Name: 心血管バイオマーカー探索のための血漿由来細胞外小胞の単離、特性評価、およびプロテオミクス解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-31T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 30 s
Description: 学ぶ血漿由来細胞外小胞の単離とプロテオミクス解析による心血管バイオマーカー探索法。LC-MS/MSを用いたラベルフリー解析で、疾患診断と予後予測に有用な分子標的を同定します。

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<meta charset="utf8"></head><body>血漿細胞外小胞プロテオームを用いた心血管バイオマーカー研究

<ol><li>Thery, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+%28misev2018%29%3A+A+position+statement+of+the+international+society+for+extracellular+vesicles+and+update+of+the+misev2014+guidelines%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (misev2018): A position statement of the international society for extracellular vesicles and update of the misev2014 guidelines.</a> J Extracell Vesicles. 7 (1), 1535750(2018).</li>
<li>Kalluri, R., Lebleu, V. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology%2C+function%2C+and+biomedical+applications+of+exosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The biology, function, and biomedical applications of exosomes.</a> Science. 367, 6478(2020).</li>
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<li>Zara, M., Amadio, P., Campodonico, J., Sandrini, L., Barbieri, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomes+in+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Diagnostics+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Exosomes in cardiovascular diseases.</a> Diagnostics (Basel). 10 (11), 943(2020).</li>
<li>Ontoria-Oviedo, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+secreted+by+hypoxic+ac10+cardiomyocytes+modulate+fibroblast+cell+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles secreted by hypoxic ac10 cardiomyocytes modulate fibroblast cell motility.</a> Front Cardiovasc Med. 5, 152(2018).</li>
<li>Zara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+exosome+profile+in+st-elevation+myocardial+infarction+patients+with+and+without+out-of-hospital+cardiac+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Plasma exosome profile in st-elevation myocardial infarction patients with and without out-of-hospital cardiac arrest.</a> Int J Mol Sci. 22 (15), (2021).</li>
<li>Anselmo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+hypoxic+stress+mediates+functional+cardiac+extracellular+vesicle+release%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">Myocardial hypoxic stress mediates functional cardiac extracellular vesicle release.</a> Eur Heart J. 42 (28), 2780-2792 (2021).</li>
<li>Navickas, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identifying+circulating+microRNAs+as+biomarkers+of+cardiovascular+disease%3A+A+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Identifying circulating microRNAs as biomarkers of cardiovascular disease: A systematic review.</a> Cardiovasc Res. 111 (4), 322-337 (2016).</li>
<li>Creemers, E. E., Tijsen, A. J., Pinto, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs%3A+Novel+biomarkers+and+extracellular+communicators+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs: Novel biomarkers and extracellular communicators in cardiovascular disease.</a> Circ Res. 110 (3), 483-495 (2012).</li>
<li>Deddens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Circulating+microRNAs+as+novel+biomarkers+for+the+early+diagnosis+of+acute+coronary+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cardiovasc+Transl+Res%22%5BJournal%5D)">Circulating microRNAs as novel biomarkers for the early diagnosis of acute coronary syndrome.</a> J Cardiovasc Transl Res. 6 (6), 884-898 (2013).</li>
<li>Gidlof, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+profiling+of+extracellular+vesicles+reveals+additional+diagnostic+biomarkers+for+myocardial+infarction+compared+to+plasma+alone%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Proteomic profiling of extracellular vesicles reveals additional diagnostic biomarkers for myocardial infarction compared to plasma alone.</a> Sci Rep. 9 (1), 8991(2019).</li>
<li>Byrne, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ESC+guidelines+for+the+management+of+acute+coronary+syndromes%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J+Acute+Cardiovasc+Care%22%5BJournal%5D)">ESC guidelines for the management of acute coronary syndromes.</a> Eur Heart J Acute Cardiovasc Care. 10, (2023).</li>
<li>Garcia-Castrillo, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+for+blood+sampling+in+emergency+departments+from+the+European+Society+for+Emergency+Medicine+%28EUSEM%29%2C+European+Society+for+Emergency+Nursing+%28EUSEN%29%2C+and+European+Federation+of+Clinical+Chemistry+and+Laboratory+Medicine+%28EFLM%29+working+group+for+the+pre-analytical+phase%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Chem+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Recommendations for blood sampling in emergency departments from the European Society for Emergency Medicine (EUSEM), European Society for Emergency Nursing (EUSEN), and European Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (EFLM) working group for the pre-analytical phase.</a> Clin Chem Lab Med. 62 (8), 1538-1547 (2024).</li>
<li>Laemmli, U. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cleavage+of+structural+proteins+during+the+assembly+of+the+head+of+bacteriophage+T4%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4.</a> Nature. 227 (5259), 680-685 (1970).</li>
<li>Cox, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Andromeda%3A+A+peptide+search+engine+integrated+into+the+maxquant+environment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Andromeda: A peptide search engine integrated into the maxquant environment.</a> J Proteome Res. 10 (4), 1794-1805 (2011).</li>
<li>Cox, J., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maxquant+enables+high+peptide+identification+rates%2C+individualized+p.p.b.-range+mass+accuracies+and+proteome-wide+protein+quantification%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Maxquant enables high peptide identification rates, individualized p.p.b.-range mass accuracies and proteome-wide protein quantification.</a> Nat Biotechnol. 26 (12), 1367-1372 (2008).</li>
<li>Blein-Nicolas, M., Zivy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thousand+and+one+ways+to+quantify+and+compare+protein+abundances+in+label-free+bottom-up+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Thousand and one ways to quantify and compare protein abundances in label-free bottom-up proteomics.</a> Biochim Biophys Acta. 1864 (8), 883-895 (2016).</li>
<li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardization+of+pre-analytical+variables+in+plasma+microparticle+determination%3A+Results+of+the+international+society+on+thrombosis+and+haemostasis+SSC+collaborative+workshop%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Standardization of pre-analytical variables in plasma microparticle determination: Results of the international society on thrombosis and haemostasis SSC collaborative workshop.</a> J Thromb Haemost. 11 (6), 1190-1193 (2013).</li>
<li>Nieuwland, R., Siljander, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beginner%27s+guide+to+study+extracellular+vesicles+in+human+blood+plasma+and+serum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">A beginner's guide to study extracellular vesicles in human blood plasma and serum.</a> J Extracell Vesicles. 13 (1), e12400(2024).</li>
<li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+pre-analytical+parameters+on+the+measurement+of+circulating+microparticles%3A+Towards+standardization+of+protocol%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Impact of pre-analytical parameters on the measurement of circulating microparticles: Towards standardization of protocol.</a> J Thromb Haemost. 10 (3), 437-446 (2012).</li>
<li>Coumans, F. aW., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methodological+guidelines+to+study+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Methodological guidelines to study extracellular vesicles.</a> Circ Res. 120 (10), 1632-1648 (2017).</li>
<li>Clayton, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+towards+a+roadmap+for+collection%2C+handling+and+storage+of+blood+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Considerations towards a roadmap for collection, handling and storage of blood extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 8 (1), 1647027(2019).</li>
<li>Lucien, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Miblood-EV%3A+Minimal+information+to+enhance+the+quality+and+reproducibility+of+blood+extracellular+vesicle+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Miblood-EV: Minimal information to enhance the quality and reproducibility of blood extracellular vesicle research.</a> J Extracell Vesicles. 12 (12), e12385(2023).</li>
<li>Zhang, X., Takeuchi, T., Takeda, A., Mochizuki, H., Nagai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+serum+and+plasma+as+a+source+of+blood+extracellular+vesicles%3A+Increased+levels+of+platelet-derived+particles+in+serum+extracellular+vesicle+fractions+alter+content+profiles+from+plasma+extracellular+vesicle+fractions%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of serum and plasma as a source of blood extracellular vesicles: Increased levels of platelet-derived particles in serum extracellular vesicle fractions alter content profiles from plasma extracellular vesicle fractions.</a> PLoS One. 17 (6), e0270634(2022).</li>
<li>Gelibter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+storage+on+extracellular+vesicles%3A+A+systematic+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">The impact of storage on extracellular vesicles: A systematic study.</a> J Extracell Vesicles. 11 (2), e12162(2022).</li>
<li>Sluijter, J. P. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+in+diagnostics+and+therapy+of+the+ischaemic+heart%3A+Position+paper+from+the+working+group+on+cellular+biology+of+the+heart+of+the+European+Society+of+Cardiology%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles in diagnostics and therapy of the ischaemic heart: Position paper from the working group on cellular biology of the heart of the European Society of Cardiology.</a> Cardiovasc Res. 114 (1), 19-34 (2018).</li>
<li>Davidson, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+the+identification+and+characterization+of+extracellular+vesicles+in+cardiovascular+studies%3A+From+exosomes+to+microvesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">Methods for the identification and characterization of extracellular vesicles in cardiovascular studies: From exosomes to microvesicles.</a> Cardiovasc Res. 119 (1), 45-63 (2023).</li>
<li>Karimi, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+analysis+of+the+plasma+extracellular+vesicle+proteome+after+separation+from+lipoproteins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Detailed analysis of the plasma extracellular vesicle proteome after separation from lipoproteins.</a> Cell Mol Life Sci. 75 (15), 2873-2886 (2018).</li>
<li>Brennan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+methods+for+the+isolation+and+separation+of+extracellular+vesicles+from+protein+and+lipid+particles+in+human+serum%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A comparison of methods for the isolation and separation of extracellular vesicles from protein and lipid particles in human serum.</a> Sci Rep. 10 (1), 1039(2020).</li>
<li>Palviainen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+vesicles+from+human+plasma+and+serum+are+carriers+of+extravesicular+cargo-implications+for+biomarker+discovery%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Extracellular vesicles from human plasma and serum are carriers of extravesicular cargo-implications for biomarker discovery.</a> PLoS One. 15 (8), e0236439(2020).</li>
<li>Lotvall, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+experimental+requirements+for+definition+of+extracellular+vesicles+and+their+functions%3A+A+position+statement+from+the+international+society+for+extracellular+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22J+Extracell+Vesicles%22%5BJournal%5D)">Minimal experimental requirements for definition of extracellular vesicles and their functions: A position statement from the international society for extracellular vesicles.</a> J Extracell Vesicles. 3, 26913(2014).</li>
<li>Gemoll, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+profiling+of+serum+extracellular+vesicles+reveals+qualitative+and+quantitative+differences+after+differential+ultracentrifugation+and+ExoQuick+TM+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Protein profiling of serum extracellular vesicles reveals qualitative and quantitative differences after differential ultracentrifugation and ExoQuick TM isolation.</a> J Clin Med. 9 (5), 1429(2020).</li>
<li>Kreimer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass-spectrometry-based+molecular+characterization+of+extracellular+vesicles%3A+Lipidomics+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">Mass-spectrometry-based molecular characterization of extracellular vesicles: Lipidomics and proteomics.</a> J Proteome Res. 14 (6), 2367-2384 (2015).</li>
<li>Shevchenko, A., Tomas, H., Havlis, J., Olsen, J. V., Mann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In-gel+digestion+for+mass+spectrometric+characterization+of+proteins+and+proteomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">In-gel digestion for mass spectrometric characterization of proteins and proteomes.</a> Nat Protoc. 1 (6), 2856-2860 (2006).</li>
<li>Bateman, N. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maximizing+peptide+identification+events+in+proteomic+workflows+using+data-dependent+acquisition+%28dda%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Maximizing peptide identification events in proteomic workflows using data-dependent acquisition (dda).</a> Mol Cell Proteomics. 13 (1), 329-338 (2014).</li>
<li>Pino, L. K., Just, S. C., Maccoss, M. J., Searle, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquiring+and+analyzing+data+independent+acquisition+proteomics+experiments+without+spectrum+libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Acquiring and analyzing data independent acquisition proteomics experiments without spectrum libraries.</a> Mol Cell Proteomics. 19 (7), 1088-1103 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4x Laemmli サンプルバフファー</td><td>Bio-rad</td><td>1610747</td><td></td></tr><tr><td>10x RIPA-Buffer</td><td></td><td>Abcam ab156034</td><td></td></tr><tr><td>26.3 mL ポリカーボネートボトル キャップアセンブリ付き 超遠心分離用</td><td>ベックマン・コールター</td><td>355654</td><td></td></tr><tr><td>5810R 卓上遠心分離機</td><td>エッペンドルフ</td><td>5811000015</td><td></td></tr><tr><td>アセトニトリル (ACN)</td><td>Biosolve</td><td>0001204101BS</td><td></td></tr><tr><td>ジチオスレイトール (DTT)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>43816-10ML</td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>ギ酸 99% ULC/MS 100</td><td>Biosolve</td><td>0006914143BS</td><td></td></tr><tr><td>Histopaque - 1077</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10771</td><td></td></tr><tr><td>ヨードアセトアミド (IAA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6125-5G</td><td></td></tr><tr><td>質量分析計 Orbitrap Q Exactive HF</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>MOPS SDS ランニングバッファー</td><td>Thermo Fisher</td><td>B0001</td><td></td></tr><tr><td>NanoSight NS300</td><td>Malvern Panalytical&nbsp;</td><td>NS300</td><td></td></tr><tr><td>Nanosight NTA 3.2ソフトウェア</td><td>Malvern Panalytical&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&nbsp;bis 12&nbsp;%, Bis-Tris protein gels</td><td>Invitrogen</td><td>NP0323</td><td></td></tr><tr><td>Optima XPN-80 床置き型超遠心分離機</td><td>Beckman Coulter</td><td>521-4180</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Plus Prestained Protein Ladder</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>26619</td><td></td></tr><tr><td>Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X)</td><td>Cell Signaling Technology</td><td>5872S</td><td></td></tr><tr><td>Protein marker</td><td>サーモフィッシャー</td><td>26616</td><td></td></tr><tr><td>Proteome Discoverer 2.5</td><td>サーモフィッシャーQ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Exactive Plus ハイブリッド四重極-Orbitrap 質量分析計</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>IQLAAEGAAPFALGMBDK</td><td></td></tr><tr><td>クイックステイン クーマッシー</td><td>セルバ</td><td>35081.01</td><td></td></tr><tr><td>ReproSil-Pur 120 C18-AQ, 1.9 & マイクロ;m 1 g</td><td>Dr. Maisch</td><td>r119.aq.0001</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE 市販ゲル</td><td>サーモフィッシャー</td><td>NW00100BOX</td><td></td></tr><tr><td>S-モノベット&nbsp;Citrat 9NC 0.106 mol/l 3,2%</td><td>Sarstedt</td><td>02.1067.001</td><td></td></tr><tr><td>Speed vac concentrator</td><td>Savant</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Swiss-Prot (Uniprot) Homo sapiens (UP000005640, June 2020) タンパク質データベース</td><td>UniProt</td><td>https://www.uniprot.org/proteomes/UP000005640</td><td></td></tr><tr><td>重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液 (TEAB)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T7408</td><td></td></tr><tr><td>トリフルオロ酢酸 (TFA)HPLC用 >99%、100 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>302031-100ML</td><td></td></tr><tr><td>トリプシン MSグレード</td><td>サーモフィッシャー</td><td>90058</td><td></td></tr><tr><td>タイプ 50.2 Ti 固定角ローター</td><td>ベックマン・コールター</td><td>337901</td><td></td></tr><tr><td>UHPLC Dionex Ultimate 3000</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>ULTIM3000RSLCNANO</td><td></td></tr><tr><td>ウォーター</td><td>バイオソルブ</td><td>0023214102BS</td><td></td></tr></tbody></table>

心血管バイオマーカー探索のための血漿由来細胞外小胞の単離、特性評価、およびプロテオミクス解析

Isolation, Characterization, and Proteomic Analysis of Plasma-Derived Extracellular Vesicles for Cardiovascular Biomarker Discovery

EVは、確立された鑑別超遠心分離プロトコルを使用して、明白な心血管疾患のない患者の血漿サンプル(n = 3)および非ST上昇型心筋梗塞(NSTEMI;n = 2)の患者から単離されました。血漿EVの適切な分離は、同じ患者のEV枯渇血漿と比較して、EV分離株中のEVが豊富なタンパク質TSG-101、アネキシン5(Anx5)、およびCD9の免疫ブロッティングによって確認されました(図1A)。ネガティブコントロールとして機能するトランスフェリンは、EV枯渇血清サンプルで検出されましたが、EV分離株では検出されず、コンパートメントの適切な分離が確認されました。分離された血漿サンプル中の一般的な血小板マーカーであるインテグリンβ3とリポタンパク質汚染のマーカーであるアポリポタンパク質A1(ApoA1)のイムノブロッティングでは、血液処理後に有意な汚染は示されませんでした(補足図1)。
ナノ粒子追跡分析を使用して、EVを同定し、ブラウン運動に基づいて視覚化しました(<strong class="xfi...

Extracellular vesicles (EV) are cell-derived, lipid bilayer-enclosed, non-replicable nanoparticles. EV currently gain attention in cardiovascular research ...

isolation-characterization-proteomic-analysis-plasma-derived

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医学

血液中に存在する細胞外小胞は、さまざまな疾患の新規バイオマーカーとして提案されています。ここでは、末梢血サンプルから大きな原形質膜由来の微小胞を単離し、その後の従来のフローサイトメトリーとウェスタンブロッティングによる分析のためのプロトコルを紹介します。...

末梢血からの微小胞の単離とキャラクタリゼーション

ここでは、プラズマと非 exosomal 血蛋白質の減らされた共同浄化と血清の両方からエクソソームを浄化するためのプロトコルを提案する.最適化されたプロトコルには、限外ろ過には、プロテアーゼ処理,...

エクソソームおよび人間の血液からの分離を最適化するためにタンパク質の消化が、限外濾過、サイズ排除クロマトグラフィー

プロトコルでは、小さな細胞小胞 (EV) の表面の抗原を検出する細胞培養上清を使用のために設計された再現可能な方法について説明します。それは、CD63 と CD81 CD9、表面抗原を認識する抗体が結合したビーズを用いた特定の EV...

フローサイトメトリー法による細胞小胞細胞調節されたメディアからの解析します。

本報告書は、ミクログリアまたは血液マクロファージからの細胞外小胞(EV)単離に関する時系列的要件を強調している。ミクログリア由来EVは神経突起の伸長因子として評価され、血液マクロファージ由来EVはインビトロアッセイにおけるC6グリオーマ細胞浸潤の制御で研究された。目標は、これらのEV機能を特定の微小環境における免疫メディエーターとして理解することです。...

細胞外小胞由来免疫細胞由来の特徴と細胞環境への機能的影響の研究

本プロトコルは、末梢血および固体組織から細胞外小胞を抽出し、その後表面抗原およびタンパク質カーゴのプロファイリングを行う方法を記載している。...

血漿および固体組織からのトレーサブルおよび機能化された細胞外小胞の単離と分析

最新世代のEV特性評価ツールは、複数のパラメータにわたる単一のEV解析を同時に行うことができます。ナノフローサイトメトリーは、標識なしで45...

ナノフローサイトメトリーによる単一細胞外小胞膜貫通タンパク質の特性評価

本プロトコルは、機能化された磁気ビーズを利用して尿中細胞外小胞を効率的に隔離するための詳細な説明を提供します。さらに、ウェスタンブロッティング、プロテオミクス、リン酸化プロテオミクスなどのその後の分析も網羅しています。...

プロテオミクスおよびリン酸化プロテオミクス解析のための生体液からの細胞外小胞の化学的親和性に基づく単離(英語)

ポリカーボネート超遠心チューブを洗浄および再利用して、プロテオミクス実験に適した細胞外小胞分離を行うための詳細なプロトコルが提供されています。...

細胞外小胞のプロテオミクス分析におけるポリカーボネート超遠心チューブの再利用

ここでは、ヒト被験者の涙や唾液などの生体液から採取された細胞外小胞(EV)の特性評価法を示します。この方法で使用されるスキャナーは、サンプルの1μLからEVの表現型、サイズ、および総粒子数を検出することができます。...

体液からの細胞外小胞の特性評価

このビデオでは、死後の目には人間の硝子体の様々な半透明の構造を差別化し、解剖のための効果的なテクニックを示しています。...

プロテオーム解析のための人間の硝子体の要素の解剖

学ぶ血漿由来細胞外小胞の単離とプロテオミクス解析による心血管バイオマーカー探索法。LC-MS/MSを用いたラベルフリー解析で、疾患診断と予後予測に有用な分子標的を同定します。

心血管バイオマーカー探索のための血漿由来細胞外小胞の単離、特性評価、およびプロテオミクス解析

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