Name: フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による Sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: 学ぼう、フィブリノーゲン-PAGE法を用いてSipunculus nudusから活性フィブリノゲン分解剤を迅速に分離・表示する方法。この効率的な技術は血栓溶解薬の開発を加速し、心血管疾患治療への応用が期待されます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>フィブリノーゲンを用いたピーナッツワーム中のフィブリノゲン溶解剤の解明-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
<li>Tsivgoulis, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolysis+for+acute+ischaemic+stroke%3A+current+status+and+future+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Thrombolysis for acute ischaemic stroke: current status and future perspectives.</a> Lancet Neurol. 22 (5), 418-429 (2023).</li>
<li>Tang, M., Hu, C., Lin, H., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibrinolytic+drugs+induced+hemorrhage%3A+mechanisms+and+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagul+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Fibrinolytic drugs induced hemorrhage: mechanisms and solutions.</a> Blood Coagul Fibrinolysis. 34 (5), 263-271 (2023).</li>
<li>Lu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Purification%2C+characterization%2C+and+chemical+modification+of+Bacillus+velezensis+SN-14+fibrinolytic+enzyme%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Macromol%22%5BJournal%5D)">Purification, characterization, and chemical modification of Bacillus velezensis SN-14 fibrinolytic enzyme.</a> Int J Biol Macromol. 177, 601-609 (2021).</li>
<li>Abu-Tahon, M. A., Abdel-Majeed, A. M., Ghareib, M., Housseiny, M. M., Abdallah, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombolytic+and+anticoagulant+efficiencies+of+purified+fibrinolytic+enzyme+produced+from+Cochliobolus+hawaiiensis+under+solid-state+fermentation%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Appl+Biochem%22%5BJournal%5D)">Thrombolytic and anticoagulant efficiencies of purified fibrinolytic enzyme produced from Cochliobolus hawaiiensis under solid-state fermentation.</a> Biotechnol Appl Biochem. 70 (6), 1954-1971 (2023).</li>
<li>Lin, W., Lin, H., Xin, P., Yan, H., Kang, B., Tang, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+approach+to+analyze+the+cell+components+of+cerebral+blood+clots%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive approach to analyze the cell components of cerebral blood clots.</a> J Vis Exp. (197), e65791(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Hu, C., Yan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affinity+purification+of+a+fibrinolytic+enzyme+from+Sipunculus+nudus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Affinity purification of a fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus.</a> J Vis Exp. (196), e65631(2023).</li>
<li>Tang, M., Lin, H., Huang, Y., Xu, R., Cui, X., Yan, H. Plasmin affinity purification method based on agarose gel and plasmin and application thereof. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470">https://patents.google.com/patent/CN116103270A/en?oq=CN202310108470</a> (2023).</li>
<li>Walton, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+fibrin+plate+method+for+the+assay+of+plasminogen+activators%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">An improved fibrin plate method for the assay of plasminogen activators.</a> Clinica Chimica Acta. 13 (5), 680-684 (1966).</li>
<li>Ngere, J. B., Ebrahimi, K. H., Williams, R., Pires, E., Walsby-Tickle, J., McCullagh, J. S. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ion-exchange+chromatography+coupled+to+mass+spectrometry+in+life+science%2C+environmental%2C+and+medical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Chem%22%5BJournal%5D)">Ion-exchange chromatography coupled to mass spectrometry in life science, environmental, and medical research.</a> Anal Chem. 95 (1), 152-166 (2023).</li>
<li>Kato, S., Takeuchi, K., Iwaki, M., Miyazaki, K., Honda, K., Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chitin-+and+streptavidin-mediated+affinity+purification+systems%3A+A+screening+platform+for+enzyme+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22Angew+Chem+Int+Ed+Engl%22%5BJournal%5D)">Chitin- and streptavidin-mediated affinity purification systems: A screening platform for enzyme discovery.</a> Angew Chem Int Ed Engl. 62 (31), e202303764(2023).</li>
<li>Sharma, N., Sharma, R., Rajput, Y. S., Mann, B., Singh, R., Gandhi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Separation+methods+for+milk+proteins+on+polyacrylamide+gel+electrophoresis%3A+Critical+analysis+and+options+for+better+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22International+Dairy+Journal%22%5BJournal%5D)">Separation methods for milk proteins on polyacrylamide gel electrophoresis: Critical analysis and options for better resolution.</a> International Dairy Journal. 114, 104920(2021).</li>
<li>Xu, R., Ma, G., Chen, L., Cui, X. Preparation and application of natural fibrinolytic enzyme from peanut worm. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en">https://patents.google.com/patent/CN109295042A/en</a> (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1&nbsp;M Tris-HCl (pH 6.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% アクリルアミド/ビスアクリルアミド</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>過硫酸アンモニウム</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>ビーカー</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>遠心チューブ (1.5 mL)</td><td>バイオシャープ</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>恒温インキュベータ</td><td>ーJINGHONGJHS-400</td><td></td><td></td></tr><tr><td>クーマスブリリアントブルー染色液</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>電子分析天びん</td><td>デン</td><td>バーTP-213</td><td></td></tr>フィ<tr><td>ブリノーゲン</td><td>ソーラーバイオ</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>ゲルローディングピペットチップ、バルク</td><td>バイオシャープ</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>ホモジナイザー</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>水平回転発振器</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Reference</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (1 mL)</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (10 &micro;L)</td><td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (200 μ;L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>ピペッター (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>ピペット (10&micro;L)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>ピペッター(200 & micro;L)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>ピペッター(50 & micro;L)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離</td><td>機</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>ドデシル硫酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>トリス</td><td>ソーラーバイオ</td><td>T8060</td><td></td></tr>トリ<tr><td>スHCl</td><td>ソーラーバイオ</td><td>T8230</td><td></td></tr>トリ<tr><td>トンX-100</td><td>ソーラーバイオ</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

電気泳動後、マーカーのすべてのバンドがはっきりと表示されました。1x SDS-PAGEのローディングレーンでは、10 kDaのバンド(ブロモフェノールブルー)しか表示されませんでした。sFEとピーナッツワームのサンプルには、観察可能なバンドは見られませんでした(図1)。試料のバンドは見えませんが、マーカーとブロモフェノールブルーの性能は電気泳動が成功したことを示しており、試料は分子量に応じて分離されました。
染色によりゲル全体が青くなってしまいましたが、脱色によりフィブリノゲンがフィブリノゲン分解剤によって分解された部分が透明になりました。マーカーと比較すると、sFEは25 kDa付近の活性なフィブリノゲン溶解バンドを示しました。ピーナッツワームのホモジネートは、25 kDa、33 kDa、43 kDa、および 70 kDa を超える一連のバンドを示しました(図 2)。その結果、sFEには25 kDaのフィブリノジェノジェノ分解成分しか含まれていませんでしたが、ピーナッツワームのホモジネートにはsFE成分と他のフィブリノジェノジェノ溶解剤が含まれていました。 補足図1 は、マーカーを深い青色で示し、標的サンプルを明るいバンドとして示したゲル画像の一例です。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> 図1:電気泳動後のゲル。 M:マーカー;レーン 1: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。レーン2:sFE;レーン3:1x SDS-PAGE読み込みバッファ。レーン4:ピーナッツワームホモジネート。レーン 5: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> 図2:脱色後のゲル。 M:マーカー;レーン 1: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。レーン2:sFE;レーン3:1x SDS-PAGE読み込みバッファ。レーン4:ピーナッツワームホモジネート。レーン 5: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
補足図1:マーカーを濃い青色で示し、ターゲットサンプルを明るいバンドとして示したゲル画像。 M:マーカー;レーン 1: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。レーン2:sFE;レーン3:1x SDS-PAGE読み込みバッファ。レーン4:ピーナッツワームホモジネート。レーン 5: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による Sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

rapid-separation-display-active-fibrinogenolytic-agents-sipunculus

Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

このビデオでは、ヒト非機能性下垂体腺腫(NFPA)の腫瘍組織から得られた複雑なタンパク質混合物から個々のタンパク質を分離する二次元ゲル電気泳動法を実演します。タンパク質は、最初の次元では電荷に基づいて分離され、さらに2番目の次元では分子量に基づいて分離されます。...

二次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動:電荷と分子量に基づく複雑なタンパク質混合物中のタンパク質の分析のための分離技術

このビデオでは、溶液の濁度の変化の関数として不溶性フィブリン血栓の形成を監視するための紫外可視分光光度計の使用を示しています。紫外可視分光光度計は、溶液の吸光度を経時的に測定し、不溶性フィブリン塊の形成による濁度の変化を表します。...

フィブリン血栓形成モニタリングのための紫外可視分光法

組換えプロトタイプ フォーミー ウイルス インテグラーゼ...

組換えプロトタイプ フォーミー ウイルス インテグラーゼの浄化中にヌクレアーゼの混入の検出と除去

目的は、液相等電体集光(IEF)法を用いることによって、生理活性小分子、複雑な植物抽出物からのペプチド、および病原性微生物からのタンパク質を分画し、単離することです。さらに、分離した分子を同定し、その生物活性を確認した。...

生物活性小分子、天然源からのペプチド、微生物からのタンパク質の分離(IEF)法による分離

本報告書では、生物学的試料から硫酸化グリコサミノグリカン(GAG)を分離して精製する技術と、そのサイズを近似するポリアクリルアミドゲル電気泳動法について説明する。GAGsは、組織構造に寄与し、タンパク質との静電相互作用を通じてシグナル伝達プロセスに影響を与えます。GAGポリマー長は、同結合リガンドに対する結合親和性に寄与する。...

ポリアクリルアミドゲル電気泳動と銀染色によるグリコサミノグリカンの検出

シプンクルスヌーダスからの線維素溶解酵素の親和性精製

ここで使用した実験は、低分子とタンパク質標的の間の相互作用を予測および検証するために、細胞の熱シフトアッセイと組み合わせた分子ドッキングの方法を示しています。...

低分子化合物のタンパク質標的予測と検証

プロテイナーゼは細菌の病因に不可欠であり、侵入と免疫回避を可能にします。細菌の細胞質タンパク質と膜タンパク質を活性型で一段階で抽出することは悲惨です。このビデオ記事では、ゼラチナーゼを検出および特性評価するためのザイモグラフィー分析のために 、レプトスピラ の全細胞タンパク質を抽出する方法を示します。...

細菌ゼラチナーゼのワンステップ抽出とザイモグラフィー分析

本研究は、せん断応力を用いて血液中の血栓形成を誘発し、多次元読み取りによって血栓を特徴付けるマイクロ流体アッセイを記述しています。このアッセイは血液サンプルの血栓促進傾向を測定できるため、疾患診断、薬剤開発、さらには血栓症に関連する基本的なメカニズム研究に役立ちます。...

血栓プロファイリングアッセイ:生体力学的血栓形成を包括的に特徴づけるためのマイクロ流体ベースのプラットフォーム

このプロトコルは、トロンビンとプラズミン生成を同時かつ時間分解で測定し、凝固と線維溶合の統合評価を可能にするナイメーヘン止血アッセイを説明しています。このアッセイは、従来の止血試験の範囲を超えた研究および臨床現場での止血バランスの特徴付けを改善することを目的としています。...

ナイメーヘン止血アッセイ:単一のウェルにおけるトロンビンとプラズミン生成の同時蛍光生成測定

学ぼう、フィブリノーゲン-PAGE法を用いてSipunculus nudusから活性フィブリノゲン分解剤を迅速に分離・表示する方法。この効率的な技術は血栓溶解薬の開発を加速し、心血管疾患治療への応用が期待されます。

フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による Sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示

さらに動画を探す