세포 생물학을위한 단백질의 Microcontact 인쇄

요약

Microcontact 인쇄는 소재 표면에 패턴 단백질 및 다른 분자로 광범위하게 사용됩니다. 우리는 유리에 fibronectin의 패턴을 스탬핑,이 과정의 기본 단계를 보여줍니다.

초록

패턴 단백질과 기판에 다른 biomolecules 수있는 능력은 세포외 환경의 공간적 복잡도를 캡처하는 것이 중요합니다. 와이트 그룹에 의해 microcontact 인쇄의 개발 (

프로토콜

1. 솔루션 및 자료 준비

이러한 단계는 사전에 몇 일 실시하여야한다.

1. 유리 coverslips. 지우지 감동과 함께 3 비율 및 온수 : 물, 1 혼합 : Coverslips는 Linbro 7X 세제의 솔루션으로 10 분 동안 침지하여 세척했다. Coverslips는 탈이온수와 함께 광범위하게 씻어서 후 6 시간 동안 450 ° C에서 구워되었습니다. 세라믹 얼룩 랙에에 coverslips을로드하면 (시약 참조)이 과정을 단순화.
2. 스탬프에 대한 단백질 솔루션입니다. 1 MG / ML 농도의 주식 솔루션 제조 업체의 지침에 따라 Reconstitute의 fibronectin.

2. topological 마스터에서 우표를 캐스트

이러한 단계는 사전에 몇 일 실시 수 있습니다. 이러한 조직 문화 요리로 덮여 접시에 저장 우표 패턴 업.

1. 압축, 여과 공기 또는 불활성 가스의 흐름을 사용하여 마스터에서 느슨한 먼지를 제거합니다.
2. 주인보다 단지 큰 플라스틱 접시의 바닥에, 마스터, 패턴 측면을 놓으십시오. 60 - 또는 100 - mm 조직 문화 요리가 잘 이러한 목적에 적합합니다.
3. 폴리스티렌 50 ML의 원심 관에서....

토론

microcontact 인쇄 과정은 patterning 기판의 다양한 분자의 광범위한 적용을 받으면, 개념 간단하고 매우 견고합니다. 그러나,이 과정은 예술의 무언가 남아있다. 만들 수있는 패턴의 특정 기하학이 단백질 패턴으로 적용, 무게, 도장 / 스탬프 조건은 모든 스탬핑 품질에 영향을 미칩니다. 예를 들어, 자주 큰 기능 그림의 오른쪽 상단 로고에서 볼 수 있듯이 패턴의 격차 결과에 적용도 약간의 무게. 1A. 반대로, 너무 많은 무게가 플라즈마 처리 단계가 생략하는 경우 두 번째 예를 들어, 특정 단백질 (예 : 항체 등)보다 정확하게 패턴을 features.As 패턴 사이의 지역에서 단백질의 의도 증착 그 결과, 스탬프의 처지와 붕괴의 원인이되며, PDMS는 친수성 ​​떠나. 유리에 fibronectin의 스탬핑이 과정의 기본적인 기법을 보여주는, 그러한 수정 및 최적화를위한 출발점이 여기에 제공됩니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
플라즈마 세척기		Harrick Scientific Products, Inc.	PDC-32G
데시케이터		Nalge Nunc international	5315-0150
PBS	시약	Invitrogen	10010-072
단백질 표지 키트	시약	Invitrogen	A30006
피브로넥틴	시약	Sigma-Aldrich	F2006
염색 랙	시약	Thomas Scientific	8542E40
커버슬립	시약	Fisher Scientific	12-544-12
Sylgard 184	시약	Ellsworth Adhesives	184 Sil Elast Kit
회절 격자	시약	Edmund Scientific	3040267