CRISPR-Based Modular Assembly for High-Throughput Construction of a UAS-cDNA/ORF Plasmid Library

Si Xu; Mengyu Chen; Guang Chen; Si Luo; Wen Xue; Xuelian Liu; Jiwu Wang; Ping Wei

doi:10.3791/66581

UAS-cDNA/ORFプラスミドライブラリーのハイスループット構築のためのCRISPRベースのモジュラーアセンブリ

JoVE Journal
Genetics

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CRISPR-Based Modular Assembly for High-Throughput Construction of a UAS-cDNA/ORF Plasmid Library

UAS-cDNA/ORFプラスミドライブラリーのハイスループット構築のためのCRISPRベースのモジュラーアセンブリ

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05:30 min

May 17, 2024

DOI: 10.3791/66581-v

Si Xu*^1,2, Mengyu Chen*^1,2, Guang Chen^1,3, Si Luo⁴, Wen Xue^1,2, Xuelian Liu^1,2, Jiwu Wang^1,2,3, Ping Wei⁴

¹Clinical Research Institute, The Affiliated Nanhua Hospital, Hengyang Medical School,University of South China, ²Department of Neurology, The Affiliated Nanhua Hospital, Hengyang Medical School,University of South China, ³Department of Clinical Laboratory, The Affiliated Nanhua Hospital, Hengyang Medical School,University of South China, ⁴Shanghai Diabetes Institute, Shanghai Key Laboratory of Diabetes Mellitus, Shanghai Clinical Center for Diabetes,Shanghai Sixth People's Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

本稿では、一般に公開されているcDNA/ORFリソースを用いて ショウジョウバエ のUAS-cDNA/ORFプラスミドライブラリをハイスループットで構築する方法であるCRISPRベースのモジュラーアセンブリ(CRISPRmass)のプロトコールを紹介します。CRISPRmassは、さまざまなプラスミドライブラリーの編集に適用できます。

機能的ゲノムスクリーニングは、遺伝子機能を調べるための強力なアプローチを提供し、ゲノムワイドなプラスミドライブラリーの構築に依存しています。プラスミドライブラリー構築のための従来のアプローチは、時間と手間がかかります。この問題を解決するために、私たちはシンプルで効率的な方法、CRISPRベースのモジュラーアセンブリ(CRISPRmass)を開発しています。

CRISPR/Cas9によるcDNAまたはORFプラスミドの共有ベクター配列の切断と、それに続く隣接アセンブリによるUASモジュールの挿入により、CRISPRmassによるゲノムワイドプラスミドライブラリーの構築手順は、細菌の形質転換前の超並列な2ステップ試験管反応として標準化されています。CRISPRmassは、さまざまなプラスミドライブラリーをシンプル、迅速、効率的、かつ費用対効果の高い方法で構築することができます。また、一般的にさまざまなゲノムワイドプラスミドライブラリの編集にも適用でき、ハイスループットプラスミドライブラリ編集におけるゲートウェイ技術の代替手段であり、生物学的ネットワークのグローバルな研究への道を開きます。

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