Name: FACSを用いたマウス皮質組織からのペリサイト分離 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-30T14:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 50 s
Description: 学ぶマウス脳ペリサイトのFACS分離法。CD13⁺/CD31⁻ソーティングと20%BSA処理により、単一細胞RNAシーケンスに適した高品質な細胞を取得可能。神経血管疾患におけるペリサイトの異質性解析に有用です。

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<ol><li>Payne, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pericyte+microenvironment+during+vascular+development%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">The pericyte microenvironment during vascular development.</a> Microcirculation. 26 (8), e12554(2019).</li>
<li>Ma, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-brain+barrier-associated+pericytes+internalize+and+clear+aggregated+amyloid-%CE%B242+by+LRP1-dependent+apolipoprotein+E+isoform-specific+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurodegener%22%5BJournal%5D)">Blood-brain barrier-associated pericytes internalize and clear aggregated amyloid-β42 by LRP1-dependent apolipoprotein E isoform-specific mechanism.</a> Mol Neurodegener. 13 (1), 57(2018).</li>
<li>Mäe, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-cell+analysis+of+blood-brain+barrier+response+to+pericyte+loss%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Single-cell analysis of blood-brain barrier response to pericyte loss.</a> Circ Res. 128 (4), e46-e62 (2021).</li>
<li>Li, P., Fan, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte+loss+in+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Pericyte loss in diseases.</a> Cells. 12 (15), 1931(2023).</li>
<li>Oliveira, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultured+brain+pericytes+adopt+an+immature+phenotype+and+require+endothelial+cells+for+expression+of+canonical+markers+and+ECM+genes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cultured brain pericytes adopt an immature phenotype and require endothelial cells for expression of canonical markers and ECM genes.</a> Front Cell Neurosci. 17, 1165887(2023).</li>
<li>Yao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+in+pericyte+research%3Apericyte-specific+and+subtype-specific+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Challenges in pericyte research:pericyte-specific and subtype-specific markers.</a> Transl Stroke Res. 13 (6), 863-865 (2022).</li>
<li>Vanlandewijck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecular+atlas+of+cell+types+and+zonation+in+the+brain+vasculature%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A molecular atlas of cell types and zonation in the brain vasculature.</a> Nature. 554 (7693), 475-480 (2018).</li>
<li>Alliot, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+and+periendothelial+cells+of+brain+parenchyma+vessels+co-express+aminopeptidase+N%2C+aminopeptidase+A%2C+and+nestin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Pericytes and periendothelial cells of brain parenchyma vessels co-express aminopeptidase N, aminopeptidase A, and nestin.</a> J Neurosci Res. 58 (3), 367-378 (1999).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation%2C+culture%2C+and+characterization+of+primary+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+sciatic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Isolation, culture, and characterization of primary endothelial cells and pericytes from mouse sciatic nerve.</a> J Neurosci Methods. 416, 110366(2025).</li>
<li>Armulik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericytes+regulate+the+blood-brain+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Pericytes regulate the blood-brain barrier.</a> Nature. 468 (7323), 557-561 (2010).</li>
<li>Crouch, E. E., Doetsch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FACS+isolation+of+endothelial+cells+and+pericytes+from+mouse+brain+microregions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">FACS isolation of endothelial cells and pericytes from mouse brain microregions.</a> Nat Protoc. 13 (4), 738-751 (2018).</li>
<li>Eichhorn, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tissue+factor+and+platelet%2Fleukocyte+markers+on+extracellular+vesicles+reflect+platelet-leukocyte+interaction+in+severe+COVID-19%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Expression of tissue factor and platelet/leukocyte markers on extracellular vesicles reflect platelet-leukocyte interaction in severe COVID-19.</a> Int J Mol Sci. 24 (23), 16886(2023).</li>
<li>Smyth, L. C. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+human+brain+pericytes+and+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Neuroanat%22%5BJournal%5D)">Markers for human brain pericytes and smooth muscle cells.</a> J Chem Neuroanat. 92, 48-60 (2018).</li>
<li>Wu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+mechanisms+of+N6-methyladenosine+methylation+regulating+mammalian+hypertension+development+by+determined+spontaneously+hypertensive+rats+pericytes%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenomics%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic mechanisms of N6-methyladenosine methylation regulating mammalian hypertension development by determined spontaneously hypertensive rats pericytes.</a> Epigenomics. 11 (12), 1359-1370 (2019).</li>
<li>Mirzadeh, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+subventricular+zone+en-face%3Awholemount+staining+and+ependymal+flow%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The subventricular zone en-face:wholemount staining and ependymal flow.</a> J. Vis. Exp. (39), e1938(2010).</li>
<li>Zappaterra, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+cerebrospinal+fluid+from+rodent+embryos+for+use+with+dissected+cerebral+cortical+explants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants.</a> J. Vis. Exp. (73), e50333(2013).</li>
<li>Zou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single-cell+transcriptomic+atlas+of+human+skin+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">A single-cell transcriptomic atlas of human skin aging.</a> Dev Cell. 56 (3), 383-397.e8 (2021).</li>
<li>Bahl, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+deep+learning+to+quantify+neuronal+activation+from+single-cell+and+spatial+transcriptomic+data%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Using deep learning to quantify neuronal activation from single-cell and spatial transcriptomic data.</a> Nat Commun. 15 (1), 779(2024).</li>
<li>Klein, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Droplet+barcoding+for+single-cell+transcriptomics+applied+to+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Droplet barcoding for single-cell transcriptomics applied to embryonic stem cells.</a> Cell. 161 (5), 1187-1201 (2015).</li>
<li>Zheng, G. X. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Massively+parallel+digital+transcriptional+profiling+of+single+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Massively parallel digital transcriptional profiling of single cells.</a> Nat Commun. 8 (1), 14049(2017).</li>
<li>Song, H. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptomic+comparison+of+human+and+mouse+brain+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Transcriptomic comparison of human and mouse brain microvessels.</a> Sci Rep. 10 (1), 12358(2020).</li>
<li>He, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+the+brain+mural+cell+transcriptome%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Analysis of the brain mural cell transcriptome.</a> Sci Rep. 6, 35108(2016).</li>
<li>Stebbins, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem+cell-derived+brain+pericyte-like+cells+induce+blood-brain+barrier+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Adv%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem cell-derived brain pericyte-like cells induce blood-brain barrier properties.</a> Sci Adv. 5 (3), eaau7375(2019).</li>
<li>Crouch, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+and+stage-specific+effects+of+prospectively+purified+vascular+cells+on+the+adult+V-SVZ+neural+stem+cell+lineage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Regional and stage-specific effects of prospectively purified vascular cells on the adult V-SVZ neural stem cell lineage.</a> J Neurosci. 35 (11), 4528-4539 (2015).</li>
<li>Ruan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Screening+and+identification+of+muscle+pericyte+selective+markers%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Screening and identification of muscle pericyte selective markers.</a> Sci Rep. 15 (1), 28874(2025).</li>
<li>Dias, D. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pericyte-derived+fibrotic+scarring+is+conserved+across+diverse+central+nervous+system+lesions%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Pericyte-derived fibrotic scarring is conserved across diverse central nervous system lesions.</a> Nat Commun. 12 (1), 5501(2021).</li>
<li>Thalgott, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-invasive+characterization+of+pericyte+dysfunction+in+mouse+brain+using+functional+ultrasound+localization+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biomed+Eng%22%5BJournal%5D)">Non-invasive characterization of pericyte dysfunction in mouse brain using functional ultrasound localization microscopy.</a> Nat Biomed Eng. , (2025).</li>
<li>Grant, R. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organizational+hierarchy+and+structural+diversity+of+microvascular+pericytes+in+adult+mouse+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Organizational hierarchy and structural diversity of microvascular pericytes in adult mouse cortex.</a> J Cereb Blood Flow Metab. 39 (3), 411-425 (2019).</li>
<li>O'flanagan, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+solid+tumor+tissues+with+cold+active+protease+for+single-cell+RNA-seq+minimizes+conserved+collagenase-associated+stress+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Dissociation of solid tumor tissues with cold active protease for single-cell RNA-seq minimizes conserved collagenase-associated stress responses.</a> Genome Biol. 20 (1), 210(2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td><td>Gibicol</td><td>A5669701</td><td>凍結保存する前に小分けし、-20℃で保管。解凍後4℃で1週間まで保存可能</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline(10×PBS, pH 7.4)</td><td>Life Technologies</td><td>70011-044</td><td>細胞洗浄用に使用前に希釈する</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td>細胞エネルギーバッファの調製に使用</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A1933-25g</td><td>細胞を保護し、接着を防ぐ</td></tr><tr><td>Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (DPBS,1×)</td><td>Gibco</td><td>14190-144</td><td></td></tr><tr><td>Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS,1×)</td><td>Life Technologies</td><td>14175-095</td><td>細胞洗浄および懸濁用</td></tr><tr><td>UltraPure DNase/RNase-Free Distilled Water</td><td>Life Technologies</td><td>10977-015</td><td>核酸分解酵素フリーの反応システムの調製に使用</td></tr><tr><td>Collagenase/Dispase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>11097113001-100mg</td><td>組織消化および細胞解離用。小分けし、-20℃で保管</td></tr><tr><td>DNaseI(RNase-Free)</td><td>TIANGEN</td><td>RT411-1500U</td><td>DNA凝集を防ぐ。小分けし、-20℃で保管</td></tr><tr><td>Percoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1644-100ML</td><td>細胞分離用。4℃で保管</td></tr><tr><td>FITC Rat Anti-Mouse CD13</td><td>BD Biosciences</td><td>558744</td><td>蛍光共役物。4℃で光を避けて1ヶ月間まで保管</td></tr><tr><td>APC Rat Anti-Mouse CD31</td><td>BD Biosciences</td><td>551262</td><td>4℃で光を避けて数ヶ月間保管</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD41</td><td>BD Biosciences</td><td>558040</td><td>4℃で光を避けて数ヶ月間保管</td></tr><tr><td>PE Rat Anti-Mouse CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>553081</td><td>4℃で光を避けて数ヶ月間保管</td></tr><tr><td>FITC Rat IgG1, κ Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>552916</td><td>蛍光コントロール。4℃で光を避けて保管</td></tr><tr><td>APC Rat IgG2a, κ Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>553932</td><td>4℃で光を避けて数ヶ月間保管</td></tr><tr><td>PE Rat IgG2b, κ Isotype Control</td><td>BD Biosciences</td><td>553989</td><td>4℃で光を避けて数ヶ月間保管</td></tr><tr><td>RNase AWAY Decontamination Reagent</td><td>Ambion</td><td>10328011</td><td>RNase汚染の除去用</td></tr><tr><td>Purified Rat Anti-Mouse CD16/CD32 (Mouse BD Fc Block)</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td>非特異的抗体結合を防ぐ</td></tr><tr><td>7-Aminoactinomycin D (7-AAD)</td><td>BD Pharmingen</td><td>559925</td><td>死細胞除外用</td></tr><tr><td>2,2,2-Tribromoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402-25g</td><td>1.25％（重量/体積）のTribromoethanol溶液の調製に使用</td></tr><tr><td>2-Methyl-2-butanol</td><td>Psaitong</td><td>M20008-500mL</td><td>1.25％（重量/体積）のTribromoethanol溶液の調製に使用</td></tr><tr><td>C57BL/6 mouse</td><td>Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.</td><td>SYXK (Su) 2020-0041</td><td></td></tr><tr><td>50 mL centrifuge tube</td><td>Corning</td><td>430291</td><td></td></tr><tr><td>15 mL centrifuge tube</td><td>Corning</td><td>430791</td><td></td></tr><tr><td>cell cluture dish 100mm×20mm</td><td>Corning</td><td>430167</td><td></td></tr><tr><td>Cell Ranger</td><td></td><td>3.1.0/4.0.0</td><td>Single-Cell Sequencing Data Analysis Software</td></tr><tr><td>Loupe Cell Browser</td><td></td><td>4.1</td><td>Cell Browser</td></tr><tr><td>STAR</td><td></td><td>2.5.1b</td><td>RNA Alignment</td></tr><tr><td>irlbpy</td><td></td><td>-</td><td>Principal Component Analysis</td></tr><tr><td>tsne</td><td></td><td>0.15</td><td>Barnes-Hut t-SNE (t-Distributed Stochastic Neighbor Embedding) Analysis</td></tr><tr><td>k-means</td><td></td><td>0.17</td><td>K-Means Clustering</td></tr><tr><td>graph-based clustering</td><td></td><td>0.17</td><td>Graph-Based Clustering</td></tr><tr><td>FastQC</td><td></td><td>v0.11.2</td><td>Data Quality Control (QC)</td></tr></tbody></table>

facsを用いたマウス皮質組織からのペリサイト分離

Isolation of Pericytes from Mouse Cortical Tissue Using FACS for Single-cell Sequencing

FACSを用いたマウス皮質組織からのペリサイト分離

Pericytes, as a core component of the neurovascular unit, play a vital role in maintaining the integrity of the blood-brain barrier and regulating ...

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Research

JoVE Journal

Biochemistry

生物化学

このビデオは、マウスの脳から脳周皮細胞を分離する方法を示しています。単離した細胞は、ペリサイト特異的培地で培養され、ペリサイト増殖を促進します。...

マウス脳周皮細胞の単離と培養

線維芽細胞の振る舞いは、さまざまな臨床実体の根底にありますが、それらは主にその固有の不均一性のために、特徴付けられていないままです。従来の線維芽細胞研究は、in vivoでの線維芽細胞の挙動をマスキングするin...

FACSによるマウス皮膚線維芽細胞の分離

人間の心臓組織は、心筋再生のために適切であり得る多能血管周囲の前駆細胞集団を保有します。ここに記載された技術は、ネイティブの血管に関連する2つの多能ストローマ細胞集団の同時単離および精製を可能にする、すなわち CD146 + CD34 -周皮細胞およびCD34 + CD146 -外膜細胞、ヒト心筋から。...

ヒト心臓組織からの血管周囲多能前駆細胞集団の単離

この研究は、骨格筋からのI型およびII型周皮細胞の容易かつ同時の単離を可能にするFACSベースのプロトコールを記載する。...

マウス骨格筋からのI型およびII型ペリクルの単離

私たちは、基礎研究と生物学と治療の可能性の研究のために、マウス心膜を分離し、精製するためのプロトコルを最適化しました。...

マウス心ペリサイトの単離と精製

成体マウス脳半球の異なる解剖領域からミクログリアを分離するためのプロトコルを提供し、続いて全長転写物の深い単一細胞RNAシーケンシングのための半自動化ライブラリ製剤を提供する。この方法は、健康と疾患におけるミクログリアの機能的不均一性を解明するのに役立ちます。...

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

我々は、マウス脳ペリサイトの抽出のためのプロトコルを提示する。抗生物質フリー濃縮指向のペリサイト抽出に基づいて、このプロトコルは、高純度と高収率を提供するインビトロ研究のための貴重なツールであり、したがって、使用される実験動物の数を減少させる。...

マウスから脳ペリサイトを分離する高出力法

線維芽細胞の純粋な集団を得ることは、創傷修復および線維化におけるその役割を研究するために重要である。ここでは、線維芽細胞と筋線維芽細胞を、傷つけていないマウスの心臓から分離し、その後、免疫蛍光、RTPCR、蛍光支援細胞選別による純度と機能性の特徴付け、およびコラーゲンゲル収縮。...

成人心臓線維芽細胞と筋線維芽細胞の分離と特徴付け

脳毛細血管のペリサイトは、血液脳関門の特性と血流の調節に不可欠なプレーヤーです。このプロトコルは、脳の毛細血管のペリサイトを、細胞型に関してどのように分離し、培養し、蛍光プローブを用いた細胞内カルシウムシグナル伝達の調査に適用できるかを説明する。...

細胞体カルシウム測定とカルシウムイメージング研究のための脳毛細血管培養

我々は、1細胞オミクス実験を行うために、安定したまたは乱れた流動条件にさらされたマウス頸動脈の内腔から内皮細胞および核を単離する方法を提示する。...

シングルセルマルチオミクス実験のためのマウス頸動脈内腔からの内皮細胞の単離

このプロトコルは、細胞収量、純度、および生存率に最適化されたマウス生後網膜内皮細胞の単離方法について説明しています。これらの細胞は、次世代シーケンシングアプローチに適しています。...

次世代シーケンシングのためのマウス網膜内皮細胞の単離

学ぶマウス脳ペリサイトのFACS分離法。CD13⁺/CD31⁻ソーティングと20%BSA処理により、単一細胞RNAシーケンスに適した高品質な細胞を取得可能。神経血管疾患におけるペリサイトの異質性解析に有用です。

FACSを用いたマウス皮質組織からのペリサイト分離

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