Name: フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による Sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-19T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 36 s
Description: 学ぼう、フィブリノーゲン-PAGE法を用いてSipunculus nudusから活性フィブリノゲン分解剤を迅速に分離・表示する方法。この効率的な技術は血栓溶解薬の開発を加速し、心血管疾患治療への応用が期待されます。

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<meta charset="utf8"></head><body>フィブリノーゲンを用いたピーナッツワーム中のフィブリノゲン溶解剤の解明-PAGE

<ol><li>Bikdeli, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((COVID-19+and+thrombotic+or+thromboembolic+disease%3A+Implications+for+prevention%2C+antithrombotic+therapy%2C+and+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">COVID-19 and thrombotic or thromboembolic disease: Implications for prevention, antithrombotic therapy, and follow-up.</a> J Am Coll Cardiol. 75 (23), 2950-2973 (2020).</li>
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<table><tbody><tr><td>1&nbsp;M Tris-HCl (pH 6.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1020</td><td></td></tr><tr><td>1.5 M Tris-HCl (pH 8.8)</td><td>Solarbio</td><td>T1010</td><td></td></tr><tr><td>30% アクリルアミド/ビスアクリルアミド</td><td>Biosharp</td><td>BL513B</td><td></td></tr><tr><td>過硫酸アンモニウム</td><td>XiLONG SCIENTIFIC</td><td>7727-54-0</td><td></td></tr><tr><td>ビーカー</td><td>PYREX</td><td>2-9425-02</td><td></td></tr><tr><td>遠心チューブ (1.5 mL)</td><td>バイオシャープ</td><td>BS-15-M</td><td></td></tr><tr><td>恒温インキュベータ</td><td>ーJINGHONGJHS-400</td><td></td><td></td></tr><tr><td>クーマスブリリアントブルー染色液</td><td>Beyotime</td><td>P0017F</td><td></td></tr><tr><td>電子分析天びん</td><td>デン</td><td>バーTP-213</td><td></td></tr>フィ<tr><td>ブリノーゲン</td><td>ソーラーバイオ</td><td>F8051</td><td></td></tr><tr><td>ゲルローディングピペットチップ、バルク</td><td>バイオシャープ</td><td>BS-200-GTB</td><td></td></tr><tr><td>ホモジナイザー</td><td>AHS</td><td>ATS-1500</td><td></td></tr><tr><td>水平回転発振器</td><td>NuoMi</td><td>NMSP-600</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q Reference</td><td>Millipore</td><td>Z00QSV0CN</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra Cell</td><td>BIO-RAD</td><td>165-8000~165-8007</td><td></td></tr><tr><td>N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine</td><td>Sigma</td><td>T9281</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (1 mL)</td><td>Axygene</td><td>T-1000XT-C</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (10 &micro;L)</td><td>Axygene</td><td>T-10XT-C</td><td></td></tr><tr><td>ピペットチップ (200 μ;L)</td><td>Axygene</td><td>T-200XT-C</td><td></td></tr><tr><td>ピペッター (1 mL)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ZY18723</td><td></td></tr><tr><td>ピペット (10&micro;L)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ZX98775</td><td></td></tr><tr><td>ピペッター(200 & micro;L)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ZY20280</td><td></td></tr><tr><td>ピペッター(50 & micro;L)</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ZY15331</td><td></td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離</td><td>機</td><td>H1650R</td><td></td></tr><tr><td>ドデシル硫酸ナトリウム</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>V900859</td><td></td></tr><tr><td>トリス</td><td>ソーラーバイオ</td><td>T8060</td><td></td></tr>トリ<tr><td>スHCl</td><td>ソーラーバイオ</td><td>T8230</td><td></td></tr>トリ<tr><td>トンX-100</td><td>ソーラーバイオ</td><td>T8200</td><td></td></tr></tbody></table>

フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示

Rapid Separation and Display of Active Fibrinogenolytic Agents in Sipunculus nudus through Fibrinogen-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

電気泳動後、マーカーのすべてのバンドがはっきりと表示されました。1x SDS-PAGEのローディングレーンでは、10 kDaのバンド(ブロモフェノールブルー)しか表示されませんでした。sFEとピーナッツワームのサンプルには、観察可能なバンドは見られませんでした(図1)。試料のバンドは見えませんが、マーカーとブロモフェノールブルーの性能は電気泳動が成功したことを示しており、試料は分子量に応じて分離されました。
染色によりゲル全体が青くなってしまいましたが、脱色によりフィブリノゲンがフィブリノゲン分解剤によって分解された部分が透明になりました。マーカーと比較すると、sFEは25 kDa付近の活性なフィブリノゲン溶解バンドを示しました。ピーナッツワームのホモジネートは、25 kDa、33 kDa、43 kDa、および 70 kDa を超える一連のバンドを示しました(図 2)。その結果、sFEには25 kDaのフィブリノジェノジェノ分解成分しか含まれていませんでしたが、ピーナッツワームのホモジネートにはsFE成分と他のフィブリノジェノジェノ溶解剤が含まれていました。 補足図1 は、マーカーを深い青色で示し、標的サンプルを明るいバンドとして示したゲル画像の一例です。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig01.jpg"> 図1:電気泳動後のゲル。 M:マーカー;レーン 1: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。レーン2:sFE;レーン3:1x SDS-PAGE読み込みバッファ。レーン4:ピーナッツワームホモジネート。レーン 5: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66536/66536fig02.jpg"> 図2:脱色後のゲル。 M:マーカー;レーン 1: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。レーン2:sFE;レーン3:1x SDS-PAGE読み込みバッファ。レーン4:ピーナッツワームホモジネート。レーン 5: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/66536fig02large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
補足図1:マーカーを濃い青色で示し、ターゲットサンプルを明るいバンドとして示したゲル画像。 M:マーカー;レーン 1: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。レーン2:sFE;レーン3:1x SDS-PAGE読み込みバッファ。レーン4:ピーナッツワームホモジネート。レーン 5: 1x SDS-PAGE 読み込みバッファー。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66536/Supplementary%20Figure%201.zip" target="_blank">このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。</a>

フィブリノーゲン-ポリアクリルアミドゲル電気泳動による Sipunculus nudus における活性フィブリノゲン分解剤の迅速な分離と表示

Fibrinogenolytic agents that can dissolve fibrinogen directly have been widely used in anti-coagulation treatment. Generally, identifying new ...

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