이 문서 potentiometric 염료 (DI - 8 - ANEPPS)를 사용 Langendorff - perfused 쥐 심장의 표면에 광학 이미지 조치 가능성이 운동에 높은 시간적 및 공간적 해상도 기법을 설명합니다.
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이 논문에서
요약
초록
전압에 민감한 형광 염료로 심장 표면의 광학 매핑은 실험 모델에서 전기 자극을 조사하기위한 중요한 도구가 될 것을 셀 문화 전체 - 장기 규모 범위
프로토콜
1 부 : 준비 솔루션 및 절연 perfused 심장 시스템
- 이전 [5, 6]를 설명된대로 실험의 아침, 크렙스 - Henseleit 솔루션의 4.0 L가 준비됩니다.
- 11 mMol / L 2,3 - butanedione monoxime (BDM)가 단계 1.1 준비 perfusate에서 decanted 크렙스 - Henseleit 솔루션의 1.0 L에 녹아있다.
- 크렙스 - Henseleit의 추가 150 ML은 단계 1.1 준비 perfusate에서 제거 5 몰 / L DI - 8 - ANEPPS (디메틸 sulfoxide (DMSO)에 용해 10 mMol / L 주식의 희석)로 혼합합니다.
- 5 % CO 2 가스, 이러한 3 솔루션은 물 외피 유리들은 41.0 ° C로 미리 예열 및 95 % 증가 O 2 μm의 필터링 0.2을 사용하여 잠수 버블러 (Radnoti)와 산소 아르 저수지 (Radnoti)으로 전송됩니다. 3 재고 저수지의 솔루션은 MasterFlex ™ L / S 연동 펌프와 낮은 흡수 실리콘 튜브 (콜 - 파머)와 벽 마운트 Langendorff 시스템에 펌핑하고 있습니다.
- 이전 조립, Langendorff 시스템 유리 (R....
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토론
anesthetized 쥐에서 마음의 제거는 심근 국소 빈혈을 피하기 위해 빠르게 수행되어야합니다. 국소 빈혈 또는 불충분 관상 동맥 재관류가 발생하면 심장은 가능성이 arrhythmias을 개발하고 infarcted 될 수 있습니다. 또한 이러한 마음 유익 레코딩 및 후속 분석을 위해 충분하지 형광 방출 표시됩니다. 염료를로드하기 전에, 심근 세포 전기 자극의 안정성에 대한 physiologic 전해질 환경을 설정하고 유지하기 위해 충분히 크렙스 - Henseleit 솔루션 perfused해야합니다. perfusate의 정확한 준비는 적절한 장기 생존과 기능을 유지하기 위해 필요합니다. 전해질 농도 또는 perfusate의 불충 분한 필터링의 차이는 아마도 치명적인 심근 부전 및 심장 리듬 장애로 이어질 것입니다. 광학 녹음의 경우 심장이 완전히 전압에 민감한 염료로로드해야합니다. 이 챔버는 관상 동맥에 의해 잘 perfused되지 않는 이것은 심방 myocardium 특히 중요합니다. 우리는 심방의 추가 내부 cavit.......
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공개 사항
동물 실험은 어린이 병원 보스톤에있는 기관 애니멀 케어 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.
감사의 글
그리고 어린이 병원 보스턴에서 심장 전도 기금에 기부,이 작품은 연구 국립 보건원에서 보조금 (HL088206 HL068915)에 의해 지원됩니다.
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| CardioCMOS-SM128f | 장비 | RedShirtImaging, LLC | ||
| CardioPlex 소프트웨어 | 장비 | RedShirtImaging, LLC | ||
| LUXEON LED 광원 460-490 nm | 장비 | Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA | LXHL-PB02 | |
| ECG 증폭기 Type 689 Hugo Sachs Elektronik | 장비 | Harvard Apparatus | 730149 | |
| 이색 거울 505 nm | 장비 | Semrock | FF505-SDi01-25x36 | |
| 방출 필터 605 nm 롱패스 | 장비 | SciMedia | ||
| 측면 THT (THT Sideways) | 장비 | 사이미디어 | 25 BM-8 | |
| 미니 볼 조인트 홀더 | 장비 | Harvard Apparatus | BS4 73-0177 | |
| 소형 자극 전극 세트 | 장비 | Harvard Apparatus | BS4 73-0160 | |
| BM-6 벤치탑 진동 격리 플랫폼 | 장비 | Technology Inc., Inglewood, CA 90301 | 25 BM-6 | |
| 단극 심전도 전극 | 장비 | Harvard Apparatus | BS4 73-0200 | |
| 롤러 펌프 SCI 400 | 장비 | Watson-Marlow Pumps Group | 401U/D1 | |
| 롤러 펌프 MasterFlex Easy Load II | 장비 | Cole-Parmer | 모델 77201-60 | |
| Marprene 튜빙 #14 | 장비 | Watson-Marlow Pumps Group | 902.0016.016 | |
| MasterFlex 튜빙 | 장비 | PharMed, Westlake, OH 44145 USA | 06485-25 | |
| S48 사각 펄스 자극기 | 장비 | 그라스 테크놀로지스(Grass Technologies) | 모델 S48 | |
| SIU5 RF 변압기 절연 장치 | 장비 | 그래스 테크놀로지스 | 모델 SIU5 | |
| 5리터 워터 재킷 저장조 | 장비 | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-5 | |
| 2리터 워터 재킷 저장조 | 장비 | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-2 | |
| 0.5 리터 워터 재킷 저장조 | 장비 | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-0 | |
| 0.25리터 워터 재킷 리저버 | 장비 | Radnoti Glass Technology Inc. | 120142-025 | |
| 10 ml 가열 코일 | 장비 | Radnoti Glass Technology Inc. | 158822 | |
| 컴플라이언스 버블 트랩 | 장비 | Radnoti Glass Technology Inc. | 130149 | |
| 루어 분리형 캐뉼라 | 장비 | Harvard Apparatus | 72-1444 | |
| 3방향 스톱콕, FLL-MLT, 포트 커버 없음 | 장비 | Harvard Apparatus | BS4 72-2630 | |
| 열전대 온도계 | 장비 | Cole-Parmer | WU-91100-40 | |
| Ultra Fine IT-시리즈 플렉시블 마이크로프로브 | 장비 | PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA | IT-24P | |
| 오실로스코프 Tektronix TDS 1002 | 장비 | Tektronix, Inc. | TDS 1002B | |
| 2,3-부탄디온 모노옥심 | 시약 | Sigma-Aldrich | B0753 | |
| Ketamine HCl | 시약 | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| 자일라진 | 시약 | Lloyd, Inc. | LB15705A | |
| E-TOXA-CLEAN® | 시약 | Sigma-Aldrich | E9029 | |
| Di-8-ANEPPS | 시약 | Invitrogen | D-3167 |
참고문헌
- Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. Optical imaging of the heart. Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).
- Hucker, W. J. Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction. Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).
- Entcheva, E., Bi....
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