実験用マウスからの牛乳サンプリングのための効率的な一人用手法

この研究は、授乳研究、特にマウスにおけるミルクサンプリング技術の改善に焦点を当てています。私たちは、サンプルの損失、限られた量、労働集約的なプロセスなどの課題を克服する方法を提示し、げっ歯類のミルク収集のための合理化されたソリューションと、この分野の研究者にとって貴重なツールを提供します。マウスで研究を行う際の最大の課題の1つは、特に牛乳などの生体液のサンプリングに関しては、マウスのサイズが小さいことです。

サンプルをプールしたり、2人で手作業で採取したりしなければ、十分な量を得ることは難しく、多くの場合、このプロセスは実用的ではありません。当社のプロトコルは、1 人の人間がすぐに利用できるラボツールを使用して 10 分以内に十分な量を収集できるようにすることで、牛乳の収集を簡素化します。他の方法とは異なり、連続吸引によりサンプルの損失を最小限に抑え、ミルクを直接収集チューブに引き込むことで、時間を節約し、分析のための量を維持します。

まず、内径5/32インチのPVCチューブの一端を真空ポンプに取り付け、取り付けをテープで固定します。とげのあるストレートコネクタを使用して、5/32インチの内径PVCチューブのもう一方の端を1/8インチの内径PVCチューブに接続します。次に、コネクタを使用して、内径1/8インチのPVCチューブのもう一方の端を18ゲージの皮下注射針に取り付けます。

はさみを使用して、P200ピペットの先端を約0.2センチメートルにカットして、より大きな開口部を作ります。改造したP200ピペットチップをセプタムストッパーの開口部からチップが上を向くように挿入し、セプタムストッパーを滅菌収集チューブに取り付けます。18ゲージの皮下注射針を使用して、中隔ストッパーに穴を開けます。

次に、真空ポンプをオンにして、手袋をはめた指をピペットの先端開口部に当てて吸引圧力を確認します搾乳日には、母犬を子犬から分離して、乳腺にミルクが蓄積できるようにします。巣の中で子犬を暖かく保ちます。ダムに麻酔をかけた後、ダムの片方の足をしっかりと握って、動物の感覚と痛みの知覚を評価します。

次に、麻酔下での乾燥を防ぐために、動物用眼科軟膏をダムの目に塗布します。麻酔をかけたダムを彼女の背中にしっかりとした作業面に置きます。ダムの乳房部分を滅菌アルコール調製ワイプでやさしく清掃します。

注射を受けていない腹腔の側面にある4番目と5番目の乳頭のペアの間に、1〜2ユニットのオキシトシンを腹腔内投与します。.利き手ではない手でダムの首の部分をそっと首筋にします。次に、乳腺組織の基部から乳頭の先端まで、ミルクのビーズが見えるまで押します。

電源ボタンを押して、バキュームデバイスの電源を入れます。搾乳を開始するには、倒立したP200ピペットチップを乳頭にそっと当て、優しく引っ張る動作で母乳を引き出します。十分な量のミルクが集まるまで、すべての乳頭を搾乳します。

その後、麻酔をかけたダムをケージに戻し、麻酔薬の回復期間中、彼女が暖かく保たれることを確認します。各ダムから0.1〜0.5ミリリットルの牛乳を10分以内に快適に採取できます。乳脂肪濃度は、分娩後2日目の174.4g/Lから、分娩後10日には224.4g/Lに大幅に増加しました。

乳糖濃度と総タンパク質濃度は、分娩後2日目と分娩後10日目との間に有意差を示さなかった。α-S1-カゼインとホエイ酸性タンパク質の相対存在量は、分娩後10日目の牛乳では分娩後2日目の牛乳と比較して高かったが、β-カゼインは分娩後10日目の牛乳よりも分娩後2日目の牛乳で豊富であった。電気泳動ゲル上のタンパク質バンド強度により、個々の乳タンパク質の相対存在量の違いが視覚的に確認されました。