Name: ゼブラフィッシュの低発現タンパク質を可視化するための蛍光標識 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-01-24T14:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: 学ぶゼブラフィッシュの低発現タンパク質を蛍光タグで可視化する手法。Danio rerioを用いてタンパク質局在を観察し、ドナー構築を効率化する。このプロトコルは神経科学・バイオテクノロジー研究に有用です。

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<meta charset="utf8"></head><body>CRISPR/Cas9ノックインを用いたゼブラフィッシュ幼生の蛍光タンパク質標識

<ol><li>Brittijn, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+development+and+regeneration%3A+new+tools+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Zebrafish development and regeneration: new tools for biomedical research.</a> Int J Dev Biol. 53 (5-6), 835-850 (2009).</li>
<li>Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+zebrafish+as+a+model+for+complex+tissue+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Genet%22%5BJournal%5D)">The zebrafish as a model for complex tissue regeneration.</a> Trends Genet. 29 (11), 611-620 (2013).</li>
<li>Haraoka, Y., Miyake, M., Ishitani, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+imaging+reveals+hidden+oncogenic-normal+cell+communication+during+primary+tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Struct+Funct%22%5BJournal%5D)">Zebrafish imaging reveals hidden oncogenic-normal cell communication during primary tumorigenesis.</a> Cell Struct Funct. 48 (1), 113-121 (2023).</li>
<li>Gomes, M. C., Mostowy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+modeling+human+infection+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The case for modeling human infection in zebrafish.</a> Trends Microbiol. 28 (1), 10-18 (2020).</li>
<li>Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+zebrafish+to+understand+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">The use of zebrafish to understand immunity.</a> Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).</li>
<li>Karlsson, J., von Hofsten, J., Olsson, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generating+transparent+zebrafish%3A+a+refined+method+to+improve+detection+of+gene+expression+during+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Mar+Biotechnol+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">Generating transparent zebrafish: a refined method to improve detection of gene expression during embryonic development.</a> Mar Biotechnol (NY). 3 (6), 522-527 (2001).</li>
<li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2 (2), 183-189 (2008).</li>
<li>Antinucci, P., Hindges, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+crystal-clear+zebrafish+for+in+vivo+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A crystal-clear zebrafish for in vivo imaging.</a> Sci Rep. 6, 29490(2016).</li>
<li>He, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+ligase+3-dependent+microhomology-mediated+end+joining+repair+of+DNA+double-strand+breaks+in+zebrafish+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Mutat+Res%22%5BJournal%5D)">Efficient ligase 3-dependent microhomology-mediated end joining repair of DNA double-strand breaks in zebrafish embryos.</a> Mutat Res. 780, 86-96 (2015).</li>
<li>Hisano, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+in-frame+integration+of+exogenous+DNA+mediated+by+CRISPR%2FCas9+system+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Precise in-frame integration of exogenous DNA mediated by CRISPR/Cas9 system in zebrafish.</a> Sci Rep. 5, 8841(2015).</li>
<li>Luo, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR%2FCas9-based+genome+engineering+of+zebrafish+using+a+seamless+integration+strategy%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">CRISPR/Cas9-based genome engineering of zebrafish using a seamless integration strategy.</a> FASEB J. 32 (9), 5132-5142 (2018).</li>
<li>Wierson, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+targeted+integration+directed+by+short+homology+in+zebrafish+and+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">Efficient targeted integration directed by short homology in zebrafish and mammalian cells.</a> Elife. 9, e53968(2020).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+tagging+strategies+for+illuminating+expression+profiles+of+genes+with+different+abundance+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">Optimal tagging strategies for illuminating expression profiles of genes with different abundance in zebrafish.</a> Commun Biol. 6 (1), 1300(2023).</li>
<li>Li, C., Evans, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ligation+independent+cloning+irrespective+of+restriction+site+compatibility%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Ligation independent cloning irrespective of restriction site compatibility.</a> Nucleic Acids Res. 25 (20), 4165-4166 (1997).</li>
<li>Yu, C., Zhang, Y., Yao, S., Wei, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PCR+based+protocol+for+detecting+indel+mutations+induced+by+TALENs+and+CRISPR%2FCas9+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A PCR based protocol for detecting indel mutations induced by TALENs and CRISPR/Cas9 in zebrafish.</a> PLoS One. 9 (6), e98282(2014).</li>
<li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin+39.9+protein+is+necessary+for+coordinated+activation+of+slow-twitch+muscle+and+normal+behavior+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Connexin 39.9 protein is necessary for coordinated activation of slow-twitch muscle and normal behavior in zebrafish.</a> J Biol Chem. 287 (2), 1080-1089 (2012).</li>
<li>Cason, N., White, T. W., Cheng, S., Goodenough, D. A., Valdimarsson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+cloning%2C+expression+analysis%2C+and+functional+characterization+of+connexin44.1%3A+a+zebrafish+lens+gap+junction+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Molecular cloning, expression analysis, and functional characterization of connexin44.1: a zebrafish lens gap junction protein.</a> Dev Dyn. 221 (2), 238-247 (2001).</li>
<li>Urushibata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+developmental+speed+in+zebrafish+embryos+using+different+incubation+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Control of developmental speed in zebrafish embryos using different incubation temperatures.</a> Zebrafish. 18 (5), 316-325 (2021).</li>
<li>Yu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cyclic+digestion+and+ligation-mediated+PCR+used+for+flanking+sequence+walking%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Cyclic digestion and ligation-mediated PCR used for flanking sequence walking.</a> Sci Rep. 10 (1), 3434(2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>1000 &マイクロ;L&nbsp;ヒント</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>すべての操作に対応</td></tr><tr><td>1.5 mLチューブ</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>さまざまな溶液の保存および遠心分離用</td></tr><tr><td>1.5 mLチューブ(RNaseフリー)</td> <td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>RNaseフリー溶液の保管および遠心分離用</td></tr><tr><td>10 & micro;Lのヒント</td><td>任意のブランド</td>N <td>/ A</td><td>すべての操作10</td></tr><tr><td>&micro;Lのヒント(RNaseフリー)</td><td>任意のブランド</td><td>N /</td><td>ARNaseフリーの操作</td></tr><tr><td>1000&micro;L&nbsp;ヒント(RNaseフリー)</td><td>任意のブランド</td><td>N /</td><td>ARNaseフリーの操作用</td></tr><tr><td>1-フェニル2-チオ尿素(PTU)</td><td>シグマ</td><td>P7629</td>メラ<td>ニン生成を阻害し、幼虫を透明に保つために</td></tr><tr><td>200&マイクロ;Lのヒント</td>任意の<td>ブランド</td>N <td>/ A</td><td>すべての操作</td></tr><tr><td>200&micro;Lチップ(RNaseフリー)</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>RNaseフリーの操作用</td></tr><tr><td>2x Taq Plus Master Mix II (Dye Plus)</td><td>Vazyme</td><td>P213-03</td><td>PCR sgRNA効率試験用</td></tr><tr><td>35mmディッシュ</td><td>コーニング</td><td>430165</td><td></td></tr><tr><td>6ウェルプレート</td><td></td>のイメージング用 <td>N/A</td><td>ゼブラフィッシュの個別飼育および一時飼育用</td></tr><tr><td>Acc65I</td><td>NEB</td><td>R0599S</td><td>酵素消化</td></tr><tr><td>酢酸</td><td>シグマ695092</td><td></td><td>TAEバッファー調製用</td></tr><tr><td>寒天</td><td>Biofroxx</td><td>8211GR500</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>アンピシリン、ナトリウム塩</td><td>サンゴン</td><td>A610028</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma</td><td>C5080</td><td>胚緩衝液調製用</td></tr><tr><td>キャピラリーチューブ</td><td>ハーバード装置</td><td>30-0016</td><td>注射用針の生成用</td></tr><tr><td>毛細管</td><td>任意のブランド</td><td>ID(内径) = 0.1 mm</td><td>1-nLの液滴を定量化するため</td></tr><tr><td>CRISPRscan</td><td>CRISPRscan</td><td>&nbsp;http://www.crisprscan.org/</td> <td>sgRNA設計</td></tr><tr><td>用DH5&alpha;</td><td>TIANGEN</td><td>CB101</td><td>形質転換用</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E6758</td><td>溶解バッファーおよび TAE バッファー調製用</td></tr><tr><td>Ensembl</td><td>Ensembl</td><td>&nbsp;https://asia.ensembl.org/Danio_rerio/Info/Index</td><td>遺伝子情報を探すには</td></tr><tr><td>エタノール</td><td>HUSHI</td><td>64-17-5</td><td>DNA精製・抽出用</td></tr><tr><td>エキソヌクレアーゼIII</td><td>タカラ</td><td>2170A</td><td>LIC</td></tr><tr><td>ガス式マイクロインジェクター</td><td>ワーナー・インスツルメンツ</td><td>PLI-100A</td><td>マイクロインジェクション用</td></tr><tr><td>ゲル電気泳動装置</td><td>WIX</td><td>WIX-EP3000</td><td>ゲル用電気泳動</td></tr><tr><td>グローブ</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>すべての操作に対応</td></tr><tr><td>グルコース</td><td>sgdbio</td><td>10010518</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>サンゴン</td><td>A501745</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>gRNA-pMD19-T</td><td>中国ゼブラフィッシュリソースセンター(CZRC)</td><td>CZP3</td><td>sgRNAプラスミド含有 sgRNA足場</td></tr><tr><td>KCl</td><td>シグマ</td><td>P5405</td><td>胚用緩衝液</td></tr><tr><td>塩化リチウム沈殿液</td><td>サーモフィッシャー</td><td>AM9480</td><td>sgRNAの沈殿、RNaseフリー</td></tr><tr><td>低融点アガロース</td><td>サンゴン</td><td>A600015</td><td>4%アガロースゲルの調製用</td></tr><tr><td>硫酸マグネシウム</td><td>sgdbio</td><td>20025118</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>メタルバス</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>恒温インキュベーション用</td></tr><tr><td>メチレンブルー</td><td>シグマ</td><td>M9140</td><td>胚緩衝液調製用</td></tr><tr><td>マイクロインクションモールド</td><td>自家製</td><td>N/A</td><td>マイクロインジェクション中に胚を保持する溝を生成するため</td></tr><tr><td>マイクロローダー、フェムトチップやその他のガラスマイクロキャピラリーを充填するためのチップ、滅菌、0.5 &ndash; 20 & マイクロ;L、100mm、ライトグレー、192個(2ラック&回:96個入り)</td><td>エッペンドルフ</td><td>5242956003</td><td>マイクロインジェクション溶液を注射針にロードするには、RNaseフリー</td></tr><tr><td>のマイクロピペットプーラー</td><td>Sutter Instrument</td><td>P-97</td><td>注射用針を生成するため</td></tr><tr><td>マイクロピペット</td><td>エッペンドルフ</td><td>N/A</td><td>すべての操作に対応できる</td></tr><tr><td>マイクロ波</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>インジェクションプレートとアガロースゲルの鋳造用</td></tr><tr><td>MinElute PCR精製キット (50)</td><td>QIAGEN</td><td>28004</td><td>PCR産物および消化産物を精製するために、RNase-free</td></tr><tr><td>mMESSAGE mMACHINE T3 Transcription Kit</td><td>Invitrogen</td><td>AM1348</td><td>Cas9 mRNAのIn-vitro転写、RNaseフリー</td></tr><tr><td>N2</td><td>Any brand</td><td>N/A</td><td>マイクロインジェクション用</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S5886</td><td>胚緩衝液および溶解緩衝液調製用</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S5761</td><td>胚緩衝液調製用</td></tr><tr><td>NaOH</td><td>サンゴン</td><td>A100173</td><td>TAE緩衝液調製用</td></tr><tr><td>ヌクレアーゼフリー水</td><td>サーモフィッシャー</td><td>R0581</td><td>RNA関連操作、RNase</td></tr><tr><td>フリーPciI</td><td>NEB</td><td>R0655S</td><td>酵素消化</td></tr><tr><td>PCR装置</td>用 <td>銘柄不問</td><td>N/A</td><td>PCR増幅</td></tr><tr><td>PCRストリップチューブ</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>PCR</td></tr><tr><td>用 PCRチューブ</td><td>FEITONGKANG</td><td>blp-200</td><td>PCR</td></tr><tr><td>シャーレ</td>用 <td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>ゼブラフィッシュの幼生などの飼育に。</td></tr><tr><td>フェノールレッド</td><td>シグマ</td><td>P0290</td><td>マイクロインジェクション用、RNaseフリー</td></tr><tr><td>ピペットホルダー</td><td>ワーナーインスツルメンツ</td><td>PLI-PH1</td><td>マイクロインジェクション用</td></tr><tr><td>PrimeStar (Premix)</td><td>タカラ</td><td>DR040A</td><td>分子クローニング用</td></tr><tr><td>プロテイナーゼK</td><td>メルク</td><td>539480</td><td>ゲノムDNA抽出用</td></tr><tr><td>pT3TS (T3:zCas9-UTRglobin)</td><td>中国ゼブラフィッシュリソースセンター (CZRC)</td><td>CZP11</td><td>Cas9プラスミドテンプレート</td></tr><tr><td>冷蔵遠心分離機</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>RNA関連の遠心分離用</td></tr><tr><td>スケール</td><td>ザルトリウス</td><td>BCE124-1CCN</td><td>キャスティング用、注入プレート、アガロースゲル</td></tr><tr><td>はさみ</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>成魚の尾のクリッピング用</td></tr><tr><td>SDS</td><td>サンゴン</td><td>A600485</td><td>溶解バッファー調製用</td></tr><tr><td>小型ブラシ</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>マイクロインジェクションプレート上の胚を優しく動かすため</td></tr><tr><td>分光光度計</td><td>サーモフィッシャー</td><td>NanoDrop 2000</td><td>DNA/RNA濃度測定用</td></tr><tr><td>ステージマイクロメーター</td><td>任意のブランド</td><td>DIV(分割) = 0.01 mm</td><td>1-nLの液滴を定量化するため</td></tr><tr><td>ステレオ蛍光顕微鏡</td><td>オリンパス</td><td>SZX16</td><td>遺伝子発現の観察用</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>Motic</td><td>SMZ-168</td><td>観察・マイクロインジェクション用</td></tr><tr><td>T7 RiboMAX Express 大規模RNA産生システム</td><td>Promega</td><td>P1320</td><td>sgRNAの体外転写、RNaseフリー</td></tr><tr><td>温度制御インキュベーター</td><td>ブランド問わず</td><td>N/A</td><td>胚インキュベーション用</td></tr><tr><td>TIDE</td><td></td><td>TIDE https://tide.nki.nl/</td> <td>sgRNA効率解析用&nbsp;</td></tr><tr><td>トリカインメタンスルホン酸</td><td>シグマ</td><td>A5040</td><td>トリカイン溶液調製用</td></tr><tr><td>トリス</td><td>サンゴン</td><td>A600194</td><td>トリカイン溶液、溶解緩衝液およびTAE緩衝液調製用</td></tr><tr><td>トリプトン</td><td>OXOID</td><td>LP0042</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>ピンセット</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>注射針の切断用</td></tr><tr><td>XbaI</td><td>NEB</td><td>R0145S</td><td>酵素用消化</td></tr><tr><td>酵母エキス</td><td>OXOID</td><td>LP0021</td><td>LBプレート用</td></tr><tr><td>ゼブラフィッシュ水族館システム</td><td>ESEN</td><td>ESEN-AW-S1</td><td>成魚飼育用</td></tr><tr><td>ゼブラフィッシュの交配タンク(仕切り付き)</td><td>任意のブランド</td><td>N/A</td><td>魚の交配用</td></tr><tr><td>Zeiss LSM 900+Airyscan2</td><td>ZEISS</td><td>Zeiss LSM900</td><td>蛍光標識魚の共焦点イメージングとデータ分析用</td></tr><tr><td>ZFINウェブサイト</td><td>ZFIN</td><td>http://zfin.org/</td> <td>遺伝子情報を探すには</td></tr></tbody></table>

ゼブラフィッシュの低発現タンパク質を可視化するための蛍光標識

Fluorescence Labeling to Visualize Low-Expressed Proteins in Zebrafish

コネキシンと呼ばれる高分子タンパク質からなるギャップ結合は、接触する細胞間での低分子量代謝物とイオンの交換に不可欠です。上記の蛍光タンパク質標識法を用いて、 コネキシン39.9 (図5A)および コネキシン44.1 (図5B)をそれぞれ標識した。ジャンクションPCRにより、正しいKIが検証されました(図6)。公表されたデータ16と一致して、遺伝性の特異的蛍光が全てのF1 子孫の筋肉で観察され、 コネキシン39.9 のGFP標識が成功したことを示している(図5A)。以前の報告17と一致して、遺伝性の特異的蛍光がすべてのF2 子孫の水晶体で検出され、 コネキシン44.1のmCherryタグ付けが成...

CRISPR/Cas9-mediated knock-in (KI) technology allows for easier fluorescent-protein tagging in zebrafish (Danio rerio), a preferred model organism for in ...

fluorescence-labeling-to-visualize-low-expressed-proteins-in-zebrafish

Research

JoVE Journal

Genetics

遺伝学

in situハイブリダイゼーション全体のマウントは、発生生物学で最も広く使用されている技術の一つです。ここで、我々は、単一の遺伝子の正確な発現パターンを解析するためと、二つの遺伝子の発現領域の重なりを判定するためのin...

ゼブラフィッシュの全マウント高分解能二重蛍光上皮内ハイブリダイゼーション

初期胚を形成する形態形成のプロセスを理解するための鍵は、高解像度での画像セルにできることです。ここでは、細胞膜をターゲットとする緑色蛍光タンパク質で全体のゼブラフィッシュの胚では細胞の単一細胞または小さなクラスターを標識するためのテクニックを説明します。...

ゼブラフィッシュ後脳における標識およびイメージング細胞

このプロトコルは、uncagedフルオレセインからの信号を増幅するために免疫標識全体のマウントが続くケージフルオレセインのUV...

レーザーUncagableフルオレセインデキストランでゼブラフィッシュ細胞の系統ラベリング

死細胞は、バリア機能を中断することなく、隣接する細胞の協調した収縮によって上皮組織から押し出される。ゼブラフィッシュの開発の光学的透明度は、上皮の生体内で押し出しを可視化するための優れたシステムを提供します。ここでは、携帯電話の解像度で幼生ゼブラフィッシュの表皮で押し出しを誘発し、イメージする方法を説明します。...

開発ゼブラフィッシュの表皮から細胞の押出のライブイメージング

Ti:Sapphireフェムト秒レーザー発振器による2光子吸収を用い、ケージド蛍光タンパク質を含む単一細胞を光活性化させる方法について記述します。光活性化された細胞の運命地図（フェイトマッピング）を作成するために、免疫組織化学法を用います。この手法は、あらゆる細胞型に適用可能です。...

ゼブラフィッシュにおける単一の細胞運命のマッピング

ここで説明するには、ゼブラフィッシュ胚における組織特異的な蛍光の半自動イメージングのためのプロトコルです。...

ゼブラフィッシュ胚における組織特異的蛍光の半自動イメージング

ゼブラフィッシュ胚は、発生生物学の研究のための優れたモデルである。胚発生の間に、ゼブラフィッシュは、試料観察および分析のための3次元の課題が卵黄塊で開発しています。このプロトコルは、その場でホールマウントの準備を取り付ける2次元の平面を作成する方法について説明します（WISH）は、ゼブラフィッシュ胚の標本を染色した。...

ホールマウントによるゼブラフィッシュ胚標本ステンドの観察および分析のためのフラットマウントの準備<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーション

細胞および組織中のタンパク質レベルは、多くの場合、緊密にタンパク質産生及びクリアランスのバランスによって調節される。光変換した後、蛍光減衰（FDAP）を使用して、タンパク質のクリアランス速度は、実験的にin vivoで測定することができる。...

光変換後の蛍光減衰を使用して生活ゼブラフィッシュ胚におけるタンパク質の安定性の測定（FDAP）

&gt;jove_content&lt;細胞小器官や他の細胞内構造の動的挙動をin...

リビングゼブラフィッシュ胚における細胞内構造のイメージング

個々の細胞に指向性ストレスや死を引き起こすための標的操作は、達成するのが比較的困難でした。ここでは、細胞培養および生きた動物の個々の細胞を選択的にストレスを与えて死滅させるための単一細胞分解能アブレーションアプローチについて、標準的な共焦点UVレーザーに基づいて説明します。...

従来のUVレーザー共焦点顕微鏡を用いて細胞ストレスと死のトリガ

このプロトコルは、初期のゼブラフィッシュ胚からの凍結切片に対する順次免疫蛍光および免疫組織化学を示し、特定の細胞集団における正確なコローカリゼーション分析を可能にする。...

凍結切除ゼブラフィッシュ胚に対する順次免疫蛍光と免疫組織化学

学ぶゼブラフィッシュの低発現タンパク質を蛍光タグで可視化する手法。Danio rerioを用いてタンパク質局在を観察し、ドナー構築を効率化する。このプロトコルは神経科学・バイオテクノロジー研究に有用です。

ゼブラフィッシュの低発現タンパク質を可視化するための蛍光標識

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