신경 유도는 뇌의 형성의 첫 단계입니다. 그것은 Hensen의 노드 (주최자), 신경 운명을 채택할에 인접한 조직을 지시하는 메커니즘이며, 신경 계통을 일으키다하는 즉. 이 비디오는 여자의 배아에서 신경 유도에 대한 분석을 보여줍니다.
이 논문에서
요약
초록
여자의 난자는 초기 배아 발달의 연구에 귀중한 도구입니다. 투명성, 접근성 및 조작 용이성, 그건 신경 시스템의 형성과 초기 patterning을 공부를위한 이상적인 도구가합니다. 이 동영상은 호스트에 그래프트 구성 조직하는 방법하는 Hensen의 노드 (여자의 배아에서 주최자가) 호스트 관할 ectoderm에 이식할 수 있습니다 방법을 보여줍니다. 주최자의 수술이 신경 유도 신호를 통해 신경 운명을 채택하는 조직을하신 나 overlying 지시합니다. 이 메커니즘은 신경 유도이라고하고, amniotes의 뇌 및 척수의 형성의 초기 단계를 구성합니다. 이 메소드는 본질적으로 여자의 putative 신경 유도하는 분자의 특성에 사용됩니다. 이 동영상은 신경 유도에 대한 분석에서 여러 단계를 보여주는, 첫째, donnor의 배아는 explanted과 요리에 박혀있다. 그런 다음, 호스트 배아는 새로운 문화에 대한 준비가되어 있습니다. 이식은 excised과 호스트 영역 pellucida 여백에 이식합니다. 호스트는 18-22 시간에 대한 양식입니다. 어셈블리가 고정되어 더 이상 응용 프로그램 (예에 원위치 하이브리드화)에 대한 처리됩니다. 이 방법은 원래 웨딩턴에 의해 고안되었다
프로토콜
I. 도식 개요 :
이 비디오는 여자의 배아에서 신경 유도에 대한 분석에서 여러 단계를 보여줍니다. 먼저, 호스트 배아는 새로운 문화에 explanted입니다 [NI1]. 그런 다음 donnor의 배아가 호수와 Hensen의 노드 (여자의 "구성")에 explanted됩니다 것은 형광 염료 DiI로 표시됩니다 [NI2]. Hensen의 노드가 donnor의 배아에서 excised입니다 [NI3]와 호스트 배아에 이식 [NI4, NI5]. 호스트 배아는 다음 donnor 조직 호스트 영역에서 이소성 축을 유도 가지고있는 기간이 지난 후 최대 22 시간에 대한 양식입니다 opaca [NI6]. 문화에 따라, 호스트 배아는 고정 및 DAB의 면전에서 photooxidation에 대한 처리 : DAB와 갈색 다음과 같은 반응이 될 사전 photooxidation [NI7]에 FITC의 형광 아래에 빨간색으로 나타납니다이 화학 반응, donnor ....
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토론
이 동영상은 신경 유도에 대한 분석을 수행하는 다른 단계를 설명합니다,이 분석은 본질적으로 여자의 putative 신경 유도하는 분자의 특성에 사용되며, 따라서 embryological micromanipulations 1-4을 이르기까지 애플 리케이션의 다양한 사용할 수 있습니다; 6 무너지고 새로운 신호 폭포로 7,8 모든 두뇌 형성하고 남은 신경 계통의 초기 단계에 대한 이해를 목표로.
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감사의 글
DP는 약물 남용에있는 국립 연구소에서 루스 Kirschstein 수상 1F32 - 01A1 DA021977의받는 사람입니다. 이 작품은 RHF에 마가렛 M. 알켁 재단에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 난자 | 동물 | Charles River Laboratories | 프리미엄 가임성 | 수정된 HH3+ (14시간) |
| 실체현미경 | 현미경 | Leica Microsystems | MZ9.5 또는 이와 유사한 제품 | |
| 하이브리다이제이션 인큐베이터 | 장비 | Robbins Scientific, SciGene | M1000 | 뒤집힌 Pyrex 접시와 500 ml ddH2O를 함께 사용하십시오.2비커 O |
| Marsh 자동 배양기 | 장비 | 리옹 | RX | |
| Pyrex 접시 | ||||
| 시계 제조공’50mm 유리 슬라이드 | 도구 | VWR international | 66112-060 | |
| 유리 링 | 도구 | 물리적 시설 관리 부서 | 유리 튜브(외경 27 mm, 내경 25 mm)를 4 mm 두께의 섹션으로 절단한다. 정밀 연마는 하지 않는다. | |
| 곡선 핀셋 (1) | 도구 | 전자현미경 과학 | 72991-4C | |
| 포셉 (2) | 도구 | Fine Science Tools | 11002-13 | 숫돌을 사용하여 끝을 뭉툭하게 만든 후 100ul의 미네랄 오일을 사용함 |
| 정밀 가위 | 도구 | Fine Science Tools | 14161-10 | |
| 플라스틱 배양 접시 | 도구 | Falcon BD | 353001 | |
| 고무 벌브 | 도구 | 전자현미경 과학 | 70980 | |
| DiI | 시약 | Invitrogen | D-282 | |
| 흡입 튜브 어셈블리 | 도구 | Sigma-Aldrich | A5177-5EA | |
| 마이크로–전극 추출기 | 장비 | Sutter Instrument Co. | Sutter Instruments P-97 화염 처리/갈색화 마이크로피펫 | |
| 파스퇴르 모세관 피펫 | 도구 | 전자현미경학 | 70950-12 | 화염 상에서 가장자리 둥글리기 |
| 배양 챔버 | 도구 | 파이오니어 플라스틱스(Pioneer Plastics) | 030C | |
| 모세관** | 도구 | Sigma-Aldrich | P1049-1PAK | |
| 미세해부용 나이프 | 도구 | Fine Science Tools | 10056-12 | 인시튜 하이브리다이제이션(in situ hybridization) 전 공동(cavity)을 천공하는 데 사용하십시오. |
| 미뉴트 핀 0.2mm 직경 | 도구 | Fine Science Tools | 26002-20 | 경화제 1부와 베이스 9부를 혼합한 후, 37°C에서 하룻밤(O/N) 동안 굳힙니다. |
| 디에틸피로카보네이트(depc) | 시약 | 전자현미경학 | 15710 | |
| Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 경화제 및 베이스 | Dow Corning | 0001986475 | 경화제 1분량과 베이스 9분량을 혼합한 후, 37°C에서 밤새(O/N) 정치하십시오. | |
| 디에틸피로카보네이트 (depc) | Acros Organics | 10025025 | PBS 1L에 DEPC 1mL를 첨가하고, 흔들어 섞은 후, 고압증기멸균한다. | |
| 16% PFA | 전자현미경 과학 | 15710 |
참고문헌
- Waddington, C. H. Experiments on the development of chick and duck embryos, cultivated in vitro. Phil. Trans. R. Soc. Lond. B. 221, 179-230 (1932).
- Waddington, C. H. Induction by the primitive streak and its derivatives in the chick. J. Exp. Biol
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