Name: HeLa細胞を用いた抗MDA5自己抗体の検出と光学顕微鏡による免疫細胞化学 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: 学ぶ免疫細胞化学法による抗MDA5自己抗体の検出とHeLa細胞を用いた蛍光顕微鏡観察の手法。皮膚筋炎関連の間質性肺疾患の診断精度向上に貢献する実験技術を習得できます。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+managing+anti-MDA5+dermatomyositis%2C+including+potential+COVID-19+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry.</a> Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).</li>
<li>Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+and+juvenile+dermatomyositis%3A+are+the+distinct+clinical+features+explained+by+our+current+understanding+of+serological+subgroups+and+pathogenic+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms.</a> Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).</li>
<li>Fujisawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+myositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Management of myositis-associated interstitial lung disease.</a> Medicina. 57 (4), 347(2021).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+initiation+of+plasma+exchange+therapy+for+a+patient+with+anti-MDA5+autoantibody-positive+dermatomyositis+developing+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Rheumatol+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease.</a> Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).</li>
<li>Go, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+benefit+associated+with+early+cyclosporine+treatment+for+dermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).</li>
<li>Tsuji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+study+of+the+efficacy+and+safety+of+combined+immunosuppressive+therapy+with+high-dose+glucocorticoid%2C+tacrolimus%2C+and+cyclophosphamide+in+interstitial+lung+diseases+accompanied+by+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5-positive+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).</li>
<li>Hozumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+myositis-specific+autoantibodies+in+polymyositis%2Fdermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Respir Med. 122, 1-8 (2016).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Koga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnostic+utility+of+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5+antibody+testing+for+predicting+the+prognosis+of+Japanese+patients+with+DM%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM.</a> Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).</li>
<li>Fuzzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-MDA5+dermatomyositis%3A+an+update+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside.</a> Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reliability+of+immunoassays+to+detect+autoantibodies+in+patients+with+myositis+is+dependent+on+autoantibody+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity.</a> Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).</li>
<li>Chen, Y. L., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).</li>
<li>Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+performance+of+an+indirect+immunofluorescence+assay+for+the+detection+of+anti-MDA5+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies.</a> Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24ウェルプレート(1.9 cm&sup2;/well)</td><td>コーニング</td><td>354541</td><td></td></tr><tr><td>抗生物質-抗菌薬</td><td>ギブコ</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>ビーカー</td><td>パイレックス</td><td>1000-600</td><td></td></tr><tr><td>円錐形チューブ(15 mL)</td><td>コーニング</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>円錐形チューブ(50 mL)</td><td>コーニング</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>脱イオン蒸留水</td><td></td><td></td><td>当社の脱イオン蒸留水は、Milli-Qシステム(第1列:Quantum TEX、SN:F4EB53476;第2列:プレパック、SN:F1CB11442)</td></tr><tr><td>胎児用牛血清の特徴付け</td><td>シチバ</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>目盛りシリンダー(50 mL)</td><td>VITLAB</td><td>64804</td><td></td></tr><tr><td>ヘマトキシリン・ギルII</td><td>ライカ</td><td>3801522</td><td></td></tr><tr><td>ハイクロン・ダルベッコ高グルコースの改良イーグルミディアム</td><td>シチバ</td><td>SH30243.02</td><td></td></tr><tr><td>リポフェクタミン2000型トランスフェクション試薬</td><td>インビトロジェン</td><td>11668019</td><td>トランスフェクション試薬</td></tr><tr><td>MDA-5(D74E4)ウサギmAb</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>5321</td><td></td></tr><tr><td>マイクロ遠心分離機チューブ(1.5 mLエッペンドルフチューブ)</td><td>アクシジェン</td><td>142503</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I 還元血清培地</td><td>ギブコ</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>オービタルシェーカー(オプション)</td><td>ファーステック</td><td>S300R</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td></td><td>1倍PBSで4%</td></tr><tr><td>PBS</td><td>プロテック</td><td>ME222605</td><td></td></tr><tr><td>pENTER-MDA5</td><td>ヴィジーン・バイオサイエンス社</td><td>CH863586</td><td></td></tr><tr><td>ペルオキシダーゼ アフィニピュア ヤギ抗ヒト IgG(H+L)</td><td>ジャクソン免疫研究</td><td>109-035-003</td><td></td></tr><tr><td>ピペットコントローラー</td><td>サーモ・サイエンティフィック</td><td>130165</td><td></td></tr><tr><td>ピペッテス&nbsp;</td><td>ギルソン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ピペットおよびピペットチップ(10 & micro;L)</td><td>QSP</td><td>104-Q</td><td></td></tr><tr><td>ピペットおよびピペットチップ(200 & micro;L)</td><td>QSP</td><td>T090-Q</td><td></td></tr><tr><td>ピペットおよびピペットチップ(1000 & micro;L)</td><td>QSP</td><td>111-Q</td><td></td></tr><tr><td>血清学的ピペット(5 mL)</td><td>SPL</td><td>91005</td><td></td></tr><tr><td>血清学的ピペット(10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>血清学的ピペット(25 mL)</td><td>SPL</td><td>91025</td><td></td></tr><tr><td>SignalStainのDAB基板キット</td><td>細胞シグナル伝達</td><td>8059</td><td>PBSでの0.3%</td></tr></tbody></table>

hela細胞を用いた抗mda5自己抗体の検出と光学顕微鏡による免疫細胞化学

Detection of Anti-MDA5 Autoantibodies Using HeLa Cells and Immunocytochemistry with Light Microscopy

検査を実施する職員は、評価プロセスにおける潜在的なバイアスを最小限に抑えるために、サンプルを採取した特定の患者を含むサンプルの身元を知らされませんでした。ただし、健康な対照サンプルは盲検化を受けませんでしたが、一貫して明確で明白な結果が得られました。
図1A は、pENTER-MDA5コンストラクトをトランスフェクトしたHeLa細胞におけるMDA5の発現の成功を示しています。トランスフェクション効率を検証するために、市販の抗MDA5抗体を使用してICCを実施しました。トランスフェクトされた細胞の約50%で強い褐色の細胞質染色が観察され、MDA5タンパク質の発現が強固であることが示されました。対照的に、同一条件下で処理された非トランスフェクト細胞は細胞質染色を示さず、抗体の特異性と内因性MDA5発現の欠如が確認されました。
<p class="jove_content" fo:keep-...

HeLa細胞を用いた抗MDA5自己抗体の検出と光学顕微鏡による免疫細胞化学

Anti-MDA5 autoantibodies are critical biomarkers for dermatomyositis (DM), amyopathic dermatomyositis (CADM), and polymyositis (PM), particularly in ...

detection-anti-mda5-autoantibodies-using-hela-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

近年、生細胞ベースのアッセイは、表面とコンフォメーション抗原に対する抗体を検出するために首尾よく使用されている。ここでは、患者の大規模コホートの分析を可能にするフローサイトメトリーのハイスループット流を用いた方法を記載している。新規な抗体の検出は、免疫媒介性障害の診断および治療を改善する。...

ハイスループットフローサイトメトリー細胞ベースのアッセイN-メチル-D-アスパラギン酸受容体またはヒト血清中のドーパ​​ミン-2受容体に対する抗体を検出する

ここでは、赤血球に対する抗体により誘導される補体活性化を測定するための2つのアッセイを記載する。現在のアッセイ以上の主要な利点は、それらの定量的かつ簡単に解釈する性質である。...

赤血球上の抗体誘導性補体活性化の定量的検出のための方法

主要組織適合性複合体クラスII dextramersとの直接染色により脳及び心臓における自己反応性CD4 T細胞を検出するためのプロトコルは、このレポートに記載されている。総合的な分析のために、 その場での抗原特異的CD4 + T細胞の頻度を列挙するための信頼できる方法も考案されている。...

主要組織適合遺伝子複合体クラスII Dextramersを用いて脳および心臓において自己反応性CD4 T細胞のその場検出に

抗体の中和を評価し、効果的なワクチン免疫原の設計を導くためには、ウイルス表面抗原のコンフォメーションを理解する必要があります。ここでは、トランスフェクションされた細胞の表面に発現する三量体HIV-1...

細胞ベースのELISAアッセイを使用して、HIV-1エンベロープ糖タンパク質三量体の構造評価

無傷のクラスI HLA /ペプチド複合体は、潜在的な関連癌バイオマーカーを表す、癌細胞により流されている。ラベルフリー検出技術を利用し、T細胞受容体はモノクローナル抗体を模倣し、小屋MIF / HLA-A * 02の検出：MDA-MB-231細胞の上清中の01複合体、ヒト血清にスパイクし、そして患者の血漿をの開発を可能にする、実証されている小説癌診断プラットフォーム。...

ラベルフリーバイオセンサー技術を活用乳癌におけるヒト白血球抗原バイオマーカーの検出

ここでは、ヒトとマウスの血清IgGとIgMの自己抗体を同時に検出するために使用できるカスタマイズ可能な抗原マイクロアレイを生成する方法について説明します。これらのアレイにより、目的の抗原やエピトープに対する抗体をハイスループットかつ定量的に検出することができます。...

IgGおよびIgM自己抗体の同時検出のための二色抗原マイクロアレイの生成

我々 は異所萌出へ自己免疫性脳炎が疑われる患者の血中 NMDA 受容体に対する自己抗体を検出する抗原としてヒト胚性細胞 (HEK293) で緑色蛍光タンパク質が付いた NMDA 受容体の NR1...

血の N-メチル-D-アスパラギン酸 (NMDA) 受容体に対する自己抗体を検出する単純な細胞ベースの蛍光抗体法

DFS70 抗体は、従来 HEp 2 基板を使用して、正確な解釈を挑戦的な共通の抗核抗体の病気に関連するパターンを模倣します。プロトコルでは、スクリーニングと抗と混合 ANA 陽性で高信頼の DFS70 パターンを区別するアナに従来 HEp 2 に新規設計された HEp 2...

抗と新規 HEp 2 エリート/DFS70 ノックアウト基板アナ選考において混合 DFS70 パターンの同時の区別

BALB/cマウスにおけるin vivo免疫型翻訳型肝炎モデルについて、本疾患に見られる性差を含む薬剤性自己免疫性肝炎の病態解明に利用することができる。このモデルが、in vivoおよびin...

BALB/cマウスにおける薬物誘発性自己免疫性肝炎の誘導による発症機序の研究

この記事では、アルカリホスファターゼ結合ScFv D11抗体を使用した免疫蛍光法による組織内のイソレブグランジンの測定のための詳細な方法論を提供します。マウスとヒトの両方の高血圧モデルは、組織サンプル中のイソレブグランジン測定に関連する段階的な手順と基本原理を説明するために使用されます。...

D11 scFv-アルカリホスファターゼ融合タンパク質と免疫蛍光を用いた組織中のイソレブグランジンの直接検出(英語)

マイコプラズマ・ニューモニエ感染症では、血清学的検査は良好な結果を生み出すことができますが、免疫学的交差反応のために特異性は低くなります。この論文に記載されている社内抗原捕捉ELISAは、高い種特異性を保証し、肺炎球菌の正確な診断のための信頼できるスクリーニング検査であることが示されています。...

マイコプラズマ・ニューモニエの特異的検出のための抗原捕捉酵素結合免疫吸着アッセイ(英語)

学ぶ免疫細胞化学法による抗MDA5自己抗体の検出とHeLa細胞を用いた蛍光顕微鏡観察の手法。皮膚筋炎関連の間質性肺疾患の診断精度向上に貢献する実験技術を習得できます。

HeLa細胞を用いた抗MDA5自己抗体の検出と光学顕微鏡による免疫細胞化学

さらに動画を探す