マウス両側腎リンパ節摘出術

私たちは、腎リンパ節から腎臓への免疫細胞の輸送、および腎抗原から排出リンパ節への輸送を研究しています。私たちの外科的アプローチは、腎リンパ節を選択的に破壊しつつ、他のすべてのリンパ節をそのまま維持できるという独自の利点を持ち、耐容性の高い長期生存モデルを実現しています。このモデルが開発されたことで、腎リンパ節と免疫応答の寄与、そしてこれらのリンパ節の切除が免疫関連腎障害にどのように寄与するかを探ることができます。

まず、麻酔された動物を手術台に置き、軟膏を塗ります。左腕を上向きに、尾を下側に固定して、リラックスしつつも伸ばした姿勢を作り出します。毛を剃り、手術部位を3回消毒してください。

麻酔の深さを足の指のつまみで確認した後、脾臓のすぐ下の皮膚に約1センチの斜めの切開を入れます。これは最後の肋骨より約1センチ下です。鈍的解剖を用いて腹部と胸壁から皮膚を分離し、腹部内の脾臓を特定します。次に、脾臓のすぐ下の腹壁筋に1センチの切開を入れて腹膜腔に入ります。

左腎臓は脾臓のすぐ下、後腹壁に沿って滑らかな器官として特定します。2つの角度のある鉗子を使い、左腎臓の後ろを鈍く切り離して後腹膜にアクセスし、左腎を前内側方向に優しく反射させます。腎臓の後方、腎血管より上にある左腎リンパ節を囲む脂肪組織パッドを見つけます。

上方に位置する副腎、後方に大動脈、前内側に位置する乳蓋体を識別し避けてください。細かい鉗子を使い、リンパ節包の周囲を鈍く切り離して隣接する血管から切り離しつつ、角度のある鉗子で優しくカウンターテンションを与えます。細かい先端の直線鉗子を使ってリンパ節を上方から引っ込めます。

次に細いはさみで後内側付着部を鋭く切ります。止血を確認するためにその部位を調べてください。次に、腎臓を元の解剖学的位置に戻します。

腹壁を閉じ、その後6-0モノフィラメントポリプロピレン縫合糸でランニングステッチで皮膚を閉じます。傷口を塞ぐために滅菌外科用接着剤を塗りましょう。腎リンパ節の同定を良くするために、腎リンパ節摘出術前に両足の肉棒に無菌でろ過された5%エバンスブルー染料を10〜20マイクロリットル注射する方法があります。

注射から5分以内に、染料は腸骨リンパ管に沿って腎リンパ節に到達します。動物を左側側のデキュビトゥス(横側デキュビトゥス)位置に位置を変え、左側を下に向けます。右腕は上側に、尾側は下側にテープで固定し、リラックスしながらも伸ばした姿勢を保ちます。

次に、最後の肋骨のすぐ下に1センチの斜めの皮膚切開を入れます。左側より少し高い位置に位置します。鈍的解剖を用いて、腹部と胸壁から皮膚を分離します。次に腹壁の筋肉に1センチの切開を入れて腹膜腔にアクセスします。

右腎臓を特定します。これは後腹壁に沿って、肝臓のすぐ下に位置する滑らかな器官です。2つの角度のある鉗子を使い、右腎臓の後ろを鈍く切り離して後腹膜空間に侵入し、右腎を前内側方向に反射させます。腎臓の後方、腎血管より上方に位置する右腎リンパ節を取り巻く脂肪組織パッドを特定します。

リンパ節より上にある副腎を特定し、避けてください。次に、細かい鉗子を使ってリンパ節の包の周囲を鈍く切り離し、近傍の血管から分離しながら、角度のある鉗子で優しく逆引力をかけます。次に、細かい先端の直線鉗子でリンパ節を上方から引っ張り、細かいハサミで後内側付着部を鋭く切断します。

止血の確認のためにその部位を点検してください。最後に、右腎臓を解剖学的な位置に戻します。腹壁と皮膚を6-0モノフィラメントポリプロピレン縫合糸で2層に分けて縫い、切開部には無菌外科用接着剤を塗布します。

フローサイトメトリーでは、左5件と右5件の腎リンパ節摘出サンプルすべてでリンパ節摘出が成功し、それぞれ50%以上のCD45陽性生細胞が認められました。これは内臓脂肪対照群の2%未満と比べてのことです。CD45陽性細胞の定量では、左右腎リンパ節摘出サンプルと内臓脂肪組織で非常に有意な差が見られ、左右に有意差はありませんでした。