이 동영상은 문서 소량 (~ 1 L) 물 기둥에서 미생물 바이오 매스의 여과.
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이 논문에서
요약
초록
흐름은 하류 미생물 커뮤니티 해안 해양 물, 영양 및 추적 가스 분석의 수집과 함께 시작됩니다. 오늘의 데모 샘플 사니치 후미에 HMS 존 스트 리클 랜드 운영의 갑판에서 수집되었다. 이 동영상은 문서 소량 (~ 1 L) 물 기둥에서 미생물 바이오 매스의 여과. 바이오 매스의 크기 수업 컷 - 오프 필터 0.22 μm의 아래로 수집하므로, 여기에는 사전에 여과 단계가 없습니다 : 프로토콜은 큰 볼륨 샘플링 프로토콜 하나의 큰 차이와, 앞에서 설명한의 확장 기능입니다. 샘플 핵산 분석에 이상적입니다 이런 방식을 수집했습니다. 설정, 여과 및 정리 단계는 각 20~30분 정도 걸릴. 8 최대 샘플은 동시에 필터링 수, 동시에 두 연동 펌프를 사용하는 경우. 샘플링 여행 사이의 biofilm 형성을 방지하기 위해, 모든 여과 장비는 희석 HCL 및 탈이온수로 씻어서 바로 사용 후 autoclaved해야합니다.
프로토콜
- 여과 장치의 설정
- 필터링하기 전에 먼저 전체 병으로부터 응축을 닦아 그것을 달다
- 다른에있는 펌프의 한쪽 압력솥 빈, 그리고 폐기물 플라스크를 놓습니다.
- 다음 압력솥 빈의 전체 샘플 병을 배치하지만, 아직 병 뚜껑을 제거하지 마십시오.
- 튜빙의 luer 끝이 술병에 수 있도록 연동 펌프를 통해 튜빙을 전달합니다.
- 핀셋을 사용하여 살균 25 ML의 피펫에서 목화를 제거하고, 튜브의 다른 끝에 피펫을 첨부합니다.
- 해수 여과
- 해수를 필터링 시작하려면 용기를 열고 피펫을 삽입합니다. 펌프의 전원을 켜고 1 흐름 속도를 설정할 수 있습니다. 물이가 올바른 방향으로 나오지되도록보세요.
- 물 ~ 100 ML은 전체 튜브 통과하도록 허용합니다.
- 펌프를 끄고 튜브의 자유로운 끝에 남자 luer 피팅에 Sterivex 필터를 첨부합니다.
- 어떤 물이 병에 남아되지 않습니다 때까지 계속 필터링.
- 필터 저장
- 필터를 저장하려면 먼저 30-60 ML의 주사기와 함께 남아있는 물을 추방.
- Parafilm와 Sterivex 필터의 바닥을 봉쇄해. 피펫을 사용하여 시약의 저장뿐만 아니라를 위해 필터의 공간 ~ 200 UL을 유지, 필터 1.8ml 용해 버퍼를 추가합니다.
- 그런 다음, Parafilm의 작은 조각으로 Sterivex 필터의 상단을 밀봉하고, 날짜와 샘플 식별과 필터를 라벨.
- -80에 사전 라벨 50 ML 팔콘 튜브에 필터를 저장 ° C
- 정리
- 0.1 % HCL을 포함하는 플라스크에 25 ML의 피펫을 삽입하고, 펌프를 전환합니다.
- HCL 세척 후, autoclaved 물을 튜빙을 씻어.
마지막으로, 측정 및 필터를 통과 물의 볼륨을 계산하기 위해 지금 빈 1L 병의 질량을 기록합니다.
대표 결과 : 각 1 L의 물 샘플은 0.22 μm의보다 큰 바이오 매스를 포함 한 Sterivix 필터를 산출. 이것은 이후 DNA 추출 및 분석을위한 용해 버퍼에 저장됩니다. 최종 결과 한 Sterivix의 용해 버퍼에 저장된 1 리터 병 당 필터 및 DNA 추출을위한 준비로 구성되어 있습니다. 필터는 0.22 μm의보다 큰 바이오 매스가 포함되어 있습니다. 필터는 -80 ° C 이전 에드나 추출 속도로 저장할 수 있습니다.
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토론
그것은 달리 장비를 부식 것이다 소금물의 느린 흔적을 제거하는 데 사용 후 젖은 수건으로 벤치와 펌프를 닦아 필수적입니다. 절차는 간단하지만, 시간 요구 사항이 필터링되는 예제에서 바이오 매스이나 먼지의 농도에 따라 광범위한 수 있습니다.
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공개 사항
저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.
감사의 글
우리는 해안과 열린 바다 바닷물의 낮은 산소 지역에 지속적인 연구를 지원하기위한 혁신, 브리티시 컬럼비아 기술 개발 기금과 국립 과학 및 캐나다의 공학 연구 협의회 (NSERC)에 대한 캐나다 재단 감사드립니다. 도스는 NSERC, 킬람와 툴라 기초 미생물 다양성과 진화에 대한 투자 센터에서 장학금으로 지원했다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 연동 펌프 | Masterflex (Cole Palmer) | 77913-20, 77200-62, 77200-04 | |
| Tygon LFL 튜빙 | Masterflex (Cole Palmer) | 06429-24 | 여과 장치용 |
| 호스 클램프 | Cole-Parmer | 0683204 | 여과 장치용 |
| 1/4” x 3/16” 파이프 어댑터 | Cole-Parmer | 31702-20 | 여과 장치용 |
| 폴리프로필렌 프리필터 하우징 | ADVANTEC | 501200 | 여과 장치용 |
| 금속 루어 피팅 (호스 끝단-수루어 락) | Cole-Parmer | 31507-27 | 여과 장치용 |
| 2“ 자석 | 여과 장치용 | ||
| 3포트 카보이 캡 | 여과 장치용 | ||
| GV 0.22 μm STERIVIX 필터 | EMD Millipore | SVGV01R5 | |
| 47 mm 직경 2.7 μm GF/D 필터 | Whatman, GE Healthcare | 1823047 | |
| 용해 버퍼 | 0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3) | ||
| 0.1 % HCl | 여과 후 세척용 | ||
| 고압증기멸균수 | 여과 후 세척용 |
재인쇄 및 허가
