor 488</td>、<td>Abcam</td><td>ab150129</td>、<td>1:200</td></tr>、<tr><td>ロバ血清</td><td>、Solarbio Life Sciences</td><td>SL050</td><td>/</td></tr><tr><td>ドライアイス</td><td>、Sinrro Technology(中国、四川省成都)、</td><td>米型ドライアイス</td><td>、</td></tr><tr><td>IFKine レッドロバ、抗ウサギ</td><td>、アプキンScientific Company</td><td>A24421</td><td>1:200</td></tr><tr><td>断熱バレル (大)</td><td>Thermos</td><td>D600</td><td>/</td></tr><tr><td>断熱バレル (小)</td><td>Polar Ware</td><td>250B</td><td>/</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Technology Company (中国広東省深セン)</td><td>R510-22</td><td>/</td></tr><tr><td>Isopentane</td><td>MACKLIN</td><td>M813375</td><td>/</td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L9393</td><td>1:1000</td></tr><tr><td>液体窒素</td><td>Sinrro Technology (Chengdu, Sichuan, China)/</td><td></td><td>/</td></tr><tr><td>M.O.M kit</td><td>Vector Laboratories</td><td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>マウス&nbsp;</td><td>&nbsp;Dashuo Biological Technology Company(中国四川省成都)</td><td>生後5週</td><td>/</td></tr><tr><td>マウント中</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>S2100</td><td>/</td></tr><tr><td>Nertral balsam</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>G8590</td><td>/</td></tr><tr><td>Pax7</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank&nbsp;</td><td>Pax7</td><td>1:5</td></tr><tr><td>Pdgfra</td><td>R&D systems</td><td>AF1062</td><td>1:40</td></tr><tr><td>Sirus Red Staining Kit</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>G1472</td><td>/</td></tr><tr><td>手術器具(鉗子、はさみ、針ホルダー、メス、縫合糸)</td><td>Zhuoyue Medical Instrument (Suqian, Jiangsu, China)/</td><td></td><td>/</td></tr><tr><td>Tissue-tek OCT</td><td>Sakura</td><td>4583</td><td>/</td></tr><tr><td>Triton</td><td>Shanghai Scigrace Biotech</td><td>ABIO-Biofroxx-0006A</td><td>/</td></tr><tr><td>ゾレチル</td><td>ビルバック</td><td>ゾレチル 50</td><td>/</td></tr></tbody></table>

口腔顔面筋線維症モデルを確立するためのマウス咬筋の凍結損傷

Freezing Injury in Mouse Masseter Muscle to Establish an Orofacial Muscle Fibrosis Model

口腔顔面筋は骨格筋組織のサブセットを構成し、明確な進化の軌跡と発達の起源を持っています。体節由来の四肢筋とは異なり、口腔顔面筋は分枝弓に由来し、脳神経堤が排他的に寄与しています。最近の研究では、口腔顔面筋群でも再生が異なることが明らかになりました。しかし、その根底にある規制メカニズムは、まだ解明されていません。現在の骨格筋再生モデルは、主に手足と体幹の筋肉に焦点を当てています。このプロトコルでは、ドライアイスを使用してマウス咬筋と前脛骨筋の凍結損傷を誘発し、口腔顔面筋線維症モデルを作成しました。筋衛星細胞と線維脂肪形成前駆細胞の時間的動態は、2つの筋肉間で異なり、筋線維再生の障害と過剰な細胞外マトリックス沈着につながった。このモデルの助けを借りて、口腔顔面領域の筋肉再生に関するより深い調査を実施し、口腔顔面疾患の患者に対する治療アプローチを開発できます。

HEとシリウスレッド染色(図4および補足図S1)により、この凍結損傷モデルでTAの完全な筋肉再生が明らかになりました。対照的に、MASは筋線維再生の障害と過剰な細胞外マトリックス沈着を示しました。無傷のMAS筋とTA筋の組織型を図4A、Bに示します。ここでは、筋線維が整列しており、線維化領域は間質性空間と異なる束の間にのみ現れます。TA筋は、損傷後14日で無傷のコントロールとほぼ同じ筋肉構造を維持していましたが(図4G-J)、MAS筋の構造はひどく乱れていました(図4C-F)。線維化領域は、MAS筋の前方、中央、および後方の断面のほぼすべての筋線維の代わりに現れました...

このプロトコルの目標は、口腔顔面筋線維症モデルを確立することです。凍結傷害後のマウス咬筋と前脛骨筋の組織型の比較により、咬筋線維症が確認された。このモデルは、口腔顔面筋線維症の根底にあるメカニズムのさらなる調査を容易にします。

Orofacial muscle constitutes a subset of skeletal muscle tissue, with a distinct evolutionary trajectory and development origin. Unlike the somite-derived ...

現在の骨格筋の再生研究は、単に四肢と体幹の筋肉に焦点を当てているだけで、口腔顔面筋の再生の特徴とメカニズムはほとんど解明されていません。この研究の範囲は、口腔顔面領域の筋肉再生に関するさらなる研究を促進するために、より簡単で信頼性の高いマウスモデルを作成することです。最近の開発では、口腔顔面筋は骨格筋のユニークなサブセットを構成し、明確な進化の軌跡と発生の起源を持つことがレビューされています。彼らはまた、手足の対応物とは異なる再生性能を示します。口腔顔面筋の再生をより深く調査することは、これらの顕著な違いの根底にあるメカニズムを理解するために必要です。この研究は、口腔顔面筋の再生を研究するための迅速で再現性のある方法を提示しています。半凍結傷害プロセスは20分かかり、収穫プロセスはマウスごとにわずか10分かかり、マウスは移動を損なうことなく損傷に十分に耐えることができます。私たちのモデルは、形態学、組織学、および分子調節の観点から、線維性咬筋と完全に再生された前脛骨筋との間のその後の比較を可能にするため、根本的なメカニズムを深く掘り下げるための2つの力を提供します。今後の研究では、常在筋幹細胞と複数のニッチ細胞の変化の因果関係に焦点を当て、それに対応して口腔顔面筋線維症のプロセスに対する介入を発展させていきます。

freezing-injury-mouse-masseter-muscle-to-establish-an-orofacial

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

中大脳動脈閉塞（MCAO）の種々のマウスモデルが広く実験的脳研究において使用される。ここでは、人間の虚血性脳卒中の過半数によって課さ被害に対応する大き​​さの一貫した皮質梗塞を生成し、経頭蓋永久遠位MCAOのモデルを示しています。...

マウスにおけるモデリングのストローク：遠位中大脳動脈の永久的な凝固

マウスの顔面神経に切断または粉砕軸切開術を行う方法を詳述した外科的プロトコルを提示します。顔面神経軸索切開術は、神経損傷に対する生理学的反応を研究し、治療技術をテストするために使用できます。...

マウスにおける顔面神経軸索切断：傷害に運動ニューロン応答を研究するためのモデル

このプロトコルは、マウスで下顎第一大臼歯を抽出する方法の段階的な詳細を示しています。これは、顎骨の治癒と再生に焦点を当てた研究者に代替方法を提供します。...

マウス下顎大臼歯抽出ソケット治癒モデルの確立

ここでは、ラット咬筋の体積筋損失(VML)損傷を外科的に作成するためのプロトコルについて説明し、頭蓋顔面筋損傷の研究と新規ヒドロゲルなどの生体材料を使用したその治療のための再現性とアクセス可能なモデルを提供します。...

バイオエンジニアリング材料の研究のための咬筋体積筋損失のげっ歯類モデル

ここでは、頭蓋長耳挙筋 (LAL) の in vivo...

頭蓋挙筋長耳骨格筋の In vivo エレクトロポレーションと短期再神経支配の組み合わせ

このプロトコルは、下顎骨の修復を分析するための包括的で効率的な方法を提供します。マウスモデルにおける非安定化下顎骨折の再現可能な技術について説明し、組織の損傷と骨の損失を最小限に抑えながら軟骨内骨修復のプロセスを分析できるようにします。...

マウスモデルにおける非安定化下顎骨折に対する低侵襲技術

体積筋喪失(VML)損傷は内因性再生能力を超え、永続的な機能障害をもたらします。現在のVMLの研究は、主に手足と体幹の筋肉に焦点を当てています。VMLの機構研究を頭蓋顔面筋に拡張するために、この記事では、VML損傷前およびVML損傷後の咬筋機能の縦断的評価のための in vivo...

体積筋損失(VML)損傷の外科的作成後のラット咬筋のin vivo機能評価

卵巣癌の同所性動物モデルは、より良い人間の病気を複製し、従って、癌の進行と治療に対する腫瘍の反応の理解を高める。マウスモデルでは、ルシフェラーゼを発現する卵巣腫瘍細胞のintrabursal注射を受け取ります。治療は、経口胃管栄養法により投与される。腫瘍の成長はによって監視されています...

生体イメージングおよび卵巣癌の同所性マウスモデルにおける治療的処置の

生細胞におけるストア作動性カルシウムエントリの蛍光ベースの測定：培養癌細胞から骨格筋線維に

我々は、直接筋力、筋パワー、収縮動態との単離された骨格筋の疲労を測定する方法を説明します...

隔離された骨格筋の収縮、倦怠感や交互の ex vivo での評価

学ぶマウス咬筋の凍結損傷法による口腔顔面筋線維症モデルの確立。前脛骨筋との再生能の違いを比較し、線維化メカニズムの解明に貢献する信頼性の高い実験系を提供します。

口腔顔面筋線維症モデルを確立するためのマウス咬筋の凍結損傷

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