미생물 및 곰팡이 다양성
- 미생물 군집 구조 검사
- 시작하려면 할당된 배양 플레이트를 수집한 다음 그 중 하나에서 파라필름과 뚜껑을 제거합니다.
- 덮개를 덮지 않은 플레이트를 해부 현미경 아래에 놓고 플레이트의 각 사분면 내에 있는 개별 군집을 관찰합니다.
- 군체가 확인되면 표의 해당 열에 관찰된 군체 특성을 입력합니다. 표 1을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
- 그런 다음 다른 두 박테리아 종 각각에 대해 관찰을 반복합니다.
- 세 가지 박테리아 종의 그램 염색을 수행하려면 먼저 세 개의 현미경 슬라이드 끝에 각 박테리아 종의 이니셜, 이니셜 및 날짜를 표시하십시오. 가설: 이 실험에서 실험 가설은 그람 염색을 사용하여 다양한 박테리아 종과 모양을 설명할 수 있으며, 그람 양성 박테리아는 결정 보라색으로 보라색으로 염색되는 반면 그람 음성 박테리아는 사프라닌 카운터 스테인으로 인해 분홍색으로 나타날 수 있습니다. 귀무 가설은 모든 박테리아 유형이 두 가지 염색을 동일하게 유지하며 염색은 그 종이나 모양을 설명하는 데 도움이 되지 않는다는 것입니다.
- 첫 번째 얼룩을 시작하려면 취급하기 쉽도록 슬라이드에 클립을 부착하십시오. 각 박테리아 도말에 대해 세척 및 화염 살균 접종 루프를 사용해야 합니다.
- 두 개의 멸균 증류수를 슬라이드 중앙에 놓습니다.
- 루프를 다시 살균 한 후 한천의 접종되지 않은 부분을 여러 번 만져 루프를 식히십시오.
- 그런 다음 고립된 군체에서 소량의 배양물을 제거하고 슬라이드의 물과 혼합합니다.
- 슬라이드를 실온에서 건조시키고 화염을 통해 빠르게 통과시켜 도말을 가열합니다.
- 건조되면 슬라이드에 크리스탈 바이올렛 몇 방울을 피펫으로 떨어 뜨리고 2-3 분 동안 그대로 두십시오.
- 슬라이드 상단을 향하는 직접 흐름을 조준하여 슬라이드를 증류수로 조심스럽게 헹구어 물이 부드럽게 흘러내리도록 합니다. 물의 흐름을 얼룩에 직접 조준하지 마십시오.
- 다음으로, 슬라이드를 Gram의 요오드로 덮고 다시 2분 동안 그대로 둔 다음 증류수로 부드럽게 헹굽니다.
- 얼룩이 더 이상 씻겨 나가지 않을 때까지 95 % 에탄올로 슬라이드를 탈색합니다.
- 즉시 슬라이드를 증류수로 헹굽니다. 이렇게 하면 과도한 탈색이 제한됩니다.
- 그런 다음 사프라닌 카운터 스테인 몇 방울을 넣고 30 초 동안 그대로 두십시오. 이것은 존재하는 모든 그람 음성 세포를 염색합니다.
- 증류수로 슬라이드를 부드럽게 헹구고 흡수성 종이로 닦아내십시오.
- 다른 두 슬라이드를 같은 방식으로(6-17단계) 염색한 후 현미경으로 각각을 관찰합니다.
- 먼저 저전력 대물렌즈를 사용하여 대충 조정합니다. 이상적인 섹션을 찾으면 더 높은 배율로 이동합니다.
- 중간 배율의 대물렌즈로 도말을 추가로 이미징하고 조정한 후 도말에 직접 이멀젼 오일을 추가합니다. 참고: 오일은 최상의 현미경 사진을 제공하는 고출력 대물렌즈에 필요합니다.
- 이제 색연필을 사용하여 관찰된 박테리아를 적절한 확대 원에 그리고 관찰된 특성을 해당 열에 채우고 박테리아의 모양과 박테리아의 모양과 더 어두운 자주색 염색으로 식별되는 그람 양성 또는 분홍색 염색으로 식별되는 그람 음성인지 확인합니다. 표 2를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.
- 마지막으로 다른 두 개의 염색된 박테리아 슬라이드에 대한 관찰, 그림 및 특성화를 반복합니다.
- 곰팡이 구조 검사
- 인큐베이터에서 S. cerevisiae 플레이트를 제거하고 현미경 슬라이드에 물 한 방울을 놓습니다.
- 멸균 접종 루프를 사용하여 효모 필름을 물방울에 바르고 슬라이드 위에 커버 슬립을 놓습니다.
- 현미경 아래에 슬라이드를 가장 낮은 배율로 놓고 배율을 오일 이멀젼 설정으로 높여 개별 효모 세포를 확인합니다.
- 효모의 일반적인 모양과 구조를 관찰하고 발아에 의한 무성 생식을 겪고있는 세포를 식별합니다.
- 이제 적절한 배율 원에 셀을 그립니다.
- 효모 관찰이 끝나면 S. cerevisiae 슬라이드를 준비된 Ascomycetes apothecium 슬라이드로 교체하고 현미경을 가장 낮은 배율로 설정합니다.
- 색연필을 사용하여 asci 및 ascospores를 포함한 저배율 및 고배율로 구조를 그립니다.
- 마지막으로 단추 버섯인 Agaricus bisporus를 해부 현미경 아래에 놓고 pileus 또는 cap, 아가미, stipe 또는 줄기를 포함한 특징을 그립니다.
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- 표에 기록된 박테리아의 착색을 사용하여 어떤 종이 그람 양성이고 어떤 종이 그람 음성인지 확인합니다.
- 그런 다음 표에 기록된 모양을 보고 어떤 박테리아 종이 bacillus, coccus 또는 spirillum인지 확인하십시오.
- 다음으로 효모 세포의 그림과 박테리아 세포의 그림을 비교하십시오. 참고: S. cerevisiae와 같은 자낭균(Ascomycetes)문(phylum)의 효모는 무성생식을 할 수 있으며, 이는 현미경으로 세포의 발아를 통해 관찰할 수 있습니다.
- 효모 세포의 발아에 대한 관찰을 기록하십시오. 참고: 자낭균류는 유사분열과 반수체 포자 형성을 통해 유성생식을 할 수도 있습니다.
- 관찰한 포자 또는 아스키 형성에 대한 모든 관찰을 표에 기록하십시오.
- 참고: 담자균류(Basidiomycota phylum)의 곰팡이는 말뚝 아래에서 명확하게 관찰할 수 있는 아가미를 보여줍니다.
- pileus 아래에서 아가미를 나타내는 곰팡이 종을 기록하십시오.