높은 품질과 인간 아일 레츠의 적절한 수량을 달성하는 것은 성공적인 아일릿 이식을 위해 유명 전제 조건 중 하나입니다. 이 비디오에서는, 우리는 단계별로 설명을 인간의 췌장 아일릿 절연 (부분 II : 인간 아일 레츠의 정화 및 문화)에 대한 절차를 수정 자동화된 방법을 사용하여.
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이 논문에서
요약
초록
1 형 당뇨병의 관리는 매년 100여 억 달러를 비용, 모두 개인과 사회에, 부담합니다. 포도당 모니터링 및 새로운 인슐린 공법의 광범위한 사용에도 불구하고, 많은 사람은 여전히 파괴적인 보조 합병증을 개발합니다. 췌장 아일릿 이식은 당뇨병 환자에서 정상적인 혈당 조절 근처에 복원할 수 있습니다
프로토콜
1. 아일 레츠의 정제
- 아일릿 정화 절차를 시작하려면, COBE 가방을 읽어 녹색 튜브를 제외한 모든 튜브 클램프, 0로 1,500 속도를 설정하고 슈퍼.
- 후드에는 펌프와 그라디언트 비커를 설정하고 녹색 튜브에 수집 튜브를 연결합니다.
- "회전"은 다음 앞에 비커에 Ficoll 1.100 110 ML을 추가 푸시하고, COBE 가방을로드하기 위해 펌프를 시작 이제 ficoll 1.100의 로딩이 시작할 수 있습니다. Ficoll이로드되면서, 슈퍼를 눌러 펌프를 정지, 펌프 헤드를 unclamp 100에 슈퍼 제한 속도를 설정합니다.
- ficoll이 비커에 도달하고 모든 공기가 펌프 헤드에서 튜브, 다시 클램프에서 퇴학 경우. 3000 회전 속도, 그리고 슈퍼 아웃 속도 0으로 설정합니다.
- 지금은 전면 비커에 무거운 그라디언트를 따르고하여 그라디언트를 로드할 준비합니다. 약간 모든 공기를 제거하는 두 비커 사이의 클램프를 놓습니다. 그런 다음 다시 비커에 빛을 그라데이션을 따라줘.
- 자기 활동가 켜고, COBE 기계에 "스핀"을 누르 두 비커를 연결하는 튜브의 클램프를 제거하고, 시각적으로 무겁고 가벼운 그라디언트가 혼합되어 있는지 확인합니다.
- 그라디언트가 혼합 시작되....
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토론
인간 아일릿 절연의 기술에 상당한 진보에도 불구하고, 아일릿 수율이 높은 변수 및 예측 남아 있습니다. 소화 췌장 조직의 정화는 이식을위한 성공적인 효소 소화 후 충분한 이슬 미사를 복구하는 데있어 매우 중요합니다. 매우 순수한 인간 아일 레츠의 뛰어난 복구이 방법을 사용하여 입증 되었기 때문에 UIC 정화 방법을 권장합니다. 또한, 소화 조직의 최대 50 ML 따라서 격리에 사용되는 총 시간을 단축하여 인간 아일 레츠의 국소 빈혈 - 관련 부상을 최소화 정화를위한 실행 단일 Cobe에 로드할 수 있습니다.
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감사의 글
시카고 일리노이 대학에서 창립뿐만 아니라 지원 아일릿 세포 자원 센터 NIH 그랜트 (RFA - RR 05-003), 크리스토퍼 재단 Efroymson 재단과 Tellabs 재단으로.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 원심분리기 | 장비 | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Cobe 2991 세포 프로세서 | 장비 | Gambro. BCT | 2556 | 췌도 정제 |
| MZ6 도립 현미경 TLBD4.1 | 장비 | Leica Microsystems | 4103 | |
| 2 mm 그리드 세포 배양 접시 | 장비 | Nalge Nunc international | 174926 | 췌도 계수 |
| Digital Sight DS L1 | 장비 | Nikon Instruments | 217267 | |
| COBE 백 | 일회용 장비 | O.R. Solution | 66707003 | |
| T175 배양 플라스크 | 일회용 장비 | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| 위스콘신 대학교(UW) 용액 | 시약 | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Hank’s 완충 염 용액 (HBSS) | 시약 | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | 시약 | Bichrom AG | L6155 | |
| M199 배지 (세척액) | 시약 | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| 최종 세척/배양 배지 | 시약 | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| Dithizone | 시약 | Sigma-Aldrich | D5130 |
참고문헌
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
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