Name: グローバルN6-メチルアデノシンRNA修飾レベル検出のためのドットブロットアッセイ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-02-06T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: 学ぶドットブロットアッセイによるグローバルm⁶A修飾レベルの半定量評価法。RNA生物学研究において、迅速かつ費用対効果の高いスクリーニングと機能検証を可能にする実験プロトコルを解説する。

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<ol><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-dependent+regulation+of+messenger+RNA+stability%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-dependent regulation of messenger RNA stability.</a> Nature. 505 (7481), 117-120 (2014).</li>
<li>Zhang, Z., Wei, W., Wang, H., Dong, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine-sculpted+regulatory+landscape+of+noncoding+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine-sculpted regulatory landscape of noncoding RNA.</a> Front Oncol. 11 (1), 743990(2021).</li>
<li>Hsu, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA-binding+protein+FMRP+facilitates+the+nuclear+export+of+N6-methyladenosine-containing+mRNAs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The RNA-binding protein FMRP facilitates the nuclear export of N6-methyladenosine-containing mRNAs.</a> J Biol Chem. 294 (52), 19889-19895 (2019).</li>
<li>Chen, X. -Y., Zhang, J., Zhu, J. -S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+m6A+RNA+methylation+in+human+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">The role of m6A RNA methylation in human cancer.</a> Mol Cancer. 18 (1), 103(2019).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+and+clinical+relevance+of+m6A+regulators+across+33+cancer+types%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization and clinical relevance of m6A regulators across 33 cancer types.</a> Mol Cancer. 18 (1), 137(2019).</li>
<li>Hu, Y., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+m6A+in+osteoporosis%2C+arthritis+and+osteosarcoma+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Ther+Med%22%5BJournal%5D)">Role of m6A in osteoporosis, arthritis and osteosarcoma (review).</a> Exp Ther Med. 22 (3), 926(2021).</li>
<li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((N6-methyladenosine+%28m6A%29+modification+in+osteosarcoma%3A+expression%2C+function+and+interaction+with+noncoding+RNAs-an+updated+review%5BTitle%5D)+AND+%22Epigenetics%22%5BJournal%5D)">N6-methyladenosine (m6A) modification in osteosarcoma: expression, function and interaction with noncoding RNAs-an updated review.</a> Epigenetics. 18 (1), 2260213(2023).</li>
<li>Zhu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+N6methyladenosine+modification+residues+%28review%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Detection of N6methyladenosine modification residues (review).</a> Int J Mol Med. 43 (6), 2267-2278 (2019).</li>
<li>Wang, Y., Jia, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+methods+of+epitranscriptomic+mark+N6-methyladenosine%5BTitle%5D)+AND+%22Essays+Biochem%22%5BJournal%5D)">Detection methods of epitranscriptomic mark N6-methyladenosine.</a> Essays Biochem. 64 (6), 967-979 (2020).</li>
<li>Stejskal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+analysis+by+LC-MS%2FMS+of+N6-methyladenosine+and+inosine+in+mRNA+reveal+complex+incidence%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">Global analysis by LC-MS/MS of N6-methyladenosine and inosine in mRNA reveal complex incidence.</a> RNA. 31 (4), 514-528 (2025).</li>
<li>Ensinck, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A-ELISA%2C+a+simple+method+for+quantifying+N6-methyladenosine+from+mRNA+populations%5BTitle%5D)+AND+%22RNA%22%5BJournal%5D)">m6A-ELISA, a simple method for quantifying N6-methyladenosine from mRNA populations.</a> RNA. 29 (5), 705-712 (2023).</li>
<li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((m6A+mRNA+methylation+regulates+AKT+activity+to+promote+the+proliferation+and+tumorigenicity+of+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">m6A mRNA methylation regulates AKT activity to promote the proliferation and tumorigenicity of endometrial cancer.</a> Nat Cell Biol. 20 (9), 1074-1083 (2018).</li>
<li>Zhang, M., Li, Q., Xie, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Bayesian+hierarchical+model+for+analyzing+methylated+RNA+immunoprecipitation+sequencing+data%5BTitle%5D)+AND+%22Quant+Biol+%28Beijing%29%22%5BJournal%5D)">A Bayesian hierarchical model for analyzing methylated RNA immunoprecipitation sequencing data.</a> Quant Biol (Beijing). 6 (3), 275-286 (2018).</li>
<li>Dominissini, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+of+the+human+and+mouse+m6A+RNA+methylomes+revealed+by+m6A-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Topology of the human and mouse m6A RNA methylomes revealed by m6A-seq.</a> Nature. 485 (7397), 201-206 (2012).</li>
<li>Mishra, T., Phillips, S., Zhao, Y., Wilms, B., He, C., Wu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epitranscriptomic+m6A+modifications+during+reactivation+of+HIV-1+latency+in+CD4%2B+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Epitranscriptomic m6A modifications during reactivation of HIV-1 latency in CD4+ T cells.</a> mBio. 15 (11), e0221424(2024).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((METTL16+promotes+lipid+metabolic+reprogramming+and+colorectal+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">METTL16 promotes lipid metabolic reprogramming and colorectal cancer progression.</a> Int J Biol Sci. 21 (11), 4782-4797 (2025).</li>
<li>Ren, F., Cai, Y., Song, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((OTUD7B+stabilization+by+METTL14-mediated+m6A+methylation+drives+HIF-1%CE%B1+expression+in+esophageal+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncol+Res%22%5BJournal%5D)">OTUD7B stabilization by METTL14-mediated m6A methylation drives HIF-1α expression in esophageal squamous cell carcinoma.</a> Oncol Res. 33 (8), 2055-2074 (2025).</li>
<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WTAP+facilitates+progression+of+hepatocellular+carcinoma+via+m6A-HuR-dependent+epigenetic+silencing+of+ETS1%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cancer%22%5BJournal%5D)">WTAP facilitates progression of hepatocellular carcinoma via m6A-HuR-dependent epigenetic silencing of ETS1.</a> Mol Cancer. 18 (1), 127(2019).</li>
<li>Gu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upregulation+of+circGDI2+inhibits+tumorigenesis+by+stabilizing+the+expression+of+RNA+m6A+demethylase+FTO+in+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Noncoding+RNA+Res%22%5BJournal%5D)">Upregulation of circGDI2 inhibits tumorigenesis by stabilizing the expression of RNA m6A demethylase FTO in oral squamous cell carcinoma.</a> Noncoding RNA Res. 10 (1), 140-152 (2025).</li>
<li>Ura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+dot+blot+analyses+of+blood-group-related+antigens+in+paired+normal+and+malignant+human+breast+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Quantitative dot blot analyses of blood-group-related antigens in paired normal and malignant human breast tissues.</a> Int J Cancer. 50 (1), 57-63 (1992).</li>
<li>Reed, K. C., Mann, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+transfer+of+DNA+from+agarose+gels+to+nylon+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid transfer of DNA from agarose gels to nylon membranes.</a> Nucleic Acids Res. 13 (20), 7207-7221 (1985).</li>
<li>Herrin, D. L., Schmidt, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid%2C+reversible+staining+of+northern+blots+prior+to+hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Rapid, reversible staining of northern blots prior to hybridization.</a> Biotechniques. 6 (3), 196-200 (1988).</li>
<li>Rio, D. C., Ares, M., Hannon, G. J., Nilsen, T. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aRio%2C+DC+%22RNA%3A+A+Laboratory+Manual%22">RNA: A Laboratory Manual</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. NY. (2010).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning: A Laboratory Manual</a>. , 3rd ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY. (2001).</li>
<li>Helm, M., Motorin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detecting+RNA+modifications+in+the+epitranscriptome%3A+Predict+and+validate%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Genet%22%5BJournal%5D)">Detecting RNA modifications in the epitranscriptome: Predict and validate.</a> Nat Rev Genet. 18 (5), 275-291 (2017).</li>
<li>Meyer, K. D., Jaffrey, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dynamic+epitranscriptome%3A+N6-methyladenosine+and+gene+expression+control%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The dynamic epitranscriptome: N6-methyladenosine and gene expression control.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 15 (5), 313-326 (2014).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>3-デアザアデノシン(3-DAA)</td><td>MCE</td><td>ヒー W013332A</td><td>1mg</td></tr><tr><td>抗m6Aモノクローナル抗体</td><td>プロテインテック</td><td>68055-1-Ig</td><td>50 & mu;L</td></tr><tr><td>牛血清アルブミン(BSA、フラクションV)</td><td>バイオフロックス</td><td>4240GR100&nbsp;</td><td>100 g</td></tr><tr><td>ケミドックMPイメージングシステム</td><td>バイオ・ラッド</td><td>12003154</td><td></td></tr><tr><td>DMEM高血糖</td><td>WISENT</td><td>319-005-CL</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>DS-11分光光度計</td><td>デノヴィックス</td><td>DS-11</td><td></td></tr><tr><td>EZ-press RNA精製キット</td><td>EZB&nbsp;</td><td>B0004DP</td><td>100 Preps</td></tr><tr><td>FBS- 優れた品質</td><td>WISENT</td><td>086-150</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>HRP結合ヤギ抗マウスIgG(H+L)</td><td>ビヨタイム</td><td>A0216</td><td>1 mL</td></tr><tr><td>Immobilon Western chemiluminescent HRP 基質 nbsp;</td><td>ミリポール</td><td>WBKLS0500</td><td>2 & 倍;250 mL</td></tr><tr><td>メクロフェナミン酸(MA)</td><td>MCE</td><td>HY-117275</td><td>1mg</td></tr><tr><td>メチレンブルー染色溶液</td><td>ソーラービオ</td><td>G1300</td><td>0.1%、100 mL</td></tr><tr><td>ナイロントランスファー膜</td><td>ラボセレクト</td><td>TM-NY-XS-45</td><td>7.4 & times;8.5 cm、0.45 & mu;m、10 PCS/バッグ</td></tr><tr><td>PBSバッファー(すぐに使えるドライパウダー)</td><td>バイオシャープ</td><td>BL601A</td><td>pH:7.2〜7.4、2リットル/袋</td></tr><tr><td>ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)</td><td>シグマ</td><td>L5750-500G</td><td>500 g</td></tr><tr><td>TBSバッファープレミックスパウダー</td><td>サンゴン</td><td>&nbsp;A510025-0001</td><td>1EA(243.9 gの火薬)</td></tr><tr><td>TrypLEエクスプレス酵素</td><td>ギブコ</td><td>12604-021</td><td>1&times;500 mL</td></tr><tr><td>トゥイーン-20</td><td>サンゴン</td><td>A600560-0500</td><td>500 mL</td></tr><tr><td>UV架橋剤</td><td>UVP</td><td>CL-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

グローバルn6-メチルアデノシンrna修飾レベル検出のためのドットブロットアッセイ

Dot Blot Assay for Detecting Global N6-Methyladenosine RNA Modification Levels

グローバルN6-メチルアデノシンRNA修飾レベル検出のためのドットブロットアッセイ

N6-methyladenosine (m&#8310;A) is the most abundant internal modification in eukaryotic messenger RNA (mRNA) and serves as a key regulator of ...

dot-blot-assay-for-detecting-global-n6-methyladenosine-rna

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

N 6 -methyladenosine（メートル6 A）RNAに修飾を測定するための修正されたノーザンブロット法が記載されています。現在の方法は、様々な実験デザインの下で多様なRNAおよびコントロールで変更を検出することができます。...

RNAの測定方法<em&gt; N</em<sup&gt; 6</sup細胞や組織における&gt; -methyladenosine変更

ここで、Mod5、酵母 RNA 修飾酵素の生化学的解析のためのプロトコルを記述し、このプロトコル可能性があります他の RNA...

TRNA イソペンテニル トランスフェラーゼ活性を検出する体外の試金

ここでは、RNAのDNAzyme依存性切断に関するプロトコルを提示する。これにより、RNA...

rRNA 2'-O-メチル化のDNAzyme依存性分析

ここで、合成またはインビトロ転写RNA上のメチルトランスフェラーゼ活性の直接分析のための抗体フリーインインビトロアッセイが記載されている。...

RNAメチルトランスフェラーゼ活性分析のための抗体フリーアッセイ

我々は、標準的な方法よりもバイアスが少ない詳細な小さなRNAライブラリー修復プロトコルと2'-O-メチルRNAの感度の増加を提示する。このプロトコルは、コストを節約するために自家製試薬を使用するか、便宜上キットを使用して従うことができます。...

小型RNA-seqの改善:バイアスの減少と2'-O-メチルRNAの検出の改善

メチル化されたRNA免疫沈降アッセイは、メチル化RNAフラグメントを濃縮するために使用される抗体ベースの方法です。深いシーケンシングと結合して、それはm5C修飾を運ぶ転写物の同定をもたらす。...

シロイヌナズナのm5C修飾を研究するメチル化RNA免疫沈降アッセイ

インビボヌクレオシド/ヌクレオチドの植物定量の正確かつ再現可能な方法をここに記載する。この方法では、HPLC-MS/MS...

HPLC-MS/MSによるヌクレオシド/ヌクレオチド含有量測定のための植物サンプル調製

ウイルス感染におけるRNA修飾の役割は、検討され始めたばかりで、新しいウイルス宿主相互作用メカニズムを強調する可能性がある。本研究では、ウイルス感染の文脈におけるm6Aおよびm5C...

ウイルス感染時のm6Aおよびm5Cエピトランスクリプトームの探索:HIVの例

RNAの転写後修飾は、最近中枢神経系の可塑性に関連している翻訳調節の未研究の層を表す。ここで、試料調製および液体クロマトグラフィータンデム質量分析アプローチは、単一のニューロンにおける多数のRNA修飾の同時特性評価のために説明される。...

質量分析法を用いた単一ニューロンにおけるRNA修飾の特性評価

このプロトコルは、突然変異プロファイリング実験のために硫酸ジメチルでRNAを修飾するための指示を提供します。これには、2つの代替ライブラリ調製方法を使用したin vitro および in vivo...

硫酸ジメチルによるRNA構造のプロービング in vitro および細胞内でのシーケンシングによる突然変異プロファイリング(英語)

このプロトコルは、MeRIP-qPCRを用いて特定のRNAのm6A修飾レベルを評価する詳細なアプローチを提供します。...

骨肉腫細胞における特異的RNAのm6A修飾レベル検出のためのMeRIP-qPCRアッセイ

学ぶドットブロットアッセイによるグローバルm⁶A修飾レベルの半定量評価法。RNA生物学研究において、迅速かつ費用対効果の高いスクリーニングと機能検証を可能にする実験プロトコルを解説する。

グローバルN⁶-メチルアデノシンRNA修飾レベル検出のためのドットブロットアッセイ

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