表面プラズモン共鳴技術によるPD-1/PD-L1阻害剤の同定

私は創薬に携わっており、PD-1、PD-L1 などの新しいがん免疫チェックポイント阻害剤を発見しています。私の主な質問は、これを高速化するために高スループットのスクリーンプラットフォームをどのように設計できるかということです。近年、PD-1、PD-L1を標的とする生物学的医薬品は大きな進歩を遂げています。低分子医薬品はまだ開発の初期段階にありますが、PD-1、PD-L1を標的とした低分子医薬品の開発を目指しています。

均質時間分解蛍光、HTIF、およびaf-ah-ly-zerは、PD-1、PD-L1阻害剤のスクリーニングに応用できる2つの技術です。低分子の溶解度とバッファーの不一致は、現在の実験における主な課題です。

SPRは、結合親和性測定だけでなく、PD-1、PD-L1阻害剤のスクリーニングプラットフォームとしても開発できることを発見しました。

[講師]まず、表面プラスミン共鳴またはSPR装置のスイッチを入れます。[開いている]または[新しいウィザードテンプレート]をクリックし、[固定化]を選択して固定化方法を設定します。チップタイプをCM-5に設定します。Amin法とサイクルごとのフローセルを1に設定します。次に、フローセル1とフローセル2をSA-40マイクログラム/ミリリットルとして固定化します。固定化方法としてSAビオチンキャプチャを選択します。フローセル1をブランク固定用に設定します。フローセル 2 では、10 マイクログラム/ミリリットル、PD-1 をリガンドとして固定化レベル、目標は 4,000 応答単位を目指します。次に、実行する前にプライムを確認してください。バッファーインレットを含む2つのベイをHBSEPポジティブランニングバッファー溶液に入れます。メンテナンスセンサーチップを取り出し、CM-5チップを挿入します。固定化方法を再度開きます。次に、試薬ラック2を挿入し、試薬の位置を確認します。推定期間だけメソッドを実行します。2 つのベイを HBSEP ポジティブ ランニング バッファー溶液に入れます。メンテナンスセンサーチップを取り出し、SAチップを挿入します。固定化方法を再度開いた後、試薬ラック2を挿入し、試薬の位置を確認します。推定期間だけメソッドを実行します。PD-1、PD-L1相互作用の検証では、一般設定でデータ収集速度を10ヘルツに設定します。検出は複数です。サンプルコンパートメント温度は摂氏25度まで、濃度単位はマイクロモルです。アッセイステップで、コンディショニング反復を10回に設定します。10回の反復で速度論まで開始します。1回の繰り返しと摂氏25度の温度で速度論にサンプルを採取します。次に、接触時間を60秒、解離時間を60秒、流量を毎分30マイクロリットルに設定します。メソッド変数で、プロパティを変数として設定し、サンプルソリューションを選択します。評価変数で、評価目的を速度論的親和性として選択し、定義済みの変数を濃度とMWとして選択します。実行を設定し、2 から 1 と 4 から 3 の流路を選択します。分子量51,300ダルトンのゼロマイクロモル、0.037マイクロモル、0.111マイクロモル、および0.333マイクロモルの入力PD-L1濃度。200ミリリットルのHBSEP陽性ランニングバッファー溶液を調製し、ランニングバッファーでPD-L1希釈液を希釈します。すべての試薬をレイアウト上のそれぞれの位置に配置し、推定時間実行します。低分子阻害剤を使用したブロケードアッセイでは、バリデーションテストで行われたのと同じ設定と流量を使用します。ランを設定し、流路を選択したら、サンプルのPD-L1溶液と希釈したBMS 1166溶液を入力します。指定されたように、試薬ラックの2つのレイアウトにウェル位置を割り当てます。次に、5ミリグラムのBMS 1166を77.99マイクロリットルのDMSOに溶解して、100ミリモルの原液を調製します。すべての試薬を指定されたとおりに配置します。フローセル1およびフローセル2でのストレプトアビジンタンパク質の固定化では、2000応答単位の目標応答単位がほぼ達成されました。フローセル1は1902.3応答単位の最終応答を示し、フローセル2は1900.7応答単位を示しました。フローセル1のブランクセルはマイナス161と低い応答単位でしたが、フローセル2は4,000応答単位の目標を達成し、最終応答は3698.5でした。テストされたグリシンpH条件の中で、グリシンpH 2.0は、安定したベースライン応答で再生に最も最適であると特定され、PD-1タンパク質の損失が最小限に抑えられ、PD-L1の除去に成功したことが示されました。さまざまな濃度のPD-L1とPD-1との結合相互作用を定量化し、測定可能な応答をもたらしました。PD-1、PD-L1結合相互作用の遮断効果は、0〜3.125マイクロモルの間でBMS 1166希釈で観察されました。結合応答単位は、BMS 1166の濃度が増加するにつれて比例して減少しました。