Name: 生体内での老化マーカーの空間評価のための多重免疫蛍光アッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-07-24T12:25:00.000+00:00
Duration: 9 min 38 s
Description: 学ぼう、多重免疫蛍光法を用いたヒト組織における老化細胞の空間評価プロトコル。単一組織切片で複数バイオマーカーを検出し、デジタル病理ソフトウェアで定量的・空間解析を行う方法です。

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<ol><li>Gorgoulis, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence%3A+Defining+a+Path+Forward%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence: Defining a Path Forward.</a> Cell. 179 (4), 813-827 (2019).</li>
<li>Hernandez-Segura, A., Nehme, J., Demaria, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hallmarks+of+cellular+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Hallmarks of cellular senescence.</a> Trends Cell Biol. 28 (6), 436-453 (2018).</li>
<li>De Souza, N., Zhao, S., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+protein+imaging+in+tumour+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Multiplex protein imaging in tumour biology.</a> Nat Rev Cancer. 24 (3), 171-191 (2024).</li>
<li>Teo, Y. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch+signaling+mediates+secondary+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">Notch signaling mediates secondary senescence.</a> Cell Rep. 27 (3), 997-1007 (2019).</li>
<li>Ogrodnik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+minimal+information+on+cellular+senescence+experimentation+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Guidelines for minimal information on cellular senescence experimentation in vivo.</a> Cell. 187 (16), 4150-4175 (2024).</li>
<li>Sharpless, N. E., Sherr, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forging+a+signature+of+in+vivo+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Forging a signature of in vivo senescence.</a> Nat Rev Cancer. 15 (7), 397-408 (2015).</li>
<li>Schürch, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordinated+cellular+neighborhoods+orchestrate+antitumoral+immunity+at+the+colorectal+cancer+invasive+front%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Coordinated cellular neighborhoods orchestrate antitumoral immunity at the colorectal cancer invasive front.</a> Cell. 182 (5), 1341-1359.e19 (2020).</li>
<li>Lin, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+multiplexed+immunofluorescence+imaging+of+human+tissues+and+tumors+using+t-CyCIF+and+conventional+optical+microscopes%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Highly multiplexed immunofluorescence imaging of human tissues and tumors using t-CyCIF and conventional optical microscopes.</a> eLife. 7, e31657(2018).</li>
<li>Tomimatsu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Precise+immunofluorescence+cancelling+for+highly+multiplexed+imaging+to+capture+specific+cell+states%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Precise immunofluorescence cancelling for highly multiplexed imaging to capture specific cell states.</a> Nat Commun. 15, 3657(2024).</li>
<li>Kiessling, P., Kuppe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+multi-omics%3A+novel+tools+to+study+the+complexity+of+cardiovascular+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Med%22%5BJournal%5D)">Spatial multi-omics: novel tools to study the complexity of cardiovascular diseases.</a> Genome Med. 16 (1), 14(2024).</li>
<li>Chaib, S., Tchkonia, T., Kirkland, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+senescence+and+senolytics%3A+the+path+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Cellular senescence and senolytics: the path to the clinic.</a> Nat Med. 28, 1556(2022).</li>
<li>Freund, A., Laberge, R. M., Demaria, M., Campisi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lamin+B1+loss+is+a+senescence-associated+biomarker%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">Lamin B1 loss is a senescence-associated biomarker.</a> Mol Biol Cell. 23 (11), 2066-2075 (2012).</li>
<li>Eng, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+framework+for+multiplex+imaging+optimization+and+reproducible+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Commun+Biol%22%5BJournal%5D)">A framework for multiplex imaging optimization and reproducible analysis.</a> Commun Biol. 5 (1), 1-11 (2022).</li>
<li>Wallis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence-associated+morphological+profiles+%28SAMPs%29%3A+an+image-based+phenotypic+profiling+method+for+evaluating+inter-+and+intra-model+heterogeneity+of+senescence%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+%28Albany+NY%29%22%5BJournal%5D)">Senescence-associated morphological profiles (SAMPs): an image-based phenotypic profiling method for evaluating inter- and intra-model heterogeneity of senescence.</a> Aging (Albany NY). 14, 1-27 (2022).</li>
<li>González-Gualda, E., Baker, A. G., Fruk, L., Muñoz-Espín, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+guide+to+assessing+cellular+senescence+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+J%22%5BJournal%5D)">A guide to assessing cellular senescence in vitro and in vivo.</a> FEBS J. 288 (1), 56-80 (2021).</li>
<li>O’Sullivan, E. A., Wallis, R., Mossa, F., Bishop, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+paradox+of+senescent-marker+positive+cancer+cells%3A+challenges+and+opportunities%5BTitle%5D)+AND+%22NPJ+Aging%22%5BJournal%5D)">The paradox of senescent-marker positive cancer cells: challenges and opportunities.</a> NPJ Aging. 10 (1), 1-11 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>30% 過酸化水素 (H2O2)</td><td>Merck</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>抗原マスク解除液1 (H3300) (ARS1)</td><td>Vector Labs.</td><td>H-3300</td><td>12.5 mlの抗原マスク解除液と237.5 mlのddH2Oで調製</td></tr><tr><td>抗原マスク解除液2 (ARS2)</td><td>Sigma</td><td>T6066 / E5134</td><td>10倍ストックを調製する（12.9 gのTrizmaベース、3.7 gのEDTA、5 mLのTween 20、995 mLのddH2O）。&nbsp;</td></tr><tr><td>ウシ血清アルブミン (BSA)</td><td>Merck</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>バルク脱蝋液</td><td>Leica</td><td>AR9222</td><td></td></tr><tr><td>バルクエピトープ回復1 (ER1)</td><td>Leica</td><td>AR9961</td><td></td></tr><tr><td>バルクエピトープ回復 (ER2)</td><td>Leica</td><td>AR9640</td><td></td></tr><tr><td>バルク洗浄液</td><td>Leica</td><td>AR9590</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Merck</td><td>D3571</td><td></td></tr><tr><td>二重蒸留水 (ddH20)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Merck</td><td>472301</td><td></td></tr><tr><td>ロバ血清</td><td>Merck</td><td>D9663</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Merck</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>グリセロール</td><td>Merck</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>リン酸塩緩衝生理食塩水 (PBS)</td><td>Merck</td><td>BP399</td><td></td></tr><tr><td>プロピルガレート</td><td>Merck</td><td>P3130</td><td></td></tr><tr><td>炭酸ナトリウム</td><td>Merck</td><td>S5761</td><td></td></tr><tr><td>トリトン X 100</td><td>Merck</td><td>H5141</td><td></td></tr><tr><td>Trizmaベース</td><td>Merck</td><td>T6066</td><td></td></tr><tr><td>Tween20</td><td>Merck</td><td>P1379</td><td></td></tr><tr><td>その他消耗品または機器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Decloaking チャンバー</td><td>BioCare</td><td>DC2012</td><td></td></tr><tr><td>スチームストリップ</td><td>BioCare</td><td>613QC</td><td></td></tr><tr><td>Bond RXm 自動スライド染色装置</td><td>Leica</td><td>HIS2330</td><td>自動スライド染色装置として参照</td></tr><tr><td>Cell DIVE</td><td>Leica</td><td>29429159</td><td>多重蛍光イメージングシステムとして参照</td></tr><tr><td>Click Well スライドホルダー</td><td>Leica</td><td>29463259</td><td>Well Coverslipless スライドホルダーとして参照</td></tr><tr><td>抗体リスト</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD31 (Pecam-1)</td><td>Cell Signalling</td><td>61255</td><td>クローン: 89C2 蛍光色素: AF555 希釈: 1 in 50</td></tr><tr><td>CD8a</td><td>BioLegend</td><td>372906</td><td>クローン: C8/144B 蛍光色素: Alexa 647 希釈: 1 in 100</td></tr><tr><td>CDKN2A/p16</td><td>Santa Cruz</td><td>sc-56330 AF647</td><td>クローン: jc8 蛍光色素: Alexa 647 希釈: 1 in 200</td></tr><tr><td>FOXP3</td><td>BioLegend</td><td>320114</td><td>クローン: 206D 蛍光色素: Alexa 647 希釈: 1 in 50</td></tr><tr><td>ケラチン 15</td><td>Abcam</td><td>ab194065</td><td>クローン: EPR1614Y 蛍光色素: AF_488 希釈: 1 in 200</td></tr><tr><td>Ki67</td><td>Abcam</td><td>ab215226</td><td>クローン: EPR3610 蛍光色素: AF555 希釈: 1 in 50</td></tr><tr><td>ラミン B1</td><td>Abcam</td><td>ab194106</td><td>クローン: EPR8985(B) 蛍光色素: AF_488 希釈: 1 in 100</td></tr><tr><td>PanCK_AE1/AE3</td><td>Thermofisher</td><td>53-9003-82</td><td>クローン: AE1/AE3 蛍光色素: AF_488 希釈: 1 in 100</td></tr><tr><td>SMA</td><td>R&amp;D systems</td><td>IC1420S</td><td>クローン: 1A4 蛍光色素: Alexa 750 希釈: 1 in 100</td></tr><tr><td>ビメンチン</td><td>Cell Signalling</td><td>69227</td><td>クローン: D21H3 蛍光色素: Alexa 750 希釈: 1 in 100</td></tr></tbody></table>

生体内での老化マーカーの空間評価のための多重免疫蛍光アッセイ

Multiplexed Immunofluorescence Assay for Spatial Assessment of Senescence Markers in vivo

Multiplexed immunofluorescence (IF) staining represents a step-change in sophistication over traditional IF imaging allowing sequential detection of ...

multiplexed-immunofluorescence-assay-for-spatial-assessment

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

細胞老化は、慢性加齢病理の発症における重要な因子である。老化細胞を標的とする治療薬の同定は、健康な老化を延長する約束を示す。ここでは、単一細胞における老化関連β-ガラクトシダーゼ活性の測定に基づくセノセラピューティクスの同定をスクリーニングするための新規アッセイを提示する。...

セノ治療薬同定のためのSA-β-ガラクトーシダーゼベーススクリーニングアッセイ

凍結組織に対してマルチスペクトルイメージングを行う迅速な染色法について述べます。...

凍結組織切片の多スペクトル蛍光イメージングの迅速な方法

このプロトコルはmultilabel FISHおよび蛍光性のIHC信号を達成することを目標に、新しい凍結および固定マウス頭脳セクションの蛍光性in situ の交配(魚)および蛍光性のimmunohistochemistry...

マルチプレックス蛍光 In Situ ハイブリダイゼーションと蛍光免疫組織化学の融合による新鮮、凍結、または固定マウスの脳切片の結合(英語)

ここでは、単一細胞における複数の老化関連マーカーの可視化および定量化のためのフローサイトメトリーベースの方法を提示する。...

治療誘発性老化癌細胞における複数の蛍光老化マーカーの同時イメージングおよびフローサイトメトリーベースの検出

細胞培養またはマウス腫瘍モデルにおける化学療法薬によって誘導された老化癌細胞の蛍光フローサイトメトリー定量のためのプロトコルが提示されます。オプションの手順には、共免疫染色、大規模なバッチまたは時点分析を容易にするためのサンプル固定、およびフローサイトメトリーソーティングによる生細胞濃縮が含まれます。...

フローサイトメトリーによる老化腫瘍細胞の同定と濃縮のための遠赤色蛍光老化関連β-ガラクトシダーゼプローブ

本稿では、チラミドシグナル増幅(TSA)マルチプレックス免疫蛍光法(mIF)と画像解析および空間解析を組み合わせたプロトコルについて説明します。このプロトコルは、実験室で利用可能なスライドスキャナーに応じて、スライドごとに2〜6個の抗原を染色するために、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)セクションで使用できます。...

腫瘍微小環境の臨床的および生物学的評価のための空間画像解析と組み合わせたマルチプレックス免疫蛍光法

このレポートでは、自動スライドステーナーでのマルチプレックス免疫蛍光(mIF)アッセイの自動化プロトコルについて説明します。これは、標準的なハイスループット組織オートステイナーおよびホールスライド蛍光イメージャーでの空間プロテオミクスの高い再現性を実証しており、トランスレーショナルリサーチにおける多数の組織スライドにわたるカスタムmIFアッセイに最適です。...

トランスレーショナルリサーチのためのハイスループット自動マルチプレックス免疫蛍光アッセイ(英語)

本プロトコルは、ヒト脂肪組織から分離された間質血管画分における老化関連ベータガラクトシダーゼ(SA-β-gal)活性を客観的に単細胞検出するために、反射光共焦点顕微鏡法を提示します。この方法は免疫細胞化学と互換性があり、定量評価のためのpHコントロールを組み込み、さらに従来のSA-β-gal染色よりも感度が高く主観的でない代替手段を提供します。...

脂肪間隙血管分数における反射光を用いた老化検出

DNA二本鎖切断に対する応答のSer -...

電離放射線は、次のγH2AXの空間分布の評価

我々は、直接筋力、筋パワー、収縮動態との単離された骨格筋の疲労を測定する方法を説明します...

隔離された骨格筋の収縮、倦怠感や交互の ex vivo での評価

学ぼう、多重免疫蛍光法を用いたヒト組織における老化細胞の空間評価プロトコル。単一組織切片で複数バイオマーカーを検出し、デジタル病理ソフトウェアで定量的・空間解析を行う方法です。

生体内での老化マーカーの空間評価のための多重免疫蛍光アッセイ

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