大槽マウスでの脳脊髄液のシリアル収集のためのテクニック

この手順は、マウスに麻酔をかけ、手術部位を準備することから始まります。次に、マウスを脳定位固定装置に伏せて置きます。皮膚の矢状切開は後頭部よりも劣っており、正中線を通る皮下組織と首の筋肉は鈍く分離されています。

次に、体が固定ヘッドと135度の角度を形成するように体の後部が横たわり、CI胸骨マグナの硬膜がガラス毛細管で貫通され、CSFが収集されます。CSFサンプリング後、筋肉を再調整し、皮膚を縫合し、脱水症状を防ぐために約1ミリリットルの0.9%NACL生理食塩水を皮下に注射し、マウスが回復するまで温まします。こんにちは、私の名前はコロンビア大学のトップインスティテュートのカレン・ダフ博士の研究室のリューです。

今日は、マウスのシステムマグから脳脊髄の液体を収集する方法を紹介します。この手法により、同じマウスから2〜3か月の間隔で最大3回のシリアルCSFサンプルを収集できます。私たちの研究室では、この技術を使用して、アルツハイマー病のトランスジェニックマウスモデルのさまざまな年齢でのCSFAベータまたはタウレベルを決定し、これらの値を脳の値と相関させます。

最後に、CSFAベータまたはタウレベルが、疾患の進行およびマウスの治療試験の潜在的な生物学的マーカーとしての可能性に関心があります。それでは始めましょう。この手順では、マイクロピペット極性でキャピラリーを作成する必要があります。

ここで使用されるキャピラリーは、Sutter InstrumentsのBOAケイ酸塩ガラスB 175 10で、熱指数が300に、圧力指数が300に設定されたSutter P 87フレーミングマイクロピペットポーラのキャピラリーを引っ張ります。ガラスキャピラリーの長さは5センチで、先端は先細りになっています。毛細管の先端は、内径が約0.5ミリメートルになるようにハサミでトリミングします。

外科的処置は、麻酔中に腹腔内に投与されたケタミン100ミリグラム/キログラムとキシラジン10ミリグラム/キログラムでマウスを麻酔することから始まり、マウスを摂氏37度のインキュベーターで温め続けます。動物がつま先ピンチ離脱反射で完全に麻酔されていることを確認した後、首をテスト剃り、次にマウスをデビッドキンクのこのような定位固定装置に置きます。加熱パッドに直接触れる場合は、直腸温度プローブを挿入して、マウスの体温に応じてパッドからの熱を調整できるようにします。

ヘッドアダプターで頭を固定し、首の皮膚を10%ポビドンヨードと70%エタノールで3回綿棒で拭き取り、頭または後頭部の後部より下方の矢状切開を行います。次のステップは、鈍い鉗子を使用して解剖顕微鏡で実行する必要があります。皮下組織と筋肉を分離します MはベンターサービスとM大腸筋背筋で分離し、大胸骨の硬膜物質が露出するようにします マイクロリトラクターのペアを適切に使用して筋肉を離します。

最後に、頭を体に対して135度の角度にしてマウスを置きます。これで、マウスを CSF 収集する準備が整いました。マグノ胸骨からCSFを収集するこの技術は以前に発表されました。

Cは解剖顕微鏡下でAを1つにしています。硬膜物質は、延髄と主要な血管が見える、きらめく明確な逆三角形として現れます。スピネラ動脈 C字1 B.髄質と隣接するCSF空間の循環脈動が見られる。

滅菌綿棒で硬膜を乾かし、毛細血管をCI胸骨大動脈に浸透させます 動脈背スピネルの外側の硬膜物質。キャピラリーが正しく挿入されると、抵抗に顕著な変化が生じ、CSFがキャピラリーに流れ込みます。CSFを慎重に収集した後、キャピラリーを取り外し、内径1mmのポリエチレンチューブを使用して3ミリリットルのシリンジで接続します。

CSFを0.5ミリリットルのチューブに注入します。チューブにラベルを付け、すぐにドライアイスで凍結します。凍結したら、CSFをマイナス80°Cの冷凍庫に移します。

今示したサンプリング技術は非常に穏やかで、2〜3か月の間隔で同じマウスから後続のCSFサンプルを採取できます。したがって、首をサンプリングした後、筋肉と皮膚を再調整し、縫合糸で閉じる必要があります。切開部を縫合した後、約1ミリリットルの生理食塩水0.9%NACLを皮下に注入してマウスを再水和します。

マウスが回復するまで、マウスを摂氏約37度で温めておきます。手術後1日目と7日目に体重を監視します。マウスのシステムマグから脳脊髄液を採取する方法をお見せしました。

この手順を実行するときは、覚えておくべき3つの重要なことがあります。まず、マウスの頭部と体を定位フレームにきちんと配置して、サイマグナのエイターができるだけ露出できるようにします。次に、毛細血管でデュロメーターを貫通するときは、血管を慎重に避けてください。

そうしないと、サンプルが血液に汚染されます。最後になりましたが、低体温症を防ぐために、全手順でマウスを暖かく保つことを忘れないでください。低体温症はマウスに有害であるだけでなく、ベータ産生または背の高い低リン酸化関係を誘発することにより、結果に大きな影響を与える可能性があります。

さて、これで完了です。ご覧いただきありがとうございます、そしてあなたの実験に頑張ってください。