교미 및 tetrad 분리는 유전자 분석을 위해 필요합니다 Chlamydomonas reinhardtii. 여기 gametogenesis, 짝짓기, 접합자 발아 및 tetrad의 해부에 대한 표준 방법을 보여줍니다. 이 프로토콜은 덜 익숙한 과학자 유전 방식을받을 수있는 것입 단계의 쉬운 따라 시리즈로 구성되어 있습니다 Chlamydomonas.
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이 논문에서
요약
프로토콜
1 부 : gametogenesis에 대한 종자의 준비
참고 : 모든 조작은 실온에서 실시한다. 높거나 낮은 온도는 발아 접합자의 속도에 영향을 미칠 것이며, 부정적인 생존에 영향을 줄 수 있습니다.
중요한 고려 사항 : 성관계를 할 수있는 변종이 견고하게 성장 및 곰팡이 또는 세균 오염 무료입니다하는 필수 좋습니다. 변종은 정기적으로 전송되지 않은 경우, 풍부한 매체에 통로 gametes의 생성을 선행해야합니다.
- 성관계를하는 종자는 TAP 판 (100 × 15 ㎜), 플레이트 당 1-2 종자로 전송됩니다. 세포는 가로 1cm에 대해 집중적으로 스트립에서 성장한다.
- 견고하게 성장하는 세포의 두꺼운 층이 존재 때까지 탭 접시에 부화는 중간 전송 필요한 경우와 계속해야합니다. 일반 사용 야생 형 변종은 며칠없이 구절에만 걸릴 수 있습니다 반면 최근 passaged되지 않은 변종이 한 구절 1 주일 총 필요할 수 있습니다. 광 구분 돌연변이 추가 시간이 필요할 수 있습니다.
- 질소에 대한 결함되며 gametogenesis를 유도하기 위해 시작합니다 N10 플레이트에 TAP 플레이트의 모든 세포를 전송합니다. 그들은 TAP 판에 존재했다만큼, 두꺼운 슬래브로 세포를 전송합니다. 이....
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토론
유전자 분석 Chlamydomonas에서 간단하지만, 그것은 특정 기술이 gametes와 별도 tetrad의 자손을 생성해야합니다. 건강 변종과 함께, 기술은 쉽게 찾았습니다. 일부 돌연변이 변종으로, 그것은 예술의 더되고, 독자들은 역사 노트와 실용적인 힌트에 대한 최근 출판 Chlamydomonas의 Sourcebook의 볼륨 1을 참조해야합니다. 또한, 그것은 기본적인 테마에 많은 변화 접합자 유통 및 해부의 패턴, 유도 gametogenesis하는 방법에 이르기까지, 위에서 설명한이있다는 것을 지적해야합니다. 궁극적으로, 각 연구자들은 편안 지대를 발견하거나, 실험실 특정 프로토콜에 적응.
위에서 설명한 특정 기술적인 정보는 되풀이해야합니다. 특히, 세포가 건강하고 감염없이해야합니다. 이곳은 오랜 기간 동안 교차되지 않은 변종이 잘되지 않을 수 있습니다 메이트 연구소 - 적응하고, 수질도 gametogenesis에 영향을 미칠 수있는 것.......
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공개 사항
저자들은 공개할 이해관계가 없습니다.
감사의 글
이 프로토콜은 인스티투트 드 Biologie Physico - Chimique, 파리, 프랑스의 프란시스 - 엉드헤 Wollman의 실험실에서 배운 기술을 기반으로합니다. 저자는 원래 Chlamydomonas 유전자 기술에 DBS를 도입 재클린 지라 - Bascou에 분께. 저자 실험실에서 Chlamydomonas 연구는 국립 과학 재단 (National Science Foundation)의 상을 MCB - 0646350에서 지원됩니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| CC-125 | 교배형 plus 균주 | Chlamydomonas Stock Center | ||
| CC-124 | 교배형 minus 균주 | Chlamydomonas Stock Center | ||
| Tris-Acetate-Phosphate (TAP) | 배양 배지 | |||
| N10 | 배양 배지 | |||
| Difco agar | 시약 | |||
| Fisherbrand 스테인리스강 블레이드 | 도구 | Fisher Scientific | 08-916-5B | |
| BD 외과용 블레이드 핸들 | 도구 | Fisher Scientific | 08-914-5 | |
| Fisherbrand 금속 메스 | 도구 | Fisher Scientific | 08-920A |
참고문헌
- Harris, E. H. The Chlamydomonas Sourcebook: Introduction to Chlamydomonas and Its Laboratory Use. Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. , 2nd Edition, Academic Press. San Diego, CA. Volume 1 119-273 (2005).
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재인쇄 및 허가
