Name: 冷凍細胞から出発培養：ヒトES細胞 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-09T00:00:00.000+00:00
Duration: 2 min 47 s
Description: 学ぶ冷凍保存されたHuESヒト胚性幹細胞の解凍と培養プロトコル。神経科学および発生生物学研究における細胞生存性と再現性の確保方法を理解できます。この手法は将来の神経科学研究の基盤となります。

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凍結ストックからの雪解け： <ol><li> 色相の細胞を解凍する前に、既に準備したMEFのプレートが良好な状態で適切にメッキしていることを確認してください。望ましい板、または3日前より古い場合よりも少ないを使用しないでください。それはすべてのコニカルチューブや井戸が使用されて事前にラベルを付けることをお勧めします。 </li><li> 37℃に予熱する色合いのメディア各ラインのための滅菌コニカルチューブに分注し色合いのメディアを。 -80〜バイアル/ sの色合いを削除し、直ちに37℃の水浴中に浸し、チューブの下半分を。細胞が80％（左の小さな冷凍部分）に解凍する前に、これは45〜60秒ほどかかります。 </li><li>迅速に、層流フードへのチューブをもたらす70％アルコールでダウンスプレー、と優しく予め温めておいたメディアのために細胞を移す。チューブをスピン、メディアを取り出し、そして新鮮な、予め温めておいた色合いのメディアの適切な量で再懸濁します。 </li><li>あなたがに解凍されるので、多くの井戸などからMEFメディアをオフに吸引除去する。バックプレートの各ウェルに迅速に、一定分量予め温めておいたHues社のメディア、添付のMEFを乱さないように注意して。フード内でわきプレートを設定します。滴は均等にプレートに分布している場合はMEFの場合と同様に、最良の結果が得られる。種子への色合いの細胞はMEFを可能にするために一晩37℃のインキュベーターにプレートを慎重にして返す。新鮮な色合いのメディアと交換する、〜48時間解凍した後、メディアを変更します。 </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+Embryonic+Stem+Cells+from+Human+Blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Derivation of Embryonic Stem Cells from Human Blastocysts.</a> , 1650-1656 (2004).</li>
</ol>

著者らに開示すべき事項はありません。

このビデオでは、我々の研究室では日常的に凍結ストックから色相ヒト胚性幹細胞培養を確立する方法を示します。このプロセスは、DMSO溶液中で凍結した場合は任意の哺乳動物細胞で一般的な使用に適している。効率的な融解は凍結ストックから色相細胞の新たな文化を確立するために不可欠であり、実験的な一貫性を保つために重要です。

色合いメディア651.5ミリリットルKO - DMEM 500ミリリットルPenStrep 6.5ミリリットルグルタミン6.5ミリリットルNEAA 6.5ミリリットルのβ-メルカプトエタノール0.5ul KO血清の交換65ミリリットルPlasmanate 65ミリリットルbFGF2（10 ng / mLの最終的な）0.65ミリリットル

冷凍細胞から出発培養：ヒトes細胞

Human ES cells: Starting Culture from Frozen Cells

ここでは私たちの研究室は、凍結ストックからの色相ヒト胚性幹細胞株の培養を開始する方法を示します。最初に、約（2〜）百照射したマウス胚性線維芽細胞のフィーダー細胞の1〜2日齢10センチメートル板が残存血清や細胞破片を除去するために色相のメディアでリンスし、色相のメディアが追加され、細胞内で平衡に委ねられている培養インキュベーター。冷凍長期液体窒素貯蔵から細胞のバイアルまたは- 80C冷凍庫がソースと素早く解凍迅速にするための37C水浴に浸漬される。凍結培地中の細胞は、バイアルから削除され、色相のメディアの大ボリュームに配置されます。色相の大ボリュームは、メディアは色相ヒト胚性幹細胞が分化する原因となる過剰な血清及びDMSOの除去を容易にします。細胞を穏やかにしてシードMEFのプレートをするために使用される新鮮な色合いのメディアの小さなボリュームに再懸濁した懸濁液から分離独立、とされています。それを穏やかに均等にプレートを通してそれらを分散させる滴下方法で色相のセルを追加することにより、MEFプレートシードに重要であると考えています。メディアを交換する前に新しく設立された色合いの培養プレートを48時間インキュベーターに戻され、その後、その後24時間ごとに供給されます。

ここでは私たちの研究室は、凍結ストックからの色相ヒト胚性幹細胞株の培養を開始する方法を示します。

冷凍細胞から出発培養：ヒトES細胞

ここでは、当研究室で凍結ストックからHuESヒト胚性幹細胞株の培養を開始する方法を実演します。まず、1〜2日経過した10 cmプレートの...

human-es-cells-starting-culture-from-frozen-cells

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

ここでは私たちの研究室ではヒト胚性幹細胞株の色合いをフリーズする方法を示します。...

凍結ヒトES細胞

ジェームズトムソンらが文化の中でヒトESを分離し、成長し、1998年の技術を開発して以来、後で使用するためと凍結ストックからの細胞を解凍し、拡大して凍結細胞は、ルーチンヒトES細胞培養で行われる重要な手続きとなっている。ヒトES細胞は凍結融解のストレスに対して非常に敏感であるため、特別な注意が必要です。ここでは、急速に、液体窒素の在庫からヒトES細胞を融解マウス胚性フィーダー細胞上にめっき、ゆっくりと長期保存のためにそれらを凍結するための適切な手法を示す。...

ヒト胚性幹細胞を凍結融解

大人の線維芽細胞から再プログラムヒト人工多能性幹細胞のコロニーを選択し、分離

現在の適正製造基準（c）ガイドラインに従って、動物製品を含まない試薬を使用してヒト羊膜上皮細胞（hAECs）を単離し培養するプロトコルを記述します。...

臨床応用のためのヒト羊膜上皮細胞の単離、凍結保存と文化

このプロトコルは、ゼラチンでコーティングされた皿にヒト胎盤由来の馴化培地のみを使用して、ヒト多能性幹細胞(hPSC)を増殖させる簡単で効率的な方法を提供します。追加の外因性サプリメントやhPSC特異的な合成基質はありません。...

ヒト多能性のための新しい文化モデルは、プラセンタ馴化培地中のゼラチンの細胞増殖幹

人間の皮膚は外部環境に対する防御の最初の行として機能します。大人の皮膚から人間ケラチノ サイト主を分離する手法を提案します。これらの孤立したケラチノ サイトは、多数の実験のセットアップに便利、皮膚の生物学の in...

世代、大人の肌からプライマリ ヒト角化培養

増殖と分化に生体材料の剛性の影響を調査するため、オリゴペプチド、接木されたさまざまな剛性とポリビニル アルコール co...

Xeno 無料条件下におけるさまざまな剛性とポリビニル アルコール Co イタコン酸ゲルのひと多能性幹細胞文化

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静止ヒト造血幹細胞を維持する培養法

細胞療法の準備/操作ステップで導入された異種(化学的または動物由来)製品は、宿主患者における免疫反応性および病原性伝播のリスクの増加と関連しています。ここでは、ヒト脂肪由来幹細胞の単離および in vitro...

ヒト異種異系フリーのヒト治療法によるヒト脂肪由来幹細胞の単離と培養

現在のプロトコルでは、製造元の指示に従って再プログラムが困難な患者の末梢血単核細胞(PBMC)から誘導多能性幹細胞(iPSC)を誘導するトラブルシューティング手順が詳細に記載されています。このプロトコルは凍結バフィー被毛サンプルに特有ですが、精製PBMCの再プログラミングにも適用されることがあります。...

凍結バフィーコートサンプルからの誘導多能性幹細胞株の再プログラミング

学ぶ冷凍保存されたHuESヒト胚性幹細胞の解凍と培養プロトコル。神経科学および発生生物学研究における細胞生存性と再現性の確保方法を理解できます。この手法は将来の神経科学研究の基盤となります。

冷凍細胞から出発培養：ヒトES細胞

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