Name: 修正スイスロール技術を用いたマウス胃筋層の空間マッピング強化 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 18 s
Description: 学ぶマウス胃全体の免疫染色法。スイスロール技術を応用し、胃底・体部・幽門部を単一の凍結切片に包埋し、空間的配向を維持しながら高品質なイメージングを実現する革新的な組織学的手法です。

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<ol><li>Chaudhry, S. R., Liman, M. N. P., Omole, A. E., Peterson, D. C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aChaudhry%2C+SR+%22Anatomy%2C+abdomen+and+pelvis%3A+Stomach%22">Anatomy, abdomen and pelvis: Stomach</a>. , StatPearls. (2025).</li>
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<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mapping+and+tracing+Grem1%28%2B%29+stromal+cells+in+an+Apc+%28Min%2F%2B%29+mouse+utilizing+cryopreserved+intestinal+sections+prepared+via+modified+Swiss-roll+technique%5BTitle%5D)+AND+%22iScience%22%5BJournal%5D)">Mapping and tracing Grem1(+) stromal cells in an Apc (Min/+) mouse utilizing cryopreserved intestinal sections prepared via modified Swiss-roll technique.</a> iScience. 27 (11), 111173(2024).</li>
<li>Izbeki, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+Kitlow+progenitors%2C+reduced+stem+cell+factor+and+high+oxidative+stress+underlie+gastric+dysfunction+in+progeric+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Loss of Kitlow progenitors, reduced stem cell factor and high oxidative stress underlie gastric dysfunction in progeric mice.</a> J Physiol. 588 (Pt 16), 3101-3117 (2010).</li>
<li>Hayashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperglycemia+increases+interstitial+cells+of+Cajal+via+MAPK1+and+MAPK3+signaling+to+ETV1+and+KIT%2C+leading+to+rapid+gastric+emptying%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hyperglycemia increases interstitial cells of Cajal via MAPK1 and MAPK3 signaling to ETV1 and KIT, leading to rapid gastric emptying.</a> Gastroenterology. 153 (2), 521-535.e20 (2017).</li>
<li>Gao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor+1alpha+stabilization+restores+epigenetic+control+of+nitric+oxide+synthase+1+expression+and+reverses+gastroparesis+in+female+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor 1alpha stabilization restores epigenetic control of nitric oxide synthase 1 expression and reverses gastroparesis in female diabetic mice.</a> Gastroenterology. 165 (6), 1458-1474 (2023).</li>
<li>Kuro-o, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+of+the+mouse+klotho+gene+leads+to+a+syndrome+resembling+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mutation of the mouse klotho gene leads to a syndrome resembling ageing.</a> Nature. 390 (6655), 45-51 (1997).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>#5SF 鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11252-00</td><td></td></tr><tr><td>牛血清アルブミン&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>ColdVision MC-LS LED 光源</td><td>ショット</td><td>MC-LS</td><td></td></tr><tr><td>コンフォーカルソフトウェア&nbsp;</td><td>ニコン</td><td>ニコン NIS-Elements イメージングソフトウェア</td><td></td></tr><tr><td>クライオシールXYL</td><td>エプレディダ</td><td>9312-4</td><td></td></tr><tr><td>DAPI(4フィート、6-ジアミジノ-2-フェニリンドール、ディラクテート)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>解剖皿、大</td><td>リビングシステム&nbsp;楽器編成</td><td>SKU:DD-90</td><td></td></tr><tr><td>ドンキーアンチゴート AF647 pAb</td><td>ライフ・テクノロジーズ</td><td>A21447</td><td>ロット:1739289 RRID:AB_2535864</td></tr><tr><td>ドンキーアンチマウス AF555 pAb</td><td>ライフ・テクノロジーズ</td><td>A31570</td><td>ロット:1774719 RRID:AB_2536180</td></tr><tr><td>ドンキーアンチラビット AF488 pAb</td><td>ライフ・テクノロジーズ</td><td>A21206</td><td>ロット:2668665 RRID:AB_2535792</td></tr><tr><td>E-カダリン(1:400希釈)</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>610181</td><td>ロット:25510 RRID:AB_397580</td></tr><tr><td>イオシン</td><td>ELITechGroup(エリタイックグループ)</td><td>$SS-071C</td><td></td></tr><tr><td>エポキシコーティング鉗子</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>11210-10</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>459828-4L</td><td></td></tr><tr><td>フレックスチューブ 1.5 mL</td><td>エッペンドルフ</td><td>22364111</td><td></td></tr><tr><td>ガーゼスポンジ</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td>22-362-178</td><td></td></tr><tr><td>硬化ファインシザー</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>14090-09</td><td></td></tr><tr><td>ヘマトキシリン</td><td>エプレディア</td><td>7211</td><td></td></tr><tr><td>KIT(0.2 & micro;g/mL;1:1000の希釈)</td><td>R&Dシステムズ</td><td>AF1356</td><td>ロット:IEO0217101 リッド:AB_354750</td></tr><tr><td>レンズクリーニング用溶液 1オンス スプレーボトル</td><td>ニコン</td><td>77013066</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡カバーガラス</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>12541016</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライド</td><td>カーディナルヘルス</td><td>M6133A</td><td></td></tr><tr><td>ミニチュティアンピン</td><td>ファインサイエンスツール</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>MYH11(1:400希釈)</td><td>バイオメディカルテクノロジー</td><td>BT-562</td><td>リッド:AB_10013421</td></tr><tr><td>ネイルポリッシュ</td><td>罪深い色</td><td>7.33855E+11</td><td></td></tr><tr><td>針 30 G x 1/2インチ & nbsp;</td><td>BD バイオサイエンス</td><td>305106</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>158127-500G</td><td></td></tr><tr><td>パーソナ・シングルエッジブレード</td><td>ザ・レイザーブレード社</td><td>76247-652</td><td></td></tr><tr><td>ReadyProbesマウス間IgGブロッキングソリューション(30倍)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>R37621</td><td>ロット:3226230</td></tr><tr><td>スローフェイドダイヤモンドアンチフェードマウント(マウンティングメディア)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>S36972</td><td></td></tr><tr><td>StainTray 10スライド染色システム</td><td>Simport Scientific</td><td>M918-2</td><td></td></tr><tr><td>ステレオ顕微鏡 0.8x-5x</td><td>ニコン</td><td>SMZ645</td><td></td></tr><tr><td>スクロース&nbsp;</td><td>シグマ・オルドリッチ</td><td>S9378-1KG</td><td></td></tr><tr><td>サーフェスアンプ X-100(トライトンX)</td><td>サーモフィッシャー・サイエンティフィック</td><td>28314</td><td></td></tr><tr><td>TMEM16A(ANO1:1:400希釈)</td><td>アブカム</td><td>ab53212&nbsp;</td><td>ロット:GP3295656-1 RRID:AB_883075</td></tr><tr><td>トランスファーピペット</td><td>ファルコン</td><td>357575</td><td></td></tr><tr><td>TUBB3(1:400希釈)</td><td>細胞シグナル伝達技術</td><td>4466</td><td>ロット:5 RRID: AB_1904176</td></tr><tr><td>キシレン&nbsp;</td><td>フィッシャー・サイエンティフィック</td><td>X3P-1GAL</td><td>ロット206238</td></tr></tbody></table>

修正スイスロール技術を用いたマウス胃筋層の空間マッピング強化

Enhanced Spatial Mapping of Mouse Gastric Muscle Layers Using a Modified Swiss Roll Technique

新しい方法を用いると、マウスの胃スイスロールは胃の主要3領域すべて(眼底、小体、肛門)に加え、食道と十二指腸の一部を1つのセクションに含みました。胃全体を一つのセクションに含めることで、包括的な地域分析が可能になります(図1)。胃のスイスロール全体画像にヘマトキシリンおよびエオシン(H&amp;E)染色を施したことで、すべての領域で胃構造が良好に保存されており、粘膜層、粘膜下層、筋層の明確な可視化が可能となりました(図3)。図4は、カハール間質細胞(ICC;相性腸運動の基盤となるリズム的緩波を生成するペースメーカー細胞;KITおよびANO1で識別)、腸ニューロン(消化管運動を調整する腸神経系のニューロン;TUBB3免疫染色で識別)、および核核(DAPI)の代表的な免疫蛍光染色を示しています。胃粘膜では、KITは以前に報告されたようにパネス細胞やゴブレット細胞でも発現しています。ANO1は胃上皮、特に眼底の柱状上皮細胞で高発現しており、塩化物輸送および粘膜分泌における役割と一致しています11。さらに、TUBB3はヒトプロテインアトラス12,13のデータによると、特定の胃内分泌細胞や粘液分泌細胞でも発現しています。図5は、MYH11によって標識された平滑筋細胞、E-カデリンによって標識された胃粘膜上皮細胞、そしてKTによって標識されたICCの代表的な免疫蛍光染色を示しています。MYH11は胃粘膜の筋線維芽細胞でも発現しており、以前に報告されている14。これらの免疫蛍光結果を合わせることで、当プロトコルが組織構造を保存していることが確認されます。
<img alt="図1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig1.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 1"> 
図1:マウスの胃の「スイスロール」の冷凍解剖準備。 (A) 胃全体を、組織の完全性を保つために、摘出直後に冷たいリン酸塩緩衝生理食塩水(PBS)を充填した黒いシリコーンコーティングの解剖皿に入れます。(B) 胃は十二指腸の中央に開いています。(C)腹部を優しく伸ばし、皿に固定して過度な緊張をかけずに平らに寝かせる。組織に沿って赤い破線が引かれ、転がりやすくするためにトリミングすべき箇所を示します。(D) 開いた固定された胃を、PBS湿らせたフィルター紙の上に置き、コンパクトな構成に巻く準備を行います。赤い矢印は胃の回転方向を示しています。(E) 組織片は最適切断温度(O.C.T.)の化合物に埋め込まれ、ドライアイス上で凍結されて冷凍し、冷凍解剖の準備を行います。(F) 凍結ブロックは−80°Cで保存され、5μm厚さで冷凍切断され、下流分析に使用されます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。</a>
<img alt="図2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig2.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 2"> 
図2:Zスタックイメージング中のND取得セットアップおよび飽和可視化。 (A) 多チャネルスペクトルイメージング用に共焦点イメージングソフトウェアで設定されたレーザーおよび検出器の設定。4種類の蛍光色素が使用されます:4′,6-ジアミジノ-2-フェニルリンドール(DAPI)、Alexa Fluor 488(AF488)、Alexa Fluor 555(AF555)、Alexa Fluor 647(AF647)。それぞれに対応する励起レーザーと発光検出器と組み合わされています。スペクトルグラフは励起曲線と放出曲線を示し、クロストークを最小限に抑え信号検出を最適化するための調整を可能にします。(B) 各蛍光分子ごとに露出設定を個別に調整し、ピクセル彩度を避け高輝度領域のディテールを保持します。(C) 大規模な画像取得設定(例:6×6フィールド)により、胃のスイスロール全体を可視化すること;画像フィールドのサイズは、巻き上げた組織の大きさやコンパクトさに応じて調整する必要があります。(D) ND取得ウィンドウでZスタックパラメータ設定を表示します。Z範囲は胃筋の上下位置を選択し、組織の全深さを把握するために8つのステップが設定され、3次元(3D)解析を行います。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。</a>
<img alt="図3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig3.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 3"> 
図3:ヘマトキシリンとエオシン染色されたマウス胃のスイスロールの画像。 タイルスキャンは、生後8週間のメスのC57BL/6Jマウスの胃のスイスロール全体を可視化できることを示しています。主な解剖学的領域は食道(赤い点線)、下部食道括約筋(紫色の点線)、眼底(黒い点線)、小体(青い点線)、肛門(緑の点線)、十二指腸(オレンジの点線)などが示されています。スケールバー:1000μm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版はこちらをクリックしてください。</a>
<img alt="図4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig4.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 4"> 
図4:マウスの胃のスイスロールの共焦点画像:ANO1、KIT、TUBB3。 上部パネル:8週間齢のメスC57BL/6Jマウスの胃スイスロールの代表的な縫合共焦点画像で、ANO1(緑)、KIT(シアン)、TUBB3(黄色)、核(青)の免疫染色を示しています。胃底、体、門を含む全ての回転した胃が視覚化されます。スケールバー:1000μm。 下部パネル:上部パネルの白い破線のボックスで囲まれた領域の拡大図で、カハールの間質細胞(ANO1+ およびKIT+;黄色の矢印)および腸内ニューロン(TUBB3⁺;赤い矢印)の細胞詳細を強調。スケールバー:100μm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版はこちらをクリックしてください。</a>
<img alt="図5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/69673/69673fig5.jpg" data-altupdatedat="1783400419000" data-alt="Figure 5"> 
図5:マウスの胃全体のスイスロールの共焦点画像:MYH11、KIT、E-カデリン。 上部パネル:生後8週間のメスのC57BL/6Jマウスの胃スイスロールの代表的な縫合共焦点画像で、MYH11(緑)、KIT(シアン)、E-カデリン(黄色)、核(青)の免疫染色を示しています。胃底、体、門を含む全ての回転した胃が視覚化されます。スケールバー:1000μm。 下部パネル:上部パネルの白い線のボックスで囲まれた拡大された地域のビュー。白い点線は粘膜上皮(E-カデリン)と筋層(MYH11)を示しています。白い矢印はカハール間質細胞(ICC)を示すKIT+ 。スケールバー:100μm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/69673/69673fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版はこちらをクリックしてください。</a>

Spatial "omics" technologies provide unprecedented opportunities to study the biology and interactions of individual cells of the gastric neuromuscular ...

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Research

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Medicine

医学

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