배아 쥐의 두뇌 집합의 문화 시스템을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 집계에 Multipotent progenitors 개발하고 뉴런, astrocytes 및 oligodendrocytes로 구별하실 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
중추 신경계의 성숙 뉴런과 glia (CNS)에 progenitors의 recapitulates 개발과 차별화는 axo - glial 상호 작용, 속성과 multipotent progenitors의 분화, 그리고 oligodendroglial의 진행을 조사 neuroscientists위한 강력한 플랫폼을 제공하는 것이 체외 시스템 세포 및 분자 수준에서 세포 혈통. 우리는 여기 3~4주에 혈청이없는 배지에서 유지 수 있으며, 신경 세포 - glia 상호 작용과 CNS의 myelination을 연구하는 모델로 저희 연구실에서 사용되는 배아의 쥐 forebrains에서 CNS의 집계 문화 시스템을 설명합니다. 이 비디오 클립은 E16 쥐의 두뇌에서 이러한 CNS의 집계 문화를 분리하고 성장하는 방법을 보여줍니다. 또한, 동일한 뇌 해부에서 매우 풍부한 정기 dissociated의 연결을 문화가 쉽게 얻을 수 있으며, 다양한 연구에 사용 CNS의 뉴런 또는 다른 세포 공동 배양에 사용.
프로토콜
절개 전에 준비
수술 도구 : 압력솥의 모든 해부 가위와 집게를 소독
Coverslip 청소 :
- 최소 24 H에 대한 33% HCL에 1L 잔디 비커의 모든 coverslips을 (24 잘 접시 직경 15mm) 소크
- 모든 잔류 HCL을 제거 가끔 흔들어 10 분 물을 실행하는 와시
- Millipore 물로 헹굼
- 물을 배수하다
- 95~98% 에탄올에 coverslips 소크
- 플랫 플레이트와 공기의 깨끗한 조직 전송 coverslips은 coverslips을 건조
- 알루미늄 호일과 압력솥와 커버, 유리 비커에 coverslips을 전송
참고 : Coverslips이 단계에서 저장할 수 있습니다 - 문화 접시에 개인 coverslip를 놓습니다. 코팅 준비
Coverslip 코팅 :
- PBS 및 필터 - 소독 (0.22 μm의)와 폴리 - D - 라이신 100 X 주식 (PDL, -20 ° C에서 al....
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토론
초기 연구는 시냅스 및 회전 - 중재 부유 집계 문화 1 성숙 myelin 형성을보고했다. 여기에 설명된 CNS의 집계 문화 시스템은 세포 개발, 마이 그 레이션 및 체외에서 분화의 분석을 촉진하기 위하여 전통적인 2D 문화의 편의와 입체 집계에 multipotent 전구 세포의 혈청이없는 성장을 결합한 제품입니다. 체제가 신경 전구체에 대한 수정하여 사용할 수 있습니다 세포 연구 및 신경 세포 - glia 상호 작용에 조사를 위해. 예를 들어, oligodendrocyte progenitors으로 유전자 변형 세포는 2 집계 문화에 추가할 수 있습니다. 이러한 microglia 및 macrophages 또는 뉴런과 glia의 개발 및 차별화에 대한 각종 시약으로 면역 세포의 영향도 공부하실 수 있습니다. 정화 망막 신경절 세포의 Reaggregates은 최근 다른 세포 3의 부재에 oligodendrocytes과 cocultures에서.......
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감사의 글
이 연구는 텍사스 A & M 대학에서 시작 펀드로 일부 자금되었습니다
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참고문헌
- Matthieu, J. M. Myelination in rat brain aggregating cell cultures. Neuroscience. 3, 565-56 (1978).
- Chen, Y. ing Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protocols. 2, 1044-10 (2007).
- Watkins, T. A., Emery, B., Mulinyawe....
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재인쇄 및 허가
