Name: 放射線感受性および放射線耐性遺伝子を明らかにするためのゲノムワイドCRISPRスクリーニング (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T13:25:00.000+00:00
Duration: 8 min 32 s
Description: 学ぶゲノムワイドCRISPRスクリーニング法により、肺がん細胞における放射線感受性および耐性遺伝子を同定する方法。この技術は、放射線治療耐性の遺伝的基盤を解明し、治療戦略の最適化に貢献します。

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<li>Hung, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+profiling+of+human+extrachromosomal+DNA+by+CRISPR-CATCH%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Targeted profiling of human extrachromosomal DNA by CRISPR-CATCH.</a> Nat Genet. 54 (11), 1746-1754 (2022).</li>
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<li>Razavi, Z., Soltani, M., Souri, M., Van Wijnen, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CRISPR+innovations+in+tissue+engineering+and+gene+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">CRISPR innovations in tissue engineering and gene editing.</a> Life Sci. 358, 123120(2024).</li>
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<li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineered+miniature+CRISPR-Cas+system+for+mammalian+genome+regulation+and+editing%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">Engineered miniature CRISPR-Cas system for mammalian genome regulation and editing.</a> Mol Cell. 81 (20), 4333-4345 (2021).</li>
<li>Huang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS-based+genome-wide+CRISPR+screens+define+key+regulators+of+DNA+damage+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell%22%5BJournal%5D)">FACS-based genome-wide CRISPR screens define key regulators of DNA damage signaling pathways.</a> Mol Cell. 83 (15), 2810-2828 (2023).</li>
<li>Feng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genome-wide+CRISPR+screen+identifies+synthetic+lethality+between+DOCK1+inhibition+and+metformin+in+liver+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Cell%22%5BJournal%5D)">Genome-wide CRISPR screen identifies synthetic lethality between DOCK1 inhibition and metformin in liver cancer.</a> Protein Cell. 13 (11), 825-841 (2022).</li>
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<table><tbody><tr><td>150mm細胞および組織培養皿</td>無<td>錫NEST Biotechnology Co.、Ltd.</td><td>715011</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>35mm細胞・組織培養皿</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>706011</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>A549 細胞株</td><td>ATCC</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>細胞計数キット-8</td><td>Shanghai Beyotime Biotech Inc</td><td>C0041</td><td>細胞生存率アッセイ用</td></tr><tr><td>CO2-independent 培地</td><td>PHCbi</td><td>MCO-50AIC</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>Countess 3 FL 自動細胞カウンター</td><td>Themo Scientific</td><td>AMQAF2001</td><td>細胞計数用</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>ウシ胎児血清</td><td>Gibco</td><td>10099141</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td>LEICA</td><td>ebq 100-04</td><td>蛍光顕微鏡用</td></tr><tr><td>ゲノムワイド CRISPR レンチウイルスライブラリー</td><td>Shanghai OBiO Technology Co., Ltd.</td><td>H5070</td><td>レンチウイルス感染用</td></tr><tr><td>MiniAmp plus PCR</td><td>Themo Scientific</td><td>C37835</td><td>PCR 増幅用</td></tr><tr><td>NEST 細胞培養プレート、12 ウェル</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>712002</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>NEST 細胞培養プレート、6 ウェル</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>703002</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>NEST 細胞培養プレート、96 ウェル</td><td>Wuxi NEST Biotechnology Co., Ltd.</td><td>701001</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>C10010500BT</td>細胞<td>培養</td></tr><tr><td>PCRフォワードプライマー(AATGGACTATCATATGCTTACCGTAACTTGAAAGTATTTCG)</td><td>Beijing AuGCT Biotech Co., Ltd.</td><td>-</td><td>PCR増幅用</td></tr><tr><td>PCRリバースプライマー(GATGTGCGCTCTGCCCACTGACGGGCA)</td><td>北京AuGCTバイオテック株式会社</td><td>-</td><td>PCR増幅用</td></tr><tr><td>ポリブレン</td>上海 <td>Beyotime Biotech Inc</td><td>C0351</td><td>レンチウイルス感染用</td></tr><tr><td>ピューロマイシン</td><td>MCE</td><td>HY-K1057</td><td>レンチウイルス感染後の分離用</td></tr><tr><td>RPMI 1640 細胞培養培地</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td>細胞培養</td></tr><tr><td>TIANGENamp ゲノム DNA キット</td><td>Beijing TIANGEN Biotech Co.,Ltd.</td><td>DP304</td><td>ゲノムDNA抽出用</td></tr><tr><td>X線粉末回折装置</td><td>PerkinElmer</td><td></td>放射線<td>治療用</td></tr></tbody></table>

放射線感受性および放射線耐性遺伝子を明らかにするためのゲノムワイドcrisprスクリーニング

Genome-Wide CRISPR Screen for Unveiling Radiosensitive and Radioresistant Genes

肺がんは、死亡率が最も高く、非常に侵攻性が高く、蔓延している医学的疾患です。肺がん細胞株A549を例に、放射線をスクリーニング条件としてゲノムワイドなCRISPRスクリーニングを実施すると、図 1に概略的なワークフローが示されています。まず、クローン形成とCCK8実験を通じて、さまざまな放射線量に対するA549細胞の感度を調査します(図2)。クローン作法では、コロニー数は2Gyで140±5.35であったのに対し、0Gyでは303±31.63であったのに対し、CCK-8アッセイでは、光学密度(OD)値は2Gyで0.65±0.05であったのに対し、0Gyでは1.35±0.08であった。放射線感受性および放射線抵抗性の候補遺伝子を調べるには、その後の放射線量として2Gy(IC50)を選択します。A549細胞を異なる用量のピューロマイシンで処理し、72時間後にカウントしました。A549細胞に対するピューロマイシンの最小死滅濃度は1μMとして検出されました(図3)。A5...

放射線感受性および放射線耐性遺伝子を明らかにするためのゲノムワイドCRISPRスクリーニング

The CRISPR-Cas9 system has been harnessed and repurposed into a powerful genome editing tool. By leveraging this technology, researchers can precisely ...

genome-wide-crispr-screen-for-unveiling-radiosensitive-radioresistant

Research

JoVE Journal

Cancer Research

がん研究

このビデオでは、CRISPR-Cas9を使用してゲノムを改変したトランスジェニックショウジョウバエを特定するためのスクリーニング方法を説明しています。CRISPR-Cas9は、科学者が生物のゲノムを操作する方法に革命をもたらした強力なゲノム編集ツールです。このプロトコル例では、トランス活性化配列の挿入によりブランチレス(bnl)遺伝子の最初のエクソンが置き換えられ、bnl遺伝子特異的なドライバーラインであるbnl-LexAが作られる、CRISPRで生成された変異体を同定する方法を見ていきます。...

ゲノム修飾のスクリーニング:ショウジョウバエのCRISPR生成変異体を同定する方法

ここで説明したジェノタイピング技術、キャピラリーゲル電気泳動に結合する蛍光ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）は、ヌクレアーゼ媒介ノックアウトクローンのハイスループット遺伝子型決定を可能にします。これは、他の遺伝子型判定技術が直面している制限を回避し、配列決定法よりも費用対効果の高いです。...

ハイスループットフォーマットでの遺伝子型CRISPR / Cas9媒介ノックアウト変異体に蛍光PCR-キャピラリーゲル電気泳動法を用いました

体細胞株を遺伝子操作する能力の最近の進歩は、基礎研究および応用研究の大きな可能性を秘めている。ここでは、選択マーカーを使用した場合と使用しない場合の、哺乳類細胞株におけるCRISP / Cas9生成ノックアウト産生およびスクリーニングのための2つのアプローチを提示する。...

哺乳類細胞におけるCRISPR / Cas9媒介遺伝子ノックアウトの選択依存性および独立した世代

CRISPR/sgRNA ライブラリは、蛋白質コーディングの遺伝子を尋問に適用されています。ただし、CTCF 境界の遺伝子発現制御の機能を明らかにするための sgRNA ライブラリの可能性は未踏のままになります。ここでは、 HOX遺伝子座の CTCF 境界の働きを解明するHOX遺伝子特定 sgRNA...

HOX軌跡 Focused CRISPR/sgRNA ライブラリ スクリーニングを識別する重要な CTCF の境界

CRISPR-Cas9技術は、あらゆる細胞型の哺乳類ゲノムを正確に編集する効率的な方法を提供し、ゲノム全体の遺伝スクリーンを実行する新しい手段を表します。プールされたゲノム全体のCRISPR-Cas9スクリーンのパフォーマンスを成功させるには必要な手順を説明する詳細なプロトコルをここで提供します。...

哺乳類細胞におけるCRISPRベースの遺伝子スクリーンのプール

本稿では、細胞外受容体とリガンドの相互作用を同定するためのゲノムスケール細胞ベースのスクリーニングアプローチについて述べる。...

ゲノムスケールCRISPR/Cas9遺伝子スクリーンを用いた細胞表面受容体同定

ここでは、子宮胚性レンチウイルス注射で超音波誘導を使用した迅速かつ直接的なin vivo...

In Vivo CRISPR/Cas9スクリーニングによるマウス皮膚と口腔の遺伝子機能の同時評価

CRISPRのような技術に対する大きな障壁は、重要な遺伝子を破壊する可能性のあるオフターゲットイベントです。「Circularization for In Vitro Reporting of Cleavage Effects by...

オフターゲット遺伝子編集の検討のためのCIRCLE-Seq

この記事では、健康なドナーキメラ抗原受容体T細胞におけるゲノムワイドCRISPRノックアウトスクリーニングを完了するための消耗に対する in vitro モデルの適用に関するプロトコルについて説明しています。...

キメラ抗原受容体T細胞におけるIn vitroゲノムワイドCRISPRノックアウトスクリーニングの実施

ここでは、CRISPR/Cas9技術とCell Counting...

CRISPR/Cas9技術とセルカウンティングの併用による造血幹細胞および前駆細胞の異常増殖関連遺伝子の評価

学ぶゲノムワイドCRISPRスクリーニング法により、肺がん細胞における放射線感受性および耐性遺伝子を同定する方法。この技術は、放射線治療耐性の遺伝的基盤を解明し、治療戦略の最適化に貢献します。

放射線感受性および放射線耐性遺伝子を明らかにするためのゲノムワイドCRISPRスクリーニング

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