Name: 壊死、アポトーシス、血小板活性化の特徴を示す凝固促進血小板の包括的解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-05-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 37 s
Description: 学ぶ凝固促進血小板の包括的解析法。壊死、アポトーシス、活性化の特徴を示す血小板を流式細胞法で同定し、血栓症リスク評価と治療標的探索に応用する。

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<ol><li>Munnix, I., Cosemans, J., Auger, J., Heemskerk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+response+heterogeneity+in+thrombus+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet response heterogeneity in thrombus formation.</a> Thromb Haemost. 102 (12), 1149-1156 (2009).</li>
<li>Heemskerk, J. W. M., Mattheij, N. J. A., Cosemans, J. M. E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-based+coagulation%3A+Different+populations%2C+different+functions%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Platelet-based coagulation: Different populations, different functions.</a> J Thromb Haemost. 11 (1), 2-16 (2013).</li>
<li>Podoplelova, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coagulation+factors+bound+to+procoagulant+platelets+concentrate+in+cap+structures+to+promote+clotting%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Coagulation factors bound to procoagulant platelets concentrate in cap structures to promote clotting.</a> Blood. 128 (13), 1745-1755 (2016).</li>
<li>Mann, K. G., Butenas, S., Brummel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamics+of+thrombin+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamics of thrombin formation.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (1), 17-25 (2003).</li>
<li>Jackson, S. P., Schoenwaelder, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets%3A+Are+they+necrotic%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets: Are they necrotic.</a> Blood. 116 (12), 2011-2018 (2010).</li>
<li>Hua Vivien Mun Yee, V. M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procoagulant+platelets+and+the+pathways+leading+to+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Thromb+Hemost%22%5BJournal%5D)">Procoagulant platelets and the pathways leading to cell death.</a> Semin Thromb Hemost. 41 (04), 405-412 (2015).</li>
<li>Dale, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated-platelets%3A+An+emerging+component+of+the+procoagulant+response%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Coated-platelets: An emerging component of the procoagulant response.</a> J Thromb Haemost. 3 (10), 2185-2192 (2005).</li>
<li>Vulliamy, P., Armstrong, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+in+hemostasis%2C+thrombosis%2C+and+inflammation+after+major+trauma%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Platelets in hemostasis, thrombosis, and inflammation after major trauma.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 44 (3), 545-557 (2024).</li>
<li>Vulliamy, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+H4+induces+platelet+ballooning+and+microparticle+release+during+trauma+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Histone H4 induces platelet ballooning and microparticle release during trauma hemorrhage.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 116 (35), 17444-17449 (2019).</li>
<li>Aliotta, A., Bertaggia Calderara, D., Zermatten, M. G., Marchetti, M., Alberio, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombocytopathies%3A+Not+just+aggregation+defects-the+clinical+relevance+of+procoagulant+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Med%22%5BJournal%5D)">Thrombocytopathies: Not just aggregation defects-the clinical relevance of procoagulant platelets.</a> J Clin Med. 10 (5), 894(2021).</li>
<li>Kirkpatrick, A. C., Vincent, A. S., Dale, G. L., Prodan, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+predict+stroke+at+30+days+following+TIA%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">Coated platelets predict stroke at 30 days following TIA.</a> Neurology. 89 (2), 125-128 (2017).</li>
<li>Kirkpatrick, A. C., Tafur, A. J., Vincent, A. S., Dale, G. L., Prodan, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+improve+prediction+of+stroke+and+transient+ischemic+attack+in+asymptomatic+internal+carotid+artery+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Coated platelets improve prediction of stroke and transient ischemic attack in asymptomatic internal carotid artery stenosis.</a> Stroke. 45 (10), 2995-3001 (2014).</li>
<li>Suzuki, J., Umeda, M., Sims, P. J., Nagata, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium-dependent+phospholipid+scrambling+by+TMEM16F%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Calcium-dependent phospholipid scrambling by TMEM16F.</a> Nature. 468 (7325), 834-838 (2010).</li>
<li>Prodan, C. I., Vincent, A. S., Dale, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelet+levels+correlate+with+bleed+volume+in+patients+with+spontaneous+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Coated platelet levels correlate with bleed volume in patients with spontaneous intracerebral hemorrhage.</a> Stroke. 41 (6), 1301-1303 (2010).</li>
<li>Josefsson, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consensus+report+on+markers+to+distinguish+procoagulant+platelets+from+apoptotic+platelets%3A+Communication+from+the+Scientific+and+Standardization+Committee+of+the+ISTH%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Consensus report on markers to distinguish procoagulant platelets from apoptotic platelets: Communication from the Scientific and Standardization Committee of the ISTH.</a> J Thromb Haemost. 21 (8), 2291-2299 (2023).</li>
<li>Kulkarni, P. P., Sonkar, V. K., Gautam, D., Dash, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMPK+inhibition+protects+against+arterial+thrombosis+while+sparing+hemostasis+through+differential+modulation+of+platelet+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">AMPK inhibition protects against arterial thrombosis while sparing hemostasis through differential modulation of platelet responses.</a> Thromb Res. 196, 175-185 (2020).</li>
<li>Ekhlak, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Necroptosis+executioner+MLKL+plays+pivotal+roles+in+agonist-induced+platelet+prothrombotic+responses+and+lytic+cell+death+in+a+temporal+order%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Death+Differ%22%5BJournal%5D)">Necroptosis executioner MLKL plays pivotal roles in agonist-induced platelet prothrombotic responses and lytic cell death in a temporal order.</a> Cell Death Differ. 30 (8), 1886-1899 (2023).</li>
<li>Kholmukhamedov, A., Janecke, R., Choo, H. -J., Jobe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mitochondrial+calcium+uniporter+regulates+procoagulant+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">The mitochondrial calcium uniporter regulates procoagulant platelet formation.</a> J Thromb Haemost. 16 (11), 2315-2321 (2018).</li>
<li>Choo, H. -J., Saafir, T. B., Mkumba, L., Wagner, M. B., Jobe, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+calcium+and+reactive+oxygen+species+regulate+agonist-initiated+platelet+phosphatidylserine+exposure%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial calcium and reactive oxygen species regulate agonist-initiated platelet phosphatidylserine exposure.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (12), 2946-2955 (2012).</li>
<li>Jobe, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+for+the+mitochondrial+permeability+transition+pore+and+cyclophilin+D+in+platelet+activation+and+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Critical role for the mitochondrial permeability transition pore and cyclophilin D in platelet activation and thrombosis.</a> Blood. 111 (3), 1257-1265 (2008).</li>
<li>Leytin, V., Allen, D. J., Mykhaylov, S., Lyubimov, E., Freedman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin-triggered+platelet+apoptosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombin-triggered platelet apoptosis.</a> J Thromb Haemost. 4 (12), 2656-2663 (2006).</li>
<li>Lopez, J. J., Salido, G. M., Pariente, J. A., Rosado, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombin+induces+activation+and+translocation+of+Bid%2C+Bax+and+Bak+to+the+mitochondria+in+human+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombin induces activation and translocation of Bid, Bax and Bak to the mitochondria in human platelets.</a> J Thromb Haemost. 6 (10), 1780-1788 (2008).</li>
<li>Wolf, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calpain+functions+in+a+caspase-independent+manner+to+promote+apoptosis-like+events+during+platelet+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Calpain functions in a caspase-independent manner to promote apoptosis-like events during platelet activation.</a> Blood. 94 (5), 1683-1692 (1999).</li>
<li>Kim, O. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatal+dysfunction+and+disintegration+of+thrombin-stimulated+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Fatal dysfunction and disintegration of thrombin-stimulated platelets.</a> Haematologica. 104 (9), 1866-1878 (2019).</li>
<li>Schoenwaelder, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two+distinct+pathways+regulate+platelet+phosphatidylserine+exposure+and+procoagulant+function%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Two distinct pathways regulate platelet phosphatidylserine exposure and procoagulant function.</a> Blood. 114 (3), 663-666 (2009).</li>
<li>Abbasian, N., Millington-Burgess, S. L., Chabra, S., Malcor, J. -D., Harper, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Supramaximal+calcium+signaling+triggers+procoagulant+platelet+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Adv%22%5BJournal%5D)">Supramaximal calcium signaling triggers procoagulant platelet formation.</a> Blood Adv. 4 (1), 154-164 (2020).</li>
<li>Le, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+inner+activation+gate+controls+TMEM16F+phospholipid+scrambling%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">An inner activation gate controls TMEM16F phospholipid scrambling.</a> Nat Commun. 10 (1), 1846(2019).</li>
<li>Yang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TMEM16F+forms+a+Ca2%2B-activated+cation+channel+required+for+lipid+scrambling+in+platelets+during+blood+coagulation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">TMEM16F forms a Ca2+-activated cation channel required for lipid scrambling in platelets during blood coagulation.</a> Cell. 151 (1), 111-122 (2012).</li>
<li>Mattheij, N. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dual+mechanism+of+integrin+closure+in+procoagulant+platelets%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Dual mechanism of integrin closure in procoagulant platelets.</a> J Biol Chem. 288 (19), 13325-13336 (2013).</li>
<li>Liu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrially+mediated+integrin+%CE%B1iIb%CE%B23+protein+inactivation+limits+thrombus+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Mitochondrially mediated integrin αiIbβ3 protein inactivation limits thrombus growth.</a> J Biol Chem. 288 (42), 30672-30681 (2013).</li>
<li>van Kruchten, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Both+TMEM16F-dependent+and+TMEM16F-independent+pathways+contribute+to+phosphatidylserine+exposure+in+platelet+apoptosis+and+platelet+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Both TMEM16F-dependent and TMEM16F-independent pathways contribute to phosphatidylserine exposure in platelet apoptosis and platelet activation.</a> Blood. 121 (10), 1850-1857 (2013).</li>
<li>Goelz, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelets+express+adaptor+proteins+of+the+extrinsic+apoptosis+pathway+and+can+activate+caspase-8%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Platelets express adaptor proteins of the extrinsic apoptosis pathway and can activate caspase-8.</a> PLOS ONE. 16 (1), e0244848(2021).</li>
<li>Shlomovitz, I., Speir, M., Gerlic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flipping+the+dogma+-+phosphatidylserine+in+non-apoptotic+cell+death%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Commun+Signal%22%5BJournal%5D)">Flipping the dogma - phosphatidylserine in non-apoptotic cell death.</a> Cell Commun Signal. 17 (1), 139(2019).</li>
<li>Nadine, J. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coated+platelets+function+in+platelet-dependent+fibrin+formation+via+integrin+%CE%B1IIb%CE%B23+and+transglutaminase+factor+XIII%5BTitle%5D)+AND+%22Haematologica%22%5BJournal%5D)">Coated platelets function in platelet-dependent fibrin formation via integrin αIIbβ3 and transglutaminase factor XIII.</a> Haematologica. 101 (4), 427-436 (2016).</li>
<li>Michelson, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+activation+by+thrombin+can+be+directly+measured+in+whole+blood+through+the+use+of+the+peptide+GPRP+and+flow+cytometry%3A+Methods+and+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Coagul+Fibrinolysis%22%5BJournal%5D)">Platelet activation by thrombin can be directly measured in whole blood through the use of the peptide GPRP and flow cytometry: Methods and clinical applications.</a> Blood Coagul Fibrinolysis. 5 (1), 121-131 (1994).</li>
<li>Taylor, M. R., Couto, J. R., Scallan, C. D., Ceriani, R. L., Peterson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactadherin+%28formerly+BA46%29%2C+a+membrane-associated+glycoprotein+expressed+in+human+milk+and+breast+carcinomas%2C+promotes+Arg-Gly-Asp+%28RGD%29-dependent+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22DNA+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Lactadherin (formerly BA46), a membrane-associated glycoprotein expressed in human milk and breast carcinomas, promotes Arg-Gly-Asp (RGD)-dependent cell adhesion.</a> DNA Cell Biol. 16 (7), 861-869 (1997).</li>
<li>Andersen, M. H., Graversen, H., Fedosov, S. N., Petersen, T. E., Rasmussen, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+analyses+of+two+cellular+binding+domains+of+bovine+lactadherin%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Functional analyses of two cellular binding domains of bovine lactadherin.</a> Biochemistry. 39 (20), 6200-6206 (2000).</li>
<li>Tan, C. W., Bourcy, M., Pasalic, L., Chen, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+assessment+of+procoagulant+platelets+using+a+dithiol-reactive+probe+functional+disulfide+bonds%3A+Methods+and+protocols%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry assessment of procoagulant platelets using a dithiol-reactive probe functional disulfide bonds: Methods and protocols.</a> Methods Mol Biol. 1967, 305-321 (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>酸性クエン酸デキストロース(ACD)溶液(1000mL用)</td><td></td><td></td><td>三-クエン酸ナトリウム- &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;22 g クエン酸-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;8 g デキストロース-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;24.5 g 水-&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;容量を1000mLに構成します&nbsp;</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 タンパク質標識キット</td><td>Invitrogen</td><td>A10235</td><td></td></tr><tr><td>APC マウス 抗ヒト CD62P</td><td>BD ファーミンゲン</td><td>550888</td><td></td></tr><tr><td>ウシ プロトロンビン</td><td>Prolytix</td><td>BCP-1010</td><td></td></tr><tr><td>バッファー A (血小板調製)</td><td></td><td></td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;M.W&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;コンc. in 1X&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;100 mL 10X solutionの場合 HEPES&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;238.30&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;20 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;4.766 g NaCl&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;58.44&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;134 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;7.83 g KCl&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;74.55;>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;2.9 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;216.19 mg MgCl2&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;203.30&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;1 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;203.30 mg NaH2PO4&nbsp;&nbsp;&nbsp;156.01&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;0.34 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;53.04 mg NaHCO3&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;84 01&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;12 mM &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;pH を 6.2 に調整した後、1.01 g 水を 100 mL に 血小板調製の直前に 10X 溶液を Milli Q 水で 1:10 (v/v) 希釈して、次の を補充する必要がある 1X 溶液を得ます。&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;コンc. in 1X&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;1 mL 1X solution EGTA &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;1 mM &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;10 &mu; を加算します。L (1:100 v/v) 100 mM EGTA&nbsp; グルコース &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5 mM &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5 &mu; を加算します。L (1:200 v/v) 1 M グルコース PGE1 &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;3 &mu;M &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;3 &mu; を加算します。L (1:333 v/v) 1 mM PGE1 溶液</td></tr><tr><td>バッファー B (血小板調製物)</td><td></td><td></td><td>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;M.W&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;コンc. in 1X&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;100 mL 10X solutionの場合 HEPES&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;238.30&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;20 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;4.766 g NaCl&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;58.44&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;134 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;7.83 g KCl&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;74.55;>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;2.9 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;216.19 mg MgCl2&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;203.30&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;1 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;203.30 mg NaH2PO4&nbsp;&nbsp;&nbsp;156.01&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;0.34 mM&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;53.04 mg NaHCO3&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;84 01&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;12 mM &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;pH を 7.4 に調整した後、1.01 g 水を 100 mL に 10X 溶液 (v/v) で希釈し、血小板調製の直前に 10X 溶液を Milli Q 水で希釈します。この溶液には、次の &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;コンc. in 1X&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;1 mL 1X solution グルコース &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5 mM &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;5 &mu; を加算します。L (1:200 v/v) 1 M グルコース&nbsp;</td></tr><tr><td>CaCl2 (0.5 M) (For 50ml)</td><td></td><td></td><td>Molecular weight of CaCl2.2H2O = 147.02 3.675 g of CaCl2.2H2O を 50 ml Milli Q water</td></tr><tr><td>CellEvent Caspase-3/7 Detection Reagents Green</td><td>Invitrogen</td><td>C10423</td><td>Apoptosis Detection Reagent</td></tr><tr><td>Convulxin</td><td>Enzo Life Sciences</td><td>ALX-350-100</td><td></td></tr><tr><td>EDTA (0.5 M; pH 8) (For 100 mL)</td><td></td><td></td><td>EDTA Na2.2H2 Oの分子量:372.24g 18.612 gを秤量し、50 mlのMilli Q水に懸濁し、pH (pH~4) を確認します 攪拌しながら10N NaOHをゆっくりと加え、pH. を監視します EDTAは約pH 7で可溶化を開始し、pH 8. で完全に溶解します Milli Q水で100mlまで容量を構成します。</td></tr><tr><td>EGTA (100 mM; pH 7.4) (For 100 mL)</td><td></td><td></td><td>分子量:380.4 50 ml Milli Q 水に 3.804 g EGTA を加え、pH (pH~3) 10 N NaOH を攪拌しながら滴下し、pH EGTA が pH 7.0 (約) pH を 7.4 Milli Q 水</td></tr><tr><td>で 100 ml まで調整しますFITC Mouse Anti-Human PAC-1</td><td>BD</td><td>340507</td><td></td></tr><tr><td>FITC-IETD-FMK Caspase 8 (active) staining kit</td><td>Abcam</td><td>ab65614</td><td></td></tr><tr><td>Mitotracker Red CMXRos (mitochindria labeling dye)</td><td>Invitrogen</td><td>M7512</td><td>Stock= 1 mM (50 &micro;gを90&microに溶解。l DMSO) サブストック= 100 & マイクロ;M(10 &micro;lストック+ 90 &micro;l DMSO) 使用濃度= 500nM (0.5 & micro;100 & マイクロの l;l)</td></tr><tr><td>PE Annexin V</td><td>BD Pharmingen</td><td>560930</td><td></td></tr><tr><td>Prostaglandin E1</td><td>Sigma</td><td>P5515</td><td>Stock= 20 mM (1 mg を 141 & micro;L DMSO) サブストック= 1 mM (10 & micro;lストック+ 190 &micro;L DMSO) 使用濃度= 3 & マイクロ;M(3 &micro;L in 1 mL)</td></tr><tr><td>Rhod-2 AM</td><td>Invitrogen</td><td>R1244</td><td>Stock= 5 mM (1 mg を 178 & micro;L DMSO) サブストック= 100 & マイクロ;M(10 &micro;Lストック+90&マイクロ;L DMSO) 使用濃度= 500 nM (0.5 & micro;100 & マイクロの L;L)</td></tr><tr><td>ヒト血漿Sigma</td><td></td><td>T7572</td><td></td>由来トロンビン</tr></tbody></table>

壊死、アポトーシス、血小板活性化の特徴を示す凝固促進血小板の包括的解析

Comprehensive Analysis of Procoagulant Platelets Exhibiting Features of Necrosis, Apoptosis and Platelet Activation

活性化血小板の割合は、ホスファチジルセリン(PS)とP-セレクチンの両方の表面発現の特徴的な増加とともに「凝固促進剤」に変わり、PS曝露のみ陽性の「アポトーシス」血小板やP-セレクチン発現陽性の「凝集促進性」血小板と区別されます。その結果、トロンビンは、FITC-抗CD62P抗体とPE-アネキシンVの結合により、P-セレクチンとPSの発現が陽性の凝固促進剤血小板の割合を用量依存的に増加させることが分かりました(図2)。凝固促進性血小板の生成は、アゴニストによって誘発される細胞質カルシウムの上昇と、その結果として生じるシクロフィリンD(CypD)依存性ミトコンドリア透過性遷移細孔(mPTP)形成20に対する、ミトコンドリア内膜を横切る電気化学的勾配に沿ったミトコンドリアカルシウム流入18,19に依存する。一貫して、トロンビン誘発性凝固活性の増加は、Rhod-2およびMitotracker Red色素を使用して測定した...

Platelets circulating in the bloodstream are relatively quiescent but become "activated" upon encountering stimulants or "agonists" at the site of blood ...

comprehensive-analysis-procoagulant-platelets-exhibiting-features

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

ここでは、血管の炎症や生きたマウスにおける血栓形成の間に活性化内皮上の異血小板、好中球の相互作用を可視化する蛍光生体顕微鏡の実験手法を報告する。この顕微鏡技術は、血管疾患の分子メカニズムを研究することが、病態生理学的な条件下での薬理学的薬剤をテストするためにも役立ちます。...

生きたマウスにおける血管炎症及び血栓形成の間に活性化内皮上に異型血小板、好中球の相互作用のリアルタイムイメージング

この研究では、血小板の接着、広がり、および分泌の流れを調べるための蛍光顕微鏡検査に基づく方法を説明しています。この多目的プラットフォームは、血栓症および止血に関する機械的研究のための血小板機能の調査を可能にする。...

流れの下での血小板の脱顆粒および分泌の生きた細胞イメージング

凝固促進剤の血小板形成は、血栓症のリスク増加と相関しています。.ここに提示されるのは、ヒトの血液から洗浄された血小板を単離するための正確なプロトコルであり、凝固促進剤の血小板の特徴であるホスファチジルセリンおよび微小胞放出の曝露を定量化することを目的としています。...

ヒト精製血小板からのホスファチジルセリン曝露と微小胞放出の測定による凝固促進血小板の特性評価

フロー下での血小板機能を評価し、マイクロ流体デバイスを使用してシミュレートされた止血蘇生法をモデル化でき、これは外傷および輸血医療に応用できます。...

血小板機能の評価におけるマイクロ流体工学

血小板のマルチカラーフローサイトメトリーは、休止血小板、凝集血小板、凝固促進血小板、アポトーシス血小板など、古典的な血小板亜集団内の新しい血小板サブタイプを同定できます。これにより、さまざまな血小板アゴニストによって誘導されるさまざまな亜集団パターンを比較できます。ここでは、マルチカラーフローサイトメトリーパネルを確立するための手順について詳しく説明します。...

マルチカラーフローサイトメトリーによる血小板サブポピュレーションの解析

本研究は、せん断応力を用いて血液中の血栓形成を誘発し、多次元読み取りによって血栓を特徴付けるマイクロ流体アッセイを記述しています。このアッセイは血液サンプルの血栓促進傾向を測定できるため、疾患診断、薬剤開発、さらには血栓症に関連する基本的なメカニズム研究に役立ちます。...

血栓プロファイリングアッセイ:生体力学的血栓形成を包括的に特徴づけるためのマイクロ流体ベースのプラットフォーム

胸部腫瘍学のデータベースは、トランスレーショナルリサーチの目的のために臨床的および検査データのための包括的なリポジトリとして機能するように開発されました。データベースは、胸部腫瘍学の研究プログラムの中で並進がん研究者が配信されます。このデータベースは、他の癌のモデルだけでなく、他のヒトの疾患に適応可能です。...

包括的な胸部腫瘍学データベースの世代 - トランスレーショナルリサーチのためのツール

演説をサポートしている生理学的メカニズムの客観的な評価は、ALSを持つ人の疾患の発症と進行を監視し、臨床試験で治療効果を定量化するために必要とされる。このビデオでは、我々は臨床的集団における音声、モータの性能を定量化するための包括的な、インストルメンテーションベースのプロトコルを提示する。...

筋萎縮性側索硬化症における延髄機能障害の包括的評価（ALS）のためのプロトコル

癌細胞による内皮細胞単層の侵入を測定するリアルタイム電気インピーダンス基づく手法

RNA干渉（RNAi）は遺伝子ノックアウトよりも多くの利点を有し、広範に遺伝子機能研究のツールと​​して使用されています。...

癌における遺伝子機能を研究するDNAベクターベースのRNA干渉

学ぶ凝固促進血小板の包括的解析法。壊死、アポトーシス、活性化の特徴を示す血小板を流式細胞法で同定し、血栓症リスク評価と治療標的探索に応用する。

壊死、アポトーシス、血小板活性化の特徴を示す凝固促進血小板の包括的解析

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