이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.
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이 논문에서
요약
프로토콜
당신이 시작하기 전에
- 다음과 같은 솔루션을 준비 : PBT (1X PBS에 0.1 %의 트리톤의 X100), PBTB (0.2 % PBT에서 BSA) 및 PBTN (PBTB에서 2 % NGS)을.
- Drosophila의 유충을 해부하다. Drosophila 애벌레 NMJ의 절개를 참조하십시오.
Immunohistochemistry
- PBT를 포함하는 1.5 ML 튜브에 애벌레로 이동합니다. PBT에서 15 분 동안 두 번 애벌레를 씻으십시오. 참고 : 세척하는 nutator 믹서에 1.5 ML 튜브를 놓습니다. pippetor와 액체를 제거하고 신선한 액체로 대체합니다.
- PBT를 제거합니다. 30 분 두 번 PBTB로 씻으십시오.
- PBTB를 제거합니다. 15 분 동안 두 번 PBTN로 씻으십시오.
- 1 시간 또는 밤새 4 º C에서 온도는 실온에서 PBTN에 희석 일차 항체에 품어.
- PBTB로 두 번 씻어. 참고 : 추가적인 솔루션을 씻어 신속하게 제거하실 수 있습니다.
- PBTB에서 15 분 동안 두 번 씻으십시오.
- 3....
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토론
그것은 NMJ의 시각화를 가능하게하기 때문에 Immunohistochemistry (IHC)는 NMJ 생물학 연구를위한 중요합니다. 이것은의 연결 멤브레인 (예 : HRP), presynapse (예 : CSP, SYT), 및 / 또는 postsynapse (예 : DLG)를 인식 항체를 사용하여 수행됩니다. 신호 분자, 구조 단백질, 또는 관심있는 소설 단백질도 얼룩 수 있습니다. 그렇다면 유전자가 변이된 또는 missexpressed하고, IHC는 시냅스 구조 및 / 또는의 연결 신호의 섭동를 검색할 수 있습니다.
Drosophila의 NMJ는 기본 구조와 기능을 조명 초기 연구부터 큰 인기를 얻고있다. 1-4은 Drosophila NMJ 연구에서 확인된 분자의 대부분은 척추 동물에 보존되어있다. 4 따라서, 통찰력이 연구를 통해 배운 Drosophila NMJ 많은 시스템에서 신경 생물학에 적용됩니다.......
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 실체현미경 “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| 광원 KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Dumont SS 핀셋 | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Dumont #5 핀셋 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Adams™ 뉴테이터 믹서 | BD Biosciences | 421105 | |
| 1번 정밀 칼 | X-Acto | 3201 | |
| 16번 칼날 | X-Acto | 216 | |
| ProLong Gold 항퇴색 시약 | Invitrogen | 36930 |
참고문헌
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
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