Name: マウス網膜の凍結切片および免疫染色 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-02-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 学ぶマウス網膜の凍結切片作成と免疫染色法。感光細胞の形態を保ちながら高品質な免疫蛍光染色を行い、網膜疾患の分子メカニズム解明に貢献する再現性の高いプロトコルです。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Tokuyasu, K. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunochemistry+on+ultrathin+frozen+sections%5BTitle%5D)+AND+%22Histochem+J%22%5BJournal%5D)">Immunochemistry on ultrathin frozen sections.</a> Histochem J. 12 (4), 381-403 (1980).</li>
<li>Ramos-Vara, J. A., Miller, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+tissue+antigens+and+antibodies+get+along%3A+Revisiting+the+technical+aspects+of+immunohistochemistry--the+red%2C+brown%2C+and+blue+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">When tissue antigens and antibodies get along: Revisiting the technical aspects of immunohistochemistry--the red, brown, and blue technique.</a> Vet Pathol. 51 (1), 42-87 (2014).</li>
<li>Usukura, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cryosectioning+technique+for+the+observation+of+intracellular+structures+and+immunocytochemistry+of+tissues+in+atomic+force+microscopy+%28AFM%29%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">A cryosectioning technique for the observation of intracellular structures and immunocytochemistry of tissues in atomic force microscopy (AFM).</a> Sci Rep. 7 (1), 6462(2017).</li>
<li>Park, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramolecular+organization+of+rhodopsin+in+rod+photoreceptor+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Pflugers+Arch%22%5BJournal%5D)">Supramolecular organization of rhodopsin in rod photoreceptor cell membranes.</a> Pflugers Arch. 473 (9), 1361-1376 (2021).</li>
<li>Boonstra, H., Oosterhuis, J. W., Oosterhuis, A. M., Fleuren, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cervical+tissue+shrinkage+by+formaldehyde+fixation%2C+paraffin+wax+embedding%2C+section+cutting+and+mounting%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch+A+Pathol+Anat+Histopathol%22%5BJournal%5D)">Cervical tissue shrinkage by formaldehyde fixation, paraffin wax embedding, section cutting and mounting.</a> Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol. 402 (2), 195-201 (1983).</li>
<li>Stradleigh, T. W., Ishida, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fixation+strategies+for+retinal+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Retin+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Fixation strategies for retinal immunohistochemistry.</a> Prog Retin Eye Res. 48, 181-202 (2015).</li>
<li>Thavarajah, R., Mudimbaimannar, V. K., Elizabeth, J., Rao, U. K., Ranganathan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+and+physical+basics+of+routine+formaldehyde+fixation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Oral+Maxillofac+Pathol%22%5BJournal%5D)">Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.</a> J Oral Maxillofac Pathol. 16 (3), 400-405 (2012).</li>
<li>Li, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+method+for+preparation+of+mouse+retinal+cryosections%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Histochem%22%5BJournal%5D)">An improved method for preparation of mouse retinal cryosections.</a> Eur J Histochem. 64 (3), 3154(2020).</li>
<li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quick+protocol+for+the+preparation+of+mouse+retinal+cryosections+for+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Open+Biol%22%5BJournal%5D)">A quick protocol for the preparation of mouse retinal cryosections for immunohistochemistry.</a> Open Biol. 11 (7), 210076(2021).</li>
<li>Szel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+topographic+separation+of+two+spectral+classes+of+cones+in+the+mouse+retina%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Unique topographic separation of two spectral classes of cones in the mouse retina.</a> J Comp Neurol. 325 (3), 327-342 (1992).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>-80度;C冷凍庫</td><td>ハイアール</td><td>DW-86L626</td><td></td></tr><tr><td>接着顕微鏡スライド</td><td>CITOTEST</td><td>80312-3161</td><td></td></tr><tr><td>Alexa488-ヤギ 抗ウサギ</td><td>プロテインテック</td><td>SA00006-2</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6J マウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td>664</td><td></td></tr><tr><td>クライオ切片 ミクロトーム</td><td>ライカ</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット</td><td>ライカ</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>細胞シグナル技術</td><td>4083S</td><td></td></tr><tr><td>解剖顕微鏡</td><td>ZEISS</td><td>3943030830</td><td></td></tr><tr><td>Donkey serum</td><td>Solarbio</td><td>S9100</td><td></td></tr><tr><td>埋め込み型</td><td>サーモフィッシャーサイエンティフィック</td><td>1841</td><td></td></tr><tr><td>微細解剖ハサミ</td><td>RWD</td><td>S13001-10</td><td></td></tr><tr><td>微細鉗子</td><td>RWD</td><td>F11020-11</td><td></td></tr><tr><td>フルオロマウント水性封入剤</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4680</td><td></td></tr><tr><td>インキュベーター</td><td>上海月進</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1049330500</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1048771000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td> サー<td>モフィッシャーサイエンティフィック</td><td>FIS-06666</td><td></td></tr><tr><td>レーザー共焦点顕微鏡</td><td>ZEISS</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡カバー ガラス</td><td>CITOTEST</td><td>80340-3610</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1065860500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1091371003</td><td></td></tr><tr><td>O.C.Tコンパウンド</td><td>さくら</td><td>4583</td><td></td></tr>パ<tr><td>ニコロウペン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>Z672548</td><td></td></tr><tr><td>PFA</td><td>シグマアルドリッチ</td><td>441244</td><td></td></tr><tr><td>ウサギ抗PDE6B</td><td>プロテインテック</td><td>22063-1-AP</td><td></td></tr><tr><td>シェー</td><td>カーSCILOGEX</td><td>8042210200</td><td></td></tr><tr><td>春はさみ</td><td>RWD</td><td>S11036-08</td><td></td></tr><tr><td>ショ糖</td><td>BioFroxx</td><td>1245GR500</td><td></td></tr><tr><td>瞬間接着剤</td><td>デリ</td><td>7147S</td><td></td></tr><tr><td>テニスストリング (1.24mm)</td><td>五線</td><td>TS761</td><td></td></tr><tr><td>トリブロモエタノール</td><td>マックリン</td><td>T831042</td><td></td></tr><tr><td>トリトン X-100</td><td>ソーラーバイオ</td><td>IT9100</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス網膜の凍結切片および免疫染色

Cryosectioning and Immunostaining of Mouse Retina

上記のプロトコルに従って、生後1か月の野生型C57Bl/6Jマウスの眼を4%PFAに固定しました。その後、固定したサンプルをOCTに包埋し、凍結切片化しました。切片を抗PDE6B抗体で免疫染色し、DAPIで対比染色して核を標識しました。PDE6Bは、桿体視細胞4に特異的に発現する光伝達タンパク質である。従来のプロトコルと比較して、このプロトコルはマウス網膜の形態と免疫蛍光画像の品質の両方を大幅に改善し、優れた一貫性を提供します。代表的な結果は、抗PDE6Bを用いた網膜凍結切片の免疫染色が成功したことを示しています(図2)。視細胞の外側セグメントは、抗PDE6Bで明確に標識されました。すべての視細胞の外側セグメントは形態学的に無傷で見え、個々のセグメントは識別可能でした。この切片では網膜剥離は観察されませんでした。さらに、内側のセグメントと外側の核層は無傷のままでした。
<img alt="F...

Tissue sectioning and immunohistochemistry are essential techniques in histological and pathological studies of retinal diseases using animal models. ...

cryosectioning-and-immunostaining-of-mouse-retina

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

新生児マウスの網膜は血管新生を調節する別の遺伝子や薬剤の役割の調査を可能にし、血管新生のよく特徴付け生理学的モデルを提供...

血管新生を調査するために新生児マウス網膜の全体のマウント免疫蛍光染色<em生体内で&gt;</em

ポストエンベッドイムノゴールド法は、特定の分子の細胞内局在を高解像度で分析するための最も効果的な方法の一つです。ここでは、網膜リボンシナプスにおけるグルタミン酸受容体を定量的に解析するためのプロトコールについて述べます。...

網膜リボンシナプスにおける膜受容体の高分解能定量的イムノゴールド分析

ラット網膜血管ペリサイト、すなわち、低温セクション、全体-マウント、および血管ネットワークの低張性分離の免疫組織化学的可視化のための 3...

網膜の低温電子顕微鏡セクション全体-マウント、および微小血管の免疫組織化学的可視化の低張性分離血管準備

本報告では、免疫組織化学(IHC)のための凍結マウス網膜切片を準備するための包括的な方法について説明する。...

免疫組織化学用マウスレチンクライオ切片の調製

ここでは、脳組織のCLARITY法を全マウントレチナに適応させ、標準的な免疫組織化学染色およびレチナルニューロンとその細胞下構造の高解像度イメージングの品質を向上させるプロトコルを提示する。...

CLARITY組織クリアリング法による全マウントレティナの免疫染色

このプロトコルは、タンパク質分析のためにマウスの桿体光受容体の細胞内区画を単離するための2つの技術を提示する。第1の方法は、生きた網膜とセルロース濾紙を使用してロッドの外側セグメントを分離し、第2の方法は凍結乾燥された網膜と粘着テープを使用してロッドの内側と外側のセグメント層を剥離する。...

タンパク質分析のためのマウス網膜における光受容体細胞区画の単離のための2つの剥離方法

ここでは、複雑な組織における機能的に関連するカスパーゼを同定、検証、標的化するための詳細な免疫組織化学プロトコルを示します。...

網膜組織における免疫染色カスパーゼ-9の定量

このプロトコルは、ホールマウントマウス網膜を単離し、免疫染色を実施してすべての網膜神経節細胞(RGC)を標識する手順を説明しています。このプロセスに続いて、AIベースのソフトウェアを使用してRGCをイメージングし、自動的にカウントし、マウス網膜全体のRGCを定量するためのシンプルで高速かつ正確な方法を提供します。...

マウス網膜神経節細胞のホールマウント免疫染色および自動計数(英語)

蛍光トマトレクチンの眼窩後注射後、血小板由来成長因子受容体βによる免疫蛍光染色により、網膜血管系の周皮細胞を調べました。標識された網膜をさらに組織透明化法で処理し、共焦点顕微鏡下で網膜血管系を取り巻く周皮細胞の3次元ビューを視覚化するために全体をマウントしました。...

免疫染色によるマウス網膜血管周皮細胞の3D可視化 

網膜は、その層状構造全体で複雑な空間構成を示します。最新の空間トランスクリプトミクスおよびシーケンシング技術では、厚さ20μm&lt;組織切片が必要であり、網膜研究の適用性は限られています。この新鮮凍結凍結切片法は、平面的な空間的関係を維持しながら、マウス網膜の薄い 顔...

顔面 高次元空間分子解析のためのマウス網膜の凍結切片

学ぶマウス網膜の凍結切片作成と免疫染色法。感光細胞の形態を保ちながら高品質な免疫蛍光染色を行い、網膜疾患の分子メカニズム解明に貢献する再現性の高いプロトコルです。

マウス網膜の凍結切片および免疫染色

さらに動画を探す