Name: 小葉全体のマウスにおける肺微小血管密度の定量化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-03T12:40:00.000+00:00
Duration: 10 min
Description: 学ぶマウス肺微小血管密度の定量化法。イソレクチンB4染色とImageJ解析を用いて、小葉間の解剖学的差異と加齢による変化を評価する信頼性の高いプロトコルを紹介します。

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<meta charset="utf8"></head><body>マウスにおけるイソレクチンB4染色による肺微小血管系の評価

<ol><li>Jia, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fgf-2+promotes+angiogenesis+through+a+srsf1%2Fsrsf3%2Fsrpk1-dependent+axis+that+controls+vegfr1+splicing+in+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Fgf-2 promotes angiogenesis through a srsf1/srsf3/srpk1-dependent axis that controls vegfr1 splicing in endothelial cells.</a> BMC Biol. 19 (1), 173(2021).</li>
<li>Schneider, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+aging+lung%3A+Physiology%2C+disease%2C+and+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The aging lung: Physiology, disease, and immunity.</a> Cell. 184 (8), 1990-2019 (2021).</li>
<li>Rafii, S., Butler, J. M., Ding, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiocrine+functions+of+organ-specific+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Angiocrine functions of organ-specific endothelial cells.</a> Nature. 529 (7586), 316-325 (2016).</li>
<li>Lipskaia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+telomerase+in+p21-positive+cells+counteracts+capillaries+rarefaction+in+aging+mice+lung%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Induction of telomerase in p21-positive cells counteracts capillaries rarefaction in aging mice lung.</a> bioRxiv. , (2022).</li>
<li>Hoshino, M., Takahashi, M., Aoike, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+vascular+endothelial+growth+factor%2C+basic+fibroblast+growth+factor%2C+and+angiogenin+immunoreactivity+in+asthmatic+airways+and+its+relationship+to+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Allergy+Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of vascular endothelial growth factor, basic fibroblast growth factor, and angiogenin immunoreactivity in asthmatic airways and its relationship to angiogenesis.</a> J Allergy Clin Immunol. 107 (2), 295-301 (2001).</li>
<li>Ackermann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+vascular+endothelialitis%2C+thrombosis%2C+and+angiogenesis+in+covid-19%5BTitle%5D)+AND+%22New+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Pulmonary vascular endothelialitis, thrombosis, and angiogenesis in covid-19.</a> New Engl J Med. 383 (2), 120-128 (2020).</li>
<li>Wertheim, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolating+pulmonary+microvascular+endothelial+cells+ex+vivo%3A+Implications+for+pulmonary+arterial+hypertension%2C+and+a+caution+on+the+use+of+commercial+biomaterials%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolating pulmonary microvascular endothelial cells ex vivo: Implications for pulmonary arterial hypertension, and a caution on the use of commercial biomaterials.</a> PLoS One. 14 (2), e0211909(2019).</li>
<li>Thomas, S. M., Bednarek, J., Janssen, W. J., Hume, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Air-inflation+of+murine+lungs+with+vascular+perfusion-fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation.</a> J Vis Exp. (168), e62215(2021).</li>
<li>Ramasamy, S. K., Kusumbe, A. P., Adams, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+tissue+morphogenesis+by+endothelial+cell-derived+signals%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of tissue morphogenesis by endothelial cell-derived signals.</a> Trends Cell Biol. 25 (3), 148-157 (2015).</li>
<li>Amersfoort, J., Eelen, G., Carmeliet, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulation+by+endothelial+cells+-+partnering+up+with+the+immune+system%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunomodulation by endothelial cells - partnering up with the immune system.</a> Nat Rev Immunol. 22 (9), 576-588 (2022).</li>
<li>Niethamer, T. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+role+of+pulmonary+endothelial+cell+heterogeneity+in+the+response+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Defining the role of pulmonary endothelial cell heterogeneity in the response to acute lung injury.</a> eLife. 9, e53072(2020).</li>
<li>Corliss, B. A., Mathews, C., Doty, R., Rohde, G., Peirce, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+to+label%2C+image%2C+and+analyze+the+complex+structural+architectures+of+microvascular+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Methods to label, image, and analyze the complex structural architectures of microvascular networks.</a> Microcirculation. 26 (5), e12520(2019).</li>
<li>Phillips, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+evaluating+the+murine+pulmonary+vasculature+using+micro-computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">A method for evaluating the murine pulmonary vasculature using micro-computed tomography.</a> J Surg Res. 207, 115-122 (2017).</li>
<li>Chadwick, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vessel+network+extraction+and+analysis+of+mouse+pulmonary+vasculature+via+x-ray+micro-computed+tomographic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Comput+Biol%22%5BJournal%5D)">Vessel network extraction and analysis of mouse pulmonary vasculature via x-ray micro-computed tomographic imaging.</a> PLoS Comput Biol. 17 (4), e1008930(2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4% パラホルムアルデヒド</td><td>バイオシャープ</td><td>BL539A</td><td>組織固定剤</td></tr><tr><td>4',6-ジアミジノ-2-フェニルインド</td><td>ール MCE</td><td>HY-D0814</td><td>核染料</td></tr><tr><td>Alexa-647 フッ素結合イソレクチン B4</td><td>サーモ</td><td>I32450</td><td>結合マイクロ血管</td></tr><tr><td>抗蛍光錠剤シーラー</td><td>アブカム</td><td>AB104135</td><td>サンプル固定</td></tr><tr><td>抗原修復液</td><td>バイオシャープ</td><td>BL151A</td><td>抗原部位の修復</td></tr><tr><td>生検カセット</td><td>ActivFlo</td><td>39LC-500-1</td><td>組織サンプルの固定と位置決め</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン</td><td>Σ</td><td>B2064-50G</td><td>シーリングソリューション</td></tr><tr><td>コールドプレート</td><td>ライカ</td><td>HistoCore アルカディア H&nbsp;</td><td>サンプルの凍結</td></tr><tr><td>恒温電気乾燥オーブン</td><td>Taisite101-0AB</td><td>高温修理</td><td></td></tr><tr><td>使い捨てミクロトームブレード</td><td>ライカ</td><td>14035838383</td><td>切ってセクションを準備するための切</td></tr>片を埋め込む<tr><td>金型Shitai</td><td></td><td>26155166627</td><td>固定組織サンプル</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>ケロン</td><td>CAS64-17-5</td><td>組織脱水溶液</td></tr><tr><td>加熱パラフィン埋め込みステーション</td><td>ライカ</td><td>EG1150</td> パラフィン HistoCore ウォーターバス<td>への TSSUE サンプルの埋め込み</td></tr><tr><td></td><td>ライカ</td><td>HI1220</td><td>組織サンプルの平坦化と固定</td></tr><tr><td>ImageJ (フィジー)&nbsp;</td><td>NIH</td><td>1.54f</td><td>定量的ツール</td></tr><tr><td>免疫組織化学ペン</td><td>バイオシャープ</td><td>BC004</td><td>水遮断剤</td></tr><tr><td>医療鉗子</td><td>上海医療機器</td><td>N/A</td><td>組織サンプルの把持、操作、または移動</td></tr><tr><td>顕微鏡</td><td>ニコン</td><td>TS2</td><td>イメージングデバイス</td></tr><tr><td>封入剤</td><td>江源</td><td>無味</td><td>固定と保存ティッシュセクション</td></tr><tr><td>パラフィンワックス</td><td>SCHLEDEN</td><td>80200-0014</td><td>固定組織構造</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Beyotime</td><td>C0221A</td><td>洗浄バッファー</td></tr><tr><td>ペントバルビタールナトリウム</td><td>北京化学試薬会社</td><td>Q / H82-F158-2002</td><td>麻酔回転</td></tr><tr><td>式ミクロトーム</td><td>バイオベース</td><td>BK-2258</td>スライス<td></td></tr><tr><td>滅菌はさみの準備上海</td><td>医療機器</td><td>N/A</td><td>セグメンテーション 組織サンプル</td></tr><tr><td>外科用メス</td><td>上海 医療機器</td><td>N/A</td><td>切断 組織サンプル</td></tr><tr><td>Triton&nbsp;</td><td>Solarbio</td><td>T8200</td><td>透過化液</td></tr><tr><td>ウォッシュフリースライド</td><td>PLATINUM PRO</td><td>PRO-04</td> キシレン染色<td>用固定サンプル</td></tr><tr><td></td><td>SUM</td><td>XK13-011-00031</td><td>組織脱ワックス液</td></tr></tbody></table>

小葉全体のマウスにおける肺微小血管密度の定量化

Quantifying Pulmonary Microvascular Density in Mice Across Lobules

主気管支の病変と小さな気道枝の病変を区別するには、これら 2 種類の気道の病変の連続構造が観察されていることを確認することが重要です。これは、 図1で概説した切断および埋め込みの手順に従って実現できます。マウスには多数の肺葉があり、さまざまな方向に向けられ、メッシュ状の構造を持っているため、他の固形組織と比較して崩壊しやすくなっています。標的領域の病変を明確かつ直感的に観察するためには、切断前に組織サンプルを数時間固定することをお勧めします。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66681/66681fig01.jpg"> 図1:マウスの肺葉の代表的な写真は、合計5つの異なる葉を示しています。 左肺は1つの葉ですが、右肺には4つの葉があります(上から下へ:頭蓋...

The abnormal alternation of pulmonary angiogenesis is related to lung microvascular dysfunction and is deeply linked to vascular wall integrity, blood ...

quantifying-pulmonary-microvascular-density-in-mice-across-lobules

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

同時に右心機能、肺の炎症、免疫応答を調査するために具体的かつ迅速なプロトコルが学習ツールとして記述されています。ビデオおよび図は大型の研究に小さなために使用されるのに適応され組織されたチーム·アプローチでは、生理学や顕微解剖の手法について説明します。...

肺およびマウスにおける免疫組織サンプルの収穫との組み合わせで右室収縮期圧測定

内皮グリコカリックス/内皮表面層は、理想的には生体顕微鏡を用いて研究されています。生体顕微鏡検査は、肺などの臓器に移動技術的に困難である。私たちは、同時明視野と蛍光顕微鏡を自由に移動させる際に内皮表面層の厚さを推定するために使用することができる方法を示してい...

マウス肺内皮表面層の in vivo測定における

低酸素肺血管収縮(HPV)は、肺胞低酸素肺灌流で換気に一致する重要な生理学的現象である。HPVに寄与する主要な血管セグメントは、口腔内動脈である。ここでは、直径20~100μmのマウス肺血管のHPVの分析プロトコルについて説明します。...

マウス精密切り出肺スライスを用いた低酸素肺血管収縮のビデオモルフォメトリクス解析

孤立した血液灌流肺準備が肺表面上の微小血管ネットワークを可視化することが実現可能になります。ここでは、リアルタイムの蛍光画像を用いて単離された肺における単一微小血管の透過性を定量化するためのアプローチを記載する。...

単離された血液灌流ラットの肺の準備にシングル微小血管透過性を定量化する

私たちは、マウスの肺拡散能力を迅速かつ簡単に測定し、それが複数の一般的な肺の病状における表現型の変化に対して十分に敏感であることを示す手段を説明します。...

表現型マウス肺機能インビボ肺拡散能力を持つ

ここでは、マウスの肺圧-体積曲線を簡単かつ確実に測定するためのプロトコルを提示し、それが2つの一般的な肺の病状、肺線維症と肺気腫の表現型実質変化を検出するのに十分な感度を持つことを示しています。この指標は、病状の進行に伴う肺の構造変化を定量化する手段を提供します。...

マウス肺における圧力 - 容積曲線の測定

内臓の肺表面積（ISA）は、肺疾患および傷害誘発性肺胞再生における肺の形態学および生理学を評価するための決定的な基準である。ここでは、肺の肺切除術とプロテーゼ移植マウスモデルの両方でISAの測定バイアスを最小限に抑える標準化された方法について説明します。...

マウス肺切除術および義歯移植による内臓肺表面積の標準化法

マウスにおける実験剤の気管内(IT)投与は、しばしば遠位肺への非対称的な送達をもたらす。 本報告では、生きているマウスの各肺を非手術的にカニューレする直接気管支内(IB)アプローチについて述べた。...

マウス肺内の選択的剤沈着を改善するための直接気管支内投与

マウス肝臓における胆管密度を正確に定量するための、かなりシンプルで敏感な方法を提示する。この方法は、遺伝的および環境修飾子の効果と胆汁病のマウスモデルにおける潜在的な治療法の有効性の決定に役立ちます。...

マウス肝臓における胆管密度の決定

この技術の目的は、肺インフレおよび肺動脈を介した放射線不透明ポリマー系化合物の注入を介した早期出生後および成人マウスの肺動脈ネットワークのex...

マイクロCTイメージング用成人および早期産後マウス肺の血管鋳造

学ぶマウス肺微小血管密度の定量化法。イソレクチンB4染色とImageJ解析を用いて、小葉間の解剖学的差異と加齢による変化を評価する信頼性の高いプロトコルを紹介します。

小葉全体のマウスにおける肺微小血管密度の定量化

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