Name: 酵母細胞におけるストレス後生存を定量化するためのフローサイトメトリーと組み合わせた最適化されたLIVE/DEADアッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-29T14:50:00.000+00:00
Duration: 9 min 58 s
Description: 学ぶ フローサイトメトリーと蛍光色素を用いた酵母細胞のストレス後生存定量化法。酸化ストレス応答における細胞膜完整性の定量的評価と、生存・死滅・損傷細胞の再現性のある測定が可能です。

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<ol><li>Lourens-Hattingh, A., Viljoen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+survival+of+a+probiotic+yeast+in+dairy+products%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Growth and survival of a probiotic yeast in dairy products.</a> Food Res Int. 34 (9), 791-796 (2001).</li>
<li>Qiu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+tolerance+phenotype+of+industrial+yeast%3A+industrial+cases%2C+cellular+changes%2C+and+improvement+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Microbiol+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Stress tolerance phenotype of industrial yeast: industrial cases, cellular changes, and improvement strategies.</a> Appl Microbiol Biotechnol. 103 (16), 6449-6462 (2019).</li>
<li>Welsh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival%2C+persistence%2C+and+isolation+of+the+emerging+multidrugresistant+pathogenic+yeast+Candida+auris+on+a+plastic+health+care+surface%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Survival, persistence, and isolation of the emerging multidrugresistant pathogenic yeast Candida auris on a plastic health care surface.</a> J Clin Microbiol. 55 (10), 2996-3005 (2017).</li>
<li>Millard, P. J., Roth, B. L., Thi, H. P., Yue, S. T., Haugland, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+FUN1+family+of+fluorescent+probes+for+vacuole+labeling+and+viability+testing+of+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Environ+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Development of the FUN1 family of fluorescent probes for vacuole labeling and viability testing of yeasts.</a> Appl Environ Microbiol. 63 (7), 2897-2905 (1997).</li>
<li>WlochSalamon, D. M., Bem, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Types+of+cell+death+and+methods+of+their+detection+in+yeast+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Types of cell death and methods of their detection in yeast Saccharomyces cerevisiae.</a> J Appl Microbiol. 114 (2), 287-298 (2013).</li>
<li>Boulos, L., Prévost, M., Barbeau, B., Coallier, J., Desjardins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((LIVE%2FDEAD+BacLight%3A+Application+of+a+new+rapid+staining+method+for+direct+enumeration+of+viable+and+total+bacteria+in+drinking+water%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">LIVE/DEAD BacLight: Application of a new rapid staining method for direct enumeration of viable and total bacteria in drinking water.</a> J. Microbiol. Methods. 37 (1), 77-86 (1999).</li>
<li>Zhang, T., Fang, H. H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Saccharomyces+cerevisiae+viability+using+BacLight%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Lett%22%5BJournal%5D)">Quantification of Saccharomyces cerevisiae viability using BacLight.</a> Biotechnol Lett. 26 (12), 989-992 (2004).</li>
<li>Stocks, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+and+use+of+the+commercially+available+viability+stain%2C+BacLight%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">Mechanism and use of the commercially available viability stain, BacLight.</a> Cytometry A. 61A (2), 189-195 (2004).</li>
<li>Sun, S., Baryshnikova, A., Brandt, N., Gresham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+interaction+profiles+of+regulatory+kinases+differ+between+environmental+conditions+and+cellular+states%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Syst+Biol%22%5BJournal%5D)">Genetic interaction profiles of regulatory kinases differ between environmental conditions and cellular states.</a> Mol Syst Biol. 16 (5), e9167(2020).</li>
<li>Li, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allicin+shows+antifungal+efficacy+against+Cryptococcus+neoformans+by+blocking+the+fungal+cell+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Allicin shows antifungal efficacy against Cryptococcus neoformans by blocking the fungal cell membrane.</a> Front Microbiol. 13, 1012516(2022).</li>
<li>Jin, Y., Zhang, T., Samaranayake, Y., Fang, H. H. P., Yip, H. K., Samaranayake, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+new+probes+and+stains+for+improved+assessment+of+cell+viability+and+extracellular+polymeric+substances+in+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Mycopathologia%22%5BJournal%5D)">The use of new probes and stains for improved assessment of cell viability and extracellular polymeric substances in Candida albicans biofilms.</a> Mycopathologia. 159 (3), 353-360 (2005).</li>
<li>Bojsen, R., Regenberg, B., Folkesson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Saccharomyces+cerevisiae+biofilm+tolerance+towards+systemic+antifungals+depends+on+growth+phase%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Saccharomyces cerevisiae biofilm tolerance towards systemic antifungals depends on growth phase.</a> BMC Microbiol. 14, 305(2014).</li>
<li>Ryan, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activity+of+potent+and+selective+host+defense+peptide+mimetics+in+mouse+models+of+oral+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Activity of potent and selective host defense peptide mimetics in mouse models of oral candidiasis.</a> Antimicrob Agents Chemother. 58 (7), 3820-3827 (2014).</li>
<li>Chudzik, B., Koselski, M., Czuryło, A., Trębacz, K., Gagoś, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+look+at+the+antibiotic+amphotericin+B+effect+on+Candida+albicans+plasma+membrane+permeability+and+cell+viability+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Biophys.+J.+%28EBJ%29%22%5BJournal%5D)">A new look at the antibiotic amphotericin B effect on Candida albicans plasma membrane permeability and cell viability functions.</a> Eur. Biophys. J. (EBJ). 44 (1-2), 77-90 (2015).</li>
<li>Roscetto, E., Contursi, P., Vollaro, A., Fusco, S., Notomista, E., Catania, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+and+antibiofilm+activity+of+the+first+cryptic+antimicrobial+peptide+from+an+archaeal+protein+against+Candida+spp.+clinical+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Antifungal and antibiofilm activity of the first cryptic antimicrobial peptide from an archaeal protein against Candida spp. clinical isolates.</a> Sci Rep. 8 (1), 17570(2018).</li>
<li>Tang, H., Liang, J., He, B. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+LIVE%2FDEAD+assay+using+flow+cytometry+to+quantify+poststress+and+antifungaltreatment+survival+in+diverse+yeasts%5BTitle%5D)+AND+%22BioRiv%22%5BJournal%5D)">An optimized LIVE/DEAD assay using flow cytometry to quantify poststress and antifungaltreatment survival in diverse yeasts.</a> BioRiv. , (2025).</li>
<li>Stiefel, P., SchmidtEmrich, S., ManiuraWeber, K., Ren, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+aspects+of+using+bacterial+cell+viability+assays+with+the+fluorophores+SYTO9+and+propidium+iodide%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Critical aspects of using bacterial cell viability assays with the fluorophores SYTO9 and propidium iodide.</a> BMC Microbiol. 15 (1), 36(2015).</li>
<li>Rego, A., Ribeiro, A., CôrteReal, M., Chaves, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+yeast+regulated+cell+death%3A+Trespassing+the+point+of+no+return+to+loss+of+plasma+membrane+integrity%5BTitle%5D)+AND+%22Apoptosis%22%5BJournal%5D)">Monitoring yeast regulated cell death: Trespassing the point of no return to loss of plasma membrane integrity.</a> Apoptosis. 27 (9), 778-786 (2022).</li>
<li>CarmonaGutierrez, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+and+recommendations+on+yeast+cell+death+nomenclature%5BTitle%5D)+AND+%22Microbial+Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines and recommendations on yeast cell death nomenclature.</a> Microbial Cell. 5 (1), 4-31 (2018).</li>
<li>Miller, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+colony+size+to+measure+fitness+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Using colony size to measure fitness in Saccharomyces cerevisiae.</a> PLoS One. 17 (10), e0271709(2022).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>96井戸深部井戸板</td><td>サーモ・フィッシャー</td><td>278606</td><td>NUNC 96</td></tr><tr><td>プレートリーダー付きAttune NxTフローサイトメーター</td><td>サーモフィッシャー A24858</td><td>A24858</td><td>オートサンプラー(A42901)</td></tr><tr><td>Candida glabrata</td><td></td><td></td><td>CG99、臨床分離株由来の実験株(Cormack &Falkow, 1999)</td></tr><tr><td>FungaLight 酵母 LIVE/DEAD キット</td><td>サーモフィッシャー A24858</td><td>L34952</td><td>SYTO 9(3.34 mM)およびプロピジウム・ヨウ化物(20 mM)を含みます。これら2つの部品は、さまざまなベンダーから別途購入することも可能です。</td></tr><tr><td>過酸化水素</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>ライカ コンフォーカルSP8顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>TCS SP8 X</td><td></td></tr><tr><td>塩化ナトリウム</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>S9888</td><td>滅菌済み0.85%NaCl溶液の製造に使用されました</td></tr><tr><td>アミノ酸を含まない酵母窒素塩基</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>Y0626</td><td>2%のグルコースとアミノ酸の混合物を用いた合成コンプリートメディアの製造に使用されました</td></tr></tbody></table>

酵母細胞におけるストレス後生存を定量化するためのフローサイトメトリーと組み合わせた最適化されたlive/deadアッセイ

An Optimized LIVE/DEAD Assay Coupled with Flow Cytometry for Quantifying Post-Stress Survival in Yeast Cells

酵母細胞におけるストレス後生存を定量化するためのフローサイトメトリーと組み合わせた最適化されたLIVE/DEADアッセイ

Quantifying survival is a common and critical task in yeast research. LIVE/DEAD stains based on plasma membrane integrity provide a rapid and ...

an-optimized-livedead-assay-coupled-with-flow-cytometry-for

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

分裂酵母の定量的なライブセル蛍光-顕微鏡解析

出典: Chapman, I. J., et al., Molecular Probe Optimization to Determine Cell Mortality in a photosynthetic organism (Microcystis aeruginosa) using Flow Cytometry. J. Vis. 経験。...

フローサイトメトリーを用いた Microcystis aeruginosa の生存率解析

この資料は、調査するホタルルシフェラーゼ-GFP融合タンパク質の使用を記載...

のリフォールディング監視タンパク質を結合アッセイ<em&gt;サッカロミセス·セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）</em

フローサイトメトリーおよび顕微鏡検査に基づいて、二つの相補的な方法は、酵母におけるMAPK経路の活性化によって誘導される遺伝子発現の動態を、単一細胞レベルで、定量化を可能にする提示されている。...

シングル酵母細胞中のMAPK誘導発現の時間的な定量

微生物集団は、全体的な動作を決定することができる実質的な細胞の不均一性を、含まれています。フローサイトメトリーを介して、分子プローブ分析は、細胞の生理的状態を決定することができ、しかし、そのアプリケーションは、種間で変化します。本研究では、偽陽性の結果を過小評価または記録することなく、正確にシアノバクテリアの集団内の細胞の死亡率を決定するためのプロトコルを提供します。...

光合成生物における細胞死を決定するための分子プローブの最適化（<em&gt;アオコ緑膿菌</em&gt;）フローサイトメトリーを使用して

代謝の研究は、免疫学の研究にますます関連性を持つようになっています。ここでは、マウス脾細胞、Tリンパ球、Bリンパ球における解糖系とミトコンドリア呼吸を測定するための最適化された方法を紹介します。...

リンパ球における解糖およびミトコンドリア呼吸を分析するために最適化されたプロトコル

蛋白質の集合は、細胞の酸化ストレスを引き出します。このプロトコルでは、アミロイド蛋白質の細胞内の状態およびフローサイトメトリーを使用して、それらに関連付けられている酸化ストレスを監視する方法について説明します。アミロイド β...

酵母細胞の酸化ストレスに対するタンパク質凝集の影響の評価

本稿では、S.セレビシエ細胞とHEK293T細胞の両方でタンパク質自己集合を定量するFRETベースのフローサイトメトリープロトコルについて説明する。...

フローサイトメトリーによる生体内におけるタンパク質自己集合体の検出と特性特性

酵母増殖型は、マイクロコロニーに成長する固定化細胞の高度に平行なタイムラプスイメージングを通じて正確に測定される。同時に、ストレス耐性、タンパク質発現、タンパク質の局在化を監視し、統合データセットを生成して、環境と遺伝的の違い、およびイソジェニック細胞間の遺伝子発現不均一性を研究し、成長を調節することができます。...

成長と遺伝子発現の不均一性を測定するマイクロコロニーのハイスループットライブイメージング

ここでは、酵母表面表示基質を酵素修飾アッセイに使用するためのプロトコールを紹介します。このプラットフォームは、代表的な酵素修飾アッセイとして、チロシンホスファターゼSHP-2の基質の1つに対する脱リン酸化活性の分析を使用して実証されました。...

酵母表面表示タンパク質の酵素修飾およびフローサイトメトリー評価

学ぶ フローサイトメトリーと蛍光色素を用いた酵母細胞のストレス後生存定量化法。酸化ストレス応答における細胞膜完整性の定量的評価と、生存・死滅・損傷細胞の再現性のある測定が可能です。

酵母細胞におけるストレス後生存を定量化するためのフローサイトメトリーと組み合わせた最適化されたLIVE/DEADアッセイ

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