इस प्रक्रिया का वर्णन कैसे murine अस्थि मज्जा से प्राथमिक hematopoietic सेल संस्कृतियों को स्थापित करने के लिए है और जीन Pulser MXCell electroporation प्रणाली का उपयोग अभिकर्मक द्वारा पीछा किया.
यह तेजी से स्पष्ट होता जा रहा है कि electroporation प्राथमिक कोशिकाओं में डीएनए प्लाज्मिड या siRNA परिचय का सबसे प्रभावी तरीका है. जीन Pulser MXcell electroporation प्रणाली और जीन Pulser electroporation बफर विशेष रूप स्तनधारी कोशिकाओं और मुश्किल transfect कोशिकाओं, जैसे प्राथमिक और स्टेम cells.This वीडियो में न्यूक्लिक एसिड transfect विकसित किया गया दर्शाता है कि कैसे murine अस्थि मज्जा से प्राथमिक hematopoietic सेल संस्कृतियों को स्थापित करने के लिए , और फिर उन्हें MXcell प्रणाली में electroporation के लिए तैयार है. हम जांध की हड्डी और टिबिअ अलग के द्वारा शुरू करते हैं. दोनों जांध की हड्डी और टिबिअ से अस्थि मज्जा तो harvested रहे हैं और संस्कृतियों स्थापित कर रहे हैं. संवर्धित अस्थि मज्जा की कोशिकाओं तो और विश्लेषण ट्रांसफ़ेक्ट हैं.
है के रूप में और अधिक जीनोमिक जानकारी उभर रहे हैं और siRNA जैसे नए उपकरणों को विकसित कर रहे हैं, physiologically प्रासंगिक कोशिकाओं का उपयोग कभी अधिक महत्वपूर्ण बन गया है रोग रास्ते, प्रोटीन, प्रोटीन बातचीत, और संकेत transduction की हमारी समझ को आगे. प्राथमिक कोशिकाओं ऊतकों या तरल पदार्थ से सीधे प्राप्त कर रहे हैं और इन विट्रो में खेती की जाती है. इन कोशिकाओं के तरीके, exogenous आनुवंशिक सामग्री के परिचय के माध्यम से सहित का एक संख्या में हेरफेर किया जा सकता है. यह तेजी से स्पष्ट होता जा रहा है कि सबसे प्रभावी तरीका प्राथमिक कोशिकाओं में डीएनए प्लाज्मिड या siRNA परिचय electroporation है है.
Electroporation बिजली दालों के लिए कोशिकाओं को उजागर क्रम में करने के लिए transiently कोशिका झिल्ली की पारगम्यता वृद्धि हुई है, जिससे exogenous nucleic एसिड सेल में प्रवेश करने के लिए अनुमति. अभिकर्मक के इस विधि के लिए अलग सेल प्रकार / लाइनों और, इस प्रकार, मस्तूल कोशिकाओं transfect करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है के रूप में के रूप में अच्छी तरह से किसी भी अन्य अस्थि मज्जा व्युत्पन्न सेल के बीच मतभेद के लिए समायोजित करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. इसके अलावा, वायरल की मध्यस्थता अभिकर्मक के विपरीत, electroporation ट्रांसफ़ेक्ट डीएनए के आकार पर सीमा लागू नहीं करता, न ही व्यापक तैयारी की आवश्यकता होती है. लिपिड मध्यस्थता अभिकर्मक के लिए इसके विपरीत, electroporation कम विषाक्त हो सकता है और ट्रांसफ़ेक्ट न्यूक्लिक एसिड के endosomal फँसाने में परिणाम नहीं कर सकते हैं.
जैव रेड MXcell electroporation प्रणाली विकसित की है विशेष रूप से इन कोशिकाओं के लिए. MXcell आप भिन्न परिस्थितियों करने के लिए अपने अभिकर्मक दक्षता और सेल व्यवहार्यता को अधिकतम अनुमति देता है. आदेश में अभिकर्मक दक्षता का अनुकूलन करने के लिए और कोशिका मृत्यु, वोल्टेज सहित electroporation मापदंडों के एक भीड़ को कम करने के लिए, समाई, प्रतिरोध, और नाड़ी की लंबाई और समायोजित किया जा सकता है मूल्यांकन.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Gene Pulser MXcell Electroporation System | Bio-Rad | 165-2670 | ||
Gene Pulser Electroporation Buffer | Bio-Rad | 165-2677 |