卵モデルにおける肺高血圧症右心室不全における構造化運動レジメン

私たちは、運動が肺高血圧症-右心室不全の病態生理に与える影響を、卵モデルで研究しています。肺高血圧症右心室不全における運動効果は、耐性の制限と心肺の非償償リスクのため、十分に特徴づけられていません。しかし、このプロトコルにより制御された評価が可能になります。

まず、必要な試薬を集めて実験作業スペースを整えましょう。生理食塩水を3回流してください。それぞれから1ミリリットルずつ取り除きます。

そして各注射器に1,000単位入りのヘパリン溶液を1ミリリットル加えます。10ミリリットルのシリンジを2本(1つは廃物用、もう1つは血液採取用)、さらに血液ガス採取用の1ミリリットルシリンジを5本用意します。5ミリリットルの注射器を使い、5ミリリットルのヘパリン溶液を5ミリリットル抽出し、右心室または右心室のラインをロックします。

必要に応じて使用するために、アルテプラゼ2ミリグラムと滅菌水2ミリリットルを再構成します。1ミリリットルの注射器と5ミリリットルの注射器を1つ用意し、20〜22ゲージの針で両方に高張性生理食塩水を満たします。圧力トランスデューサーを入手し、圧力チューブのメスルアー側をトランスデューサーのオスルアー側に接続します。

トランスデューサーの下部ルアー端がキャップされているか確認してください。チューブを三方向ストップコックに接続し、22ゲージのヒューバー針を取り付けます。針から液体が抜けるまで高張塩水でラインを洗浄します。

次にストップコックを調整して針の方にロックし、青いキャップから離れてカフへのアクセスを閉じます。1リットルの袋から生理食塩水2ミリリットルを取り出し、2,000単位のヘパリンを含むヘパリン溶液2ミリリットルに置き換えます。生理食塩水バッグを圧力バッグに入れ、静脈内スパイクを使ってアクセスバッグに挿入します。

圧力バッグは地上約2メートルの高さに吊るします。そして圧力バッグの三方向ストップコックを回し、ハンドルがチューブに対して直角になるようにします。ハンドポンプでバッグを膨らませ、圧力計が約250ミリメートルの水銀で緑色になるまで続けます。

圧力を維持するために三方向ストップコックを袋の方に回します。静脈内ラインのオス端をトランスデューサーのメス端に接続します。次に、圧力チューブのメスルアー側をトランスデューサーのオス側に接続します。

そして、チューブのオス側をストップコックのメスルアー側に接続します。22ゲージのヒューバー針を三方向ストップコックのオス端に取り付けた後、ヘパリンバッグを開けて静脈内ラインを洗浄し、ヘパリン化された生理食塩水がフーパー針から出るまで洗浄します。三方向ストップコックをヒューバー針の方に向けてロックします。

PAカフとRV圧ポートを用いて、肺高血圧症のRV機能不全を羊モデルで測定します。術後回復1週間後、トレッドミルで順応した羊を運動室に運び、検査を行います。羊にハルターを装着し、動物をトレッドミルに導き、前方近くに位置させ、四本の脚を小さな木箱の上に乗せます。

ポートを触診し、アルコールワイプで皮膚を洗浄してください。PAポートにアクセスするにはHuber針を使ってください。ラボチャートのホームページを開いた後、「新設」を選択し、「セットアップ」をクリックし、「デバイス」と「チャンネル」を選択します。

チャンネル数を4に設定し、チャンネル1をPAカフ圧、RV圧、RV収縮期圧、心拍数に名前を変更します。サイクル測定を選択してください。ソースに行き、チャンネル2のRV圧力を選択し、最大値に測定してOKをクリックします。チャンネル4の心拍数で同じプロセスを繰り返し、測定値を心拍数に変えます。

チャンネル1と2については、計算が選択されていないか確認してください。PAポートはヘッドに近い位置に、RVポートはテールに近い位置に位置し、アクセスの向きを正しく確保してください。心臓の高さで羊とコンピューターの間にトランスデューサーを配置し、両方の圧力トランスデューサーをインターフェースケーブルに接続します。

トランスデューサーのゼロ調整と校正が完了したら、開始ボタンをクリックして400ヘルツでRVおよびPAカフの圧力波形の記録を開始します。ストップコックを上に回してPAカフの圧力波形を変換します。次にストップコックを羊の方にオフにして波形を閉じます。

RVラインの三方向ストップコックにヘパリンを1つフラッシュし、全ラインをRVポートにフラッシュします。注射器を優しく引き戻し、濃い血が戻るまで続けます。トランスデューサー側に向かってストップコックをオフにしてください。

まず、空の10ミリリットルの注射器を使って10ミリリットルのリバチエットル血液を抽出します。次に1ミリリットルの注射器で、0.2〜0.4ミリリットルのRV血液をサンプルとして採取します。ストップを上向きに回します。

RV圧力トランスデューサーの青いタブを引いてバルブを開け、ラインに血が抜けるまでフラッシュを続けてください。最初のエクササイズのスピードは、トレッドミルのノブを30(秒速0.46メートル)に設定し、10分間維持します。10分間隔の間にPAカフラインを定期的に開けて圧力を伝達してください。

10分間隔の終わり頃に、前述のように血液ガスを測定してください。血液採取、ラインフラッシュ、運動ステップをトレッドミルの設定40、50、30、0で繰り返します。1ミリリットルの高張生理食塩水を使ってカフを150〜200ミリメートルの水銀に膨らませます。

膨張後数分間RV圧を変換して耐性を確認してください。混合静脈酸素飽和度は、1週目から8週目まで最大トレッドミル速度で比較的安定していました。RV収縮期血圧は1週目から8週目にかけて上昇しました。

運動中の移動距離は、PAカフの圧力が8週目までに約777ミリメートルの水銀柱に上昇したにもかかわらず、第1週から第8週にかけて増加しました。選択したトレッドミルの速度では、混合静脈酸素飽和度が低下し、運動速度が上がるにつれてRV収縮期圧力が上昇しました。このプロトコルにより、運動中にリアルタイムで血行動態値を測定できます。

このプロトコルの重要な課題は、ポートアクセスや演習の維持です。特にPAカフの圧力を維持することです。将来的により詳細に測定したい指標の一つは、運動と回復時の酸素消費です。