Name: レーザーキャプチャーマイクロダイセクションによる口腔粘膜下線維症サンプルからの形態学的および空間的情報による細胞の分離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-08-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 42 s
Description: 学ぶレーザーキャプチャーマイクロダイセクションによる口腔粘膜下線維症サンプルからの形態学的および空間的情報による細胞の分離法。パラフィン包埋組織を用いて多層オミクス解析と悪性転化メカニズムを解明する。

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この研究は、中国国家自然科学基金会(81671006、81300894)、CAMS Innovation Fund for Medical Sciences(2019-I2M-5-038)、National clinical key discipline construction project(PKUSSNKP-202102)、Innovation Fund for Outstanding Doctoral Candidates of Peking University Health Science Center(BMU2022BSS001)の研究助成金の支援を受けて行われました。

この研究は、北京大学学院病院の治験審査委員会によって承認されました。インフォームドコンセントは患者から得られました。この研究で使用された組織サンプルは匿名化されました。研究スキームを 図1に示します。
1. サンプル調製
<ol><li>ホルマリン固定パラフィン包埋口粘膜下線維症組織を、ミクロトーム上で厚さ3μmおよび10μmの連続切片に切断します。</li>
	<li>セクションを水中で広げてから、スライドに釣ります。3 μMと10 μmの切片を、それぞれ接着顕微鏡スライド(スライドA)とPENメンブレンスライド(スライドB)に固定します。</li>
	<li>スライドを60°Cのホットプレートに2時間置きます。</li>
</ol>2. ヘマトキシリン-エオシン染色
<ol><li>スライドAとBをキシレン(注意)に10分間入れ、この手順を3回繰り返します。</li>
	<li>水和物AおよびBを100%、100%、90%、80%、70%の順に段階的エタノール溶液中で各濃度で1分間スライドさせる。</li>
	<li>スライドAとBを超高純度蒸留水に30秒間入れます</li>
	<li>スライドAとBをハリスヘマトキシリン染料溶液に90秒間入れます。</li>
	<li>スライドAとBを超高純度蒸留水に30秒間入れ、このステップを3回繰り返します。</li>
	<li>スライドAとBをdiv-ヘマトキシリン溶液(CAUTION)に2秒間入れます。</li>
	<li>スライドAとBを超高純度蒸留水に30秒間入れ、このステップを3回繰り返します。</li>
	<li>スライドをAとBに入れ、1%の青色溶液に2秒間入れます。</li>
	<li>スライドAとBを超高純度蒸留水に30秒間入れ、このステップを3回繰り返します。</li>
	<li>スライドをエオシン溶液に2秒間入れます。</li>
	<li>スライドAとBを超高純度蒸留水に30秒間入れ、このステップを3回繰り返します。</li>
	<li>スライドを段階的エタノール溶液中で、70%、80%、90%、100%、100%の順に各濃度で2秒間脱水します。</li>
	<li>スライドAをキシレンに3分間入れ、このステップを2回繰り返します。</li>
	<li>スライドAに封入剤(注意)を一滴加え、カバーガラスで覆います。</li>
</ol>3. 組織形態の観察とレーザー捕捉顕微解剖
<ol><li>レーザーマイクロダイセクションシステムとソフトウェアを起動します(図2)。</li>
	<li>スライドAをスライドステージに置き、組織学的形態を観察して、レーザーマイクロダイセクションの対象領域を特定します。</li>
	<li>スライドAを取り外し、スライドBをスライドステージに逆向きに置きます。</li>
	<li>[Unload](アンロード)ボタン(図2)をクリックして、収集デバイスを押し出します。ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)チューブを採取装置に挿入し、チューブが固定されていることを確認します。[OK]ボタンをクリックします(図3)。</li>
	<li>Collector Device: Tube Caps(コレクターデバイス:チューブキャップ)とマークされた対応する赤い円をクリックして、キャップを選択します。選択した円が緑色に変わります。</li>
	<li>[ 描画 ] ボタンと [描画 + 切り取り ] ボタンをクリックし、マウスを使用して対象領域をスケッチします。</li>
	<li>[ カットの開始 ]ボタンをクリックして、対象領域をキャプチャします。捕捉されたサンプルはキャップによって収集されます(図4)。</li>
	<li>下ボタンをクリックして、キャプチャしたサンプルが確実に収集されるようにします(図5)。</li>
	<li>[ 検体 ]ボタンをクリックして、次のサンプルをキャプチャします。</li>
	<li>[アンロード]ボタンをクリックして、キャプチャしたサンプルを含むPCRチューブをアン ロード します。</li>
</ol>

空間オミクス解析のための口腔粘膜下線維症組織サンプルの採取

<ol><li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+clinicopathological+study+of+674+cases+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A clinicopathological study of 674 cases in China.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. 48 (4), 321-325 (2019).</li>
<li>Cai, X., Huang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinicopathological+factors+associated+with+progression+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+population-based+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Clinicopathological factors associated with progression of oral submucous fibrosis: A population-based retrospective study.</a> Oral Oncology. 130, 105949(2022).</li>
<li>Ray, J. G., Chatterjee, R., Chaudhuri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+global+challenge.+Rising+incidence%2C+risk+factors%2C+management%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Periodontology+2000%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A global challenge. Rising incidence, risk factors, management, and research priorities.</a> Periodontology 2000. 80 (1), 200-212 (2019).</li>
<li>Shih, Y. H., Wang, T. H., Shieh, T. M., Tseng, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+A+Review+on+etiopathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: A Review on etiopathogenesis, diagnosis, and therapy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (12), 2940(2019).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preliminary+exploration+of+immune+microenvironment+in+oral+leukoplakia+concomitant+with+oral+submucosal+fibrosis%3A+A+comparative+immunohistochemical+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Pathology+%26+Medicine%22%5BJournal%5D)">The preliminary exploration of immune microenvironment in oral leukoplakia concomitant with oral submucosal fibrosis: A comparative immunohistochemical study.</a> Journal of Oral Pathology & Medicine. , (2023).</li>
<li>Warnakulasuriya, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+potentially+malignant+disorders%3A+A+consensus+report+from+an+international+seminar+on+nomenclature+and+classification%2C+convened+by+the+WHO+Collaborating+Centre+for+Oral+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Oral potentially malignant disorders: A consensus report from an international seminar on nomenclature and classification, convened by the WHO Collaborating Centre for Oral Cancer.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1862-1880 (2021).</li>
<li>Cai, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+validation+of+a+nomogram+prediction+model+for+malignant+transformation+of+oral+potentially+malignant+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Development and validation of a nomogram prediction model for malignant transformation of oral potentially malignant disorders.</a> Oral Oncology. 123, 105619(2021).</li>
<li>Murthy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+rate+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation rate of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Journal of Clinical Medicine. 11 (7), 1793(2022).</li>
<li>Kujan, O., Mello, F. W., Warnakulasuriya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Malignant+transformation+of+oral+submucous+fibrosis%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Malignant transformation of oral submucous fibrosis: A systematic review and meta-analysis.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1936-1946 (2020).</li>
<li>Qin, X., Ning, Y., Zhou, L., Zhu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+submucous+fibrosis%3A+Etiological+mechanism%2C+malignant+transformation%2C+therapeutic+approaches+and+targets%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oral submucous fibrosis: Etiological mechanism, malignant transformation, therapeutic approaches and targets.</a> International Journal of Molecular Sciences. 24 (5), 4992(2023).</li>
<li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+and+spatial+dissection+of+precancerous+lesions+underlying+the+initiation+process+of+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Discovery%22%5BJournal%5D)">Single-cell and spatial dissection of precancerous lesions underlying the initiation process of oral squamous cell carcinoma.</a> Cell Discovery. 9 (1), 28(2023).</li>
<li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+the+dynamic+evolution+from+preneoplasia+to+invasive+lung+adenocarcinoma+by+integrating+single-cell+RNA+sequencing+and+spatial+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+%26+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Delineating the dynamic evolution from preneoplasia to invasive lung adenocarcinoma by integrating single-cell RNA sequencing and spatial transcriptomics.</a> Experimental & Molecular Medicine. 54 (11), 2060-2076 (2022).</li>
<li>Ji, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodal+analysis+of+composition+and+spatial+architecture+in+human+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Multimodal analysis of composition and spatial architecture in human squamous cell carcinoma.</a> Cell. 182 (2), 497-514 (2020).</li>
<li>Van den Bossche, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microenvironment-driven+intratumoral+heterogeneity+in+head+and+neck+cancers%3A+clinical+challenges+and+opportunities+for+precision+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Drug+Resistance+Updates%22%5BJournal%5D)">Microenvironment-driven intratumoral heterogeneity in head and neck cancers: clinical challenges and opportunities for precision medicine.</a> Drug Resistance Updates. 60, 100806(2022).</li>
<li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improvement+in+the+risk+assessment+of+oral+leukoplakia+through+morphology-related+copy+number+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Science+China.+Life+sciences%22%5BJournal%5D)">Improvement in the risk assessment of oral leukoplakia through morphology-related copy number analysis.</a> Science China. Life sciences. 64 (9), 1379-1391 (2021).</li>
<li>Watkins, T. B. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pervasive+chromosomal+instability+and+karyotype+order+in+tumour+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pervasive chromosomal instability and karyotype order in tumour evolution.</a> Nature. 587 (7832), 126-132 (2020).</li>
<li>Odell, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneuploidy+and+loss+of+heterozygosity+as+risk+markers+for+malignant+transformation+in+oral+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Aneuploidy and loss of heterozygosity as risk markers for malignant transformation in oral mucosa.</a> Oral Diseases. 27 (8), 1993-2007 (2021).</li>
<li>Wood, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+road+to+invasion-examining+the+similarities+and+differences+in+the+genomes+of+associated+oral+pre-cancer+and+cancer+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Medicine%22%5BJournal%5D)">The genomic road to invasion-examining the similarities and differences in the genomes of associated oral pre-cancer and cancer samples.</a> Genome Medicine. 9 (1), 53(2017).</li>
<li>Venugopal, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+proteomics+based+on+2D+gel+electrophoresis+and+mass+spectrometry+with+validations%3A+Identification+of+a+biomarker+compendium+for+oral+submucous+fibrosis-An+indian+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Personalized+Medicine%22%5BJournal%5D)">Integrated proteomics based on 2D gel electrophoresis and mass spectrometry with validations: Identification of a biomarker compendium for oral submucous fibrosis-An indian study.</a> Journal of Personalized Medicine. 12 (2), 208(2022).</li>
<li>Kundu, P., Pant, I., Jain, R., Rao, S. G., Kondaiah, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+DNA+methylation+changes+in+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Diseases%22%5BJournal%5D)">Genome-wide DNA methylation changes in oral submucous fibrosis.</a> Oral Diseases. 28 (4), 1094-1103 (2022).</li>
<li>Cai, X., Zhang, H., Li, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-target+pharmacological+mechanisms+of+Salvia+miltiorrhiza+against+oral+submucous+fibrosis%3A+A+network+pharmacology+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Oral+Biology%22%5BJournal%5D)">Multi-target pharmacological mechanisms of Salvia miltiorrhiza against oral submucous fibrosis: A network pharmacology approach.</a> Archives of Oral Biology. 126, 105131(2021).</li>
<li>Xiao, X., Hu, Y., Li, C., Shi, L., Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DNA+content+abnormality+in+oral+submucous+fibrosis+concomitant+leukoplakia%3A+A+preliminary+evaluation+of+the+diagnostic+and+clinical+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostic+Cytopathology%22%5BJournal%5D)">DNA content abnormality in oral submucous fibrosis concomitant leukoplakia: A preliminary evaluation of the diagnostic and clinical implications.</a> Diagnostic Cytopathology. 48 (11), 1111-1114 (2020).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long+non-coding+RNA+expression+profile+associated+with+malignant+progression+of+oral+submucous+fibrosis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Long non-coding RNA expression profile associated with malignant progression of oral submucous fibrosis.</a> Journal of Oncology. 2019, 6835176(2019).</li>
<li>Lunde, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profiling+of+chromosomal+changes+in+potentially+malignant+and+malignant+oral+mucosal+lesions+from+South+and+Southeast+Asia+using+array-comparative+genomic+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Genomics+%26+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Profiling of chromosomal changes in potentially malignant and malignant oral mucosal lesions from South and Southeast Asia using array-comparative genomic hybridization.</a> Cancer Genomics & Proteomics. 11 (3), 127-140 (2014).</li>
<li>Sun, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatially+resolved+metabolomics+to+discover+tumor-associated+metabolic+alterations%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Spatially resolved metabolomics to discover tumor-associated metabolic alterations.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (1), 52-57 (2019).</li>
<li>Ma, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copy+number+alteration+profiling+facilitates+differential+diagnosis+between+ossifying+fibroma+and+fibrous+dysplasia+of+the+jaws%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Oral+Science%22%5BJournal%5D)">Copy number alteration profiling facilitates differential diagnosis between ossifying fibroma and fibrous dysplasia of the jaws.</a> International Journal of Oral Science. 13 (1), 21(2021).</li>
</ol>

著者らは、利益相反がないことを宣言します。

このプロトコルは、レーザーマイクロダイセクションによるさらなる空間オミクス分析のために、形態学的および空間的情報を含むOSF組織サンプルを捕捉するパイプラインを報告しました。代表的な結果から、形態に関連するさまざまなサンプル間で異なるCNAパターンを特定しました。
OPMDの一種であるOSFは、口腔扁平上皮がんの一般的な前がん状態です6。ゲノムの不安定性は、OPMDの発症と悪性形質転換に関連していることが報告されています17,18。ゲノミクス、トランスクリプトミクス、プロテオミクスのデータから、OSFの進行と悪性形質転換に関連する染色体の変化、遺伝子発現の違い、エピジェネティックな変異が複数の研究で報告されています19,20,21,22,23,24 <sup class="xref...

口腔粘膜下線維症(OSF)は、主に頬粘膜に発症し、口の開きが制限される慢性の潜行性疾患です1。OSFは多因子性疾患ですが、ビンロウの実やビンロウの咀嚼がOSF 2,3の主な原因です。この地理的に特異的な習性のため、OSFは主に東南アジアと南アジアの集団に集中しています3。OSFの一般的な組織学的特徴には、口腔粘膜上皮下の結合組織における異常なコラーゲン沈着、血管狭窄、および閉塞が含まれます1。OSF上皮組織は、口腔白板症を併発すると、萎縮または過形成、さらには異形成の症状を呈することがあります4,5。
OSFは、世界保健機関によって、悪性形質転換率が4%〜6%の口腔扁平上皮癌に進行する可能性のある一般的な口腔悪性疾患(OPMD)として定義されています6,7,8,9。OSFの悪性形質転換の根底にあるメカニズムは複雑である10。異形成と萎縮の両方を含む上皮の異常な増殖は発がんの可能性を高め、間質の老化線維芽細胞は、活性酸素種(ROS)やその他の分子を介して上皮間葉転換(EMT)を誘導することにより、OSFの悪性進行に関与している可能性があります10。
空間オミクス解析技術は、形態学的および空間的情報を含むマルチオミクスデータを生成し、がんのメカニズムに関する洞察を提供しました11,12,13。ここでは、レーザーマイクロダイセクションによってホルマリン固定パラフィン包埋OSF組織から形態関連細胞集団を捕捉するプロトコルを提示します。これらのサンプルのマルチオミクス解析は、組織内の不均一性に関する課題を克服し、OSF14における分子病理学と悪性形質転換のメカニズムの理解を深めることができます。

<table><tbody><tr><td>接着顕微鏡スライド</td><td>CITOTEST</td><td>REF.188105</td><td></td></tr><tr><td>Div-ヘマトキシリン</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>エオシン溶液</td><td>BASO</td><td>BA4098</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>PEKING 試薬</td><td>No.32061</td><td></td></tr><tr><td>ハリスヘマトキシリン染料</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>ホットプレート</td><td>ライカ</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>レーザーキャプチャーマイクロダイセクションシステム</td><td>LEICA</td><td>LMD7</td><td>マシン</td></tr><tr><td>レーザーマイクロダイセクションマイクロシステム</td><td>LEICA</td><td>8.2.3.7603</td><td>ソフトウェア</td></tr><tr><td>マイクロマウント実装媒体</td><td>LEICA</td><td>REF.3801731</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡カバーガラス</td><td>CITOTEST</td><td>REF.10212450C</td><td></td></tr><tr><td>ミクロトーム</td><td>LEICA</td><td>RM2235</td><td></td></tr><tr><td>PCRチューブ</td><td>AXYGEN</td><td>16421959</td><td></td></tr><tr><td>PEN膜スライド</td><td>ライカ</td><td>No.11505158</td><td></td></tr><tr><td>リブルー溶液</td><td>YiLi</td><td>20230326</td><td></td></tr><tr><td>超高純度蒸留水</td><td>Invitrogen</td><td>REF.10977-015</td><td></td></tr><tr><td>キシレン</td><td>PEKING試薬</td><td>No.33535</td><td></td></tr></tbody></table>

レーザーキャプチャーマイクロダイセクションによる口腔粘膜下線維症サンプルからの形態学的および空間的情報による細胞の分離

Isolation of Cells with Morphological and Spatial Information from Oral Submucous Fibrosis Samples by Laser Capture Microdissection

口腔粘膜下線維症(OSF)は、口腔内の悪性の可能性のある疾患の一般的なタイプです。上皮の萎縮および固有層および粘膜下層の線維症は、病理組織学的スライドにしばしば見られる。上皮異形成、上皮萎縮、および老化線維芽細胞は、OSFの悪性形質転換に関連していることが提案されています。しかし、潜在的に悪性の口腔疾患と口腔扁平上皮癌の不均一性のため、OSFにおける悪性形質転換の特定の分子機構を特定することは困難です。本研究では、ホルマリン固定パラフィン包埋組織スライド上にレーザー捕捉マイクロダイセクションにより、形態学的データや空間情報を有する少数の上皮細胞または間葉系細胞を得る方法を紹介します。顕微鏡を用いることで、マイクロスケール(~500細胞)の異形成性または萎縮性上皮組織や線維性上皮下組織を正確に捕捉することができます。抽出された細胞は、ゲノムまたはトランスクリプトームシーケンシングによって評価され、形態学的および空間的情報を含むゲノムおよびトランスクリプトームデータを取得できます。このアプローチにより、バルクOSF組織シーケンシングの不均一性や、非病変領域の細胞によって引き起こされる干渉が除去され、OSF組織の正確な空間オミクス解析が可能になります。

OSF組織のレーザー微小解剖を行うことにより、異形成上皮、異形成上皮の下質、萎縮上皮、萎縮上皮組織下間質のサンプルを採取しました(図1)。DNAの抽出と低深度の全ゲノムシークエンシングにより、形態に関連したコピー数変化(CNA)を解析することができました15。CNAは、OPMDにおける悪性形質転換のリスクの増加に関連するゲノム不安定性の一般的な形態です15,16。4種類のサンプルから異なるCNAパターンを検出しました。図6に示すように、CNAは上皮サンプルには存在しましたが、間質サンプルには存在しませんでした。サンプルは同じ患者に由来しましたが、異形成上皮のCNAパターンは萎縮性上皮のパターンと同じではありませんでした。3番染色体と8番染色体のCNAは異形成上皮で検出され、CNAは萎縮性上皮の8番染色体でより低い頻度で検出されました。
<p cla...

口腔粘膜下線維症組織のレーザーキャプチャーマイクロダイセクションは、形態学的および空間的情報を含むマルチオミクスデータの解析のために、関心のある組織学的領域から細胞を正確に抽出することを可能にします。

Oral submucous fibrosis (OSF) is a common type of potentially malignant disorder in the oral cavity. The atrophy of epithelium and fibrosis of the lamina ...

私たちの主な研究対象は、口腔白板症や口腔粘膜下線維症などの口腔、潜在的に悪性疾患の予測モデルの開発における悪性形質転換のメカニズムです。深層学習人工知能モデルの下でのゲノムトランスクリプトーム、プロテオミクス、およびその他のマルチオミクスシーケンシング解析は、口腔がんの可能性のある悪性疾患から口腔がんへの進行を研究するために使用されます。現在のシーケンシングおよびマルチオミクス解析は、ほとんどが凍結サンプルに基づいていますが、口腔、潜在的に悪性疾患は、多くの場合、生検によって正式に固定されたパラフィン包埋組織であり、パラフィンサンプルに基づく実験技術を開発する必要があります。口腔、潜在的に悪性疾患、および扁平上皮癌からのパラフィン組織サンプルは、さまざまなソースから大量に入手できるため、研究のための非常に貴重なリソースとなっています。すべてのプロトコルは、疾患の発症と悪性形質転換のメカニズムをよりよく理解するために、これらのリソースを十分に活用するのに役立ちます。

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哺乳動物の組織のレーザーキャプチャーマイクロダイセクション

このビデオでは、3Dオルガノタイプ共培養モデルのレーザー解剖をミクロン単位の精度で説明しています。3D器官型モデルでは、線維芽細胞などの間質成分をがん上皮細胞と3次元共培養します。3Dモデルは、浸潤とがん-間質の相互作用を生理学的に近い条件で研究できるようにする実験ツールとして機能します。...

レーザーマイクロダイセクション:3D器官型培養モデルから浸潤する結腸直腸癌細胞を分離する技術

合成からのレーザーマイクロダイセクション細胞や間質、組織工学大腸癌モデルの分子プロファイリングは、浸潤性前面に腫瘍細胞および癌関連の間質細胞との間の界面に特徴的な生物学を特徴付け、分析する新規かつ操作可能なアプローチを表しています。...

大腸癌細胞の3次元モデルにおける侵襲性腫瘍微小環境の分子プロファイリングと<em&gt;生体外</em&gt;線維芽細胞

顕微解剖は、広範囲の組織内のDNA、RNA、およびタンパク質の試験のために使用されている。レーザーキャプチャー顕微鏡（LCM）は、最も一般的に使用される方法ですが、新しい製粉技術、mesodissectionは、最近になって提供されています。私たちは、 結核菌肉芽腫の組織スライドを組み込みmesodissectedホルマリン固定パラフィンからのRNA抽出を示しています。...

回復への新規マイクロダイセクションアプローチ<em&gt;結核菌</em肺肉芽腫、ホルマリン固定パラフィン包埋から&gt;特異的転写

個々のドーパミンニューロンの単離または直接または間接的な免疫組織化学との腹側被蓋領域は、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションを用いて実証されている。赤外線レーザーを用いてガラススライドから組織を単離するため、赤外および紫外レーザーの組み合わせを使用して膜のスライドからパラメータが議論されている。...

レーザーキャプチャーマイクロダイセクション - 個々のドーパミンニューロンの単離と全体の腹側被蓋領域の実証

特定の組織中の細胞のサブセットの遺伝子発現解析は、主要な課題である。この記事では、レーザーキャプチャーマイクロダイセクションで迅速な免疫標識法を組み合わせることにより、特定の細胞集団から高品質のトータルRNAを分離する方法について説明します。...

迅速な免疫標識と合わせてレーザーキャプチャーマイクロダイセクションを使用して、細胞特異的な亜集団からのRNAの単離

ここでは、転写プロファイリングのための特定の植物細胞タイプのレーザー支援マイクロダイセクションのためのプロトコルを提示します。このプロトコルはさまざまな種や細胞タイプに適していますが、焦点は、アブラナ科Boechera属の有性生殖およびアポミティック生殖に重要な雌性生殖細胞の非常にアクセスしにくい細胞にあります。...

個々の細胞タイプの転写プロファイリングのためのツールと​​してのレーザ支援顕微解剖（LAM）

このプロトコルの目標は、レーザー キャプチャ レーザーマイクロダイ セクション (LCM) を使用して固定されていない、新鮮な切除のひと腸管組織から分離した腸管神経節から整合性の高い RNA サンプルを取得することです。このプロトコルは、人間の腸組織、セクショニング、エタノール染色脱水、LCM、フラッシュ凍結サンプルの準備および RNA...

新鮮凍結ひと組織から腸管神経節の隔離のためのレーザー キャプチャ レーザーマイクロダイ セクションの最適化

レーザーマイクロディション(LMD)は、グリオーマの不均一性と侵入を媒介する経路を明らかにするために使用できる、敏感で再現性の高い技術です。ここでは、レーザーLMDを用いて、トランスクリプトーム解析を用いて、グリオーマ組織から離散領域を分離するための最適化されたプロトコルについて述べている。...

腫瘍性異種性、オンコストリーム、および浸潤の空間・分子特性解析のための神経膠腫部分領域のレーザー捕捉微小切除

このプロトコルは、レーザーマイクロダイセクションを使用して組織学分解細胞集団を濃縮するための、染色された薄い組織切片画像から病理学的に確認された関心領域を人工知能駆動でセグメンテーションするためのハイスループットワークフローを記述します。この戦略には、関心のある細胞集団を示す境界をレーザー顕微鏡に直接転送することを可能にする新しいアルゴリズムが含まれる。...

腫瘍微小環境のマイクロスケールプロテオミクス分析のための工業化された人工知能誘導レーザーマイクロダイセクション

学ぶレーザーキャプチャーマイクロダイセクションによる口腔粘膜下線維症サンプルからの形態学的および空間的情報による細胞の分離法。パラフィン包埋組織を用いて多層オミクス解析と悪性転化メカニズムを解明する。

レーザーキャプチャーマイクロダイセクションによる口腔粘膜下線維症サンプルからの形態学的および空間的情報による細胞の分離

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