꿀벌은 appetitive 후각 학습 패러다임 (당 시설)에서 시설 수 있습니다. 자극과 같은 냄새를 사용하여, 우리는 동시에 칼슘 이미징이 버섯 신체 뉴런에서 냄새 evoked 활동을 측정하는 데 사용하는 동안 기록되는 행동 방식을 설립 생체내에.
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이 논문에서
요약
초록
생체내 및 반에서 칼슘 이미징에 대한 생체내 준비가 Joerges, Küttner 및 Galizia에 의해 우리가 실험실에서 개발되었습니다의 이상 십년 전, antennal 엽 1 냄새 evoked 활동을 측정합니다. 그때부터, 그것은 지속적으로 세련되었고 비 두뇌에서 다른 neuropiles에 적용. 여기서 우리는 현재 dextran 결합 칼슘에 민감한 염료를 (Fura - 2)를 사용하여 버섯 신체 뉴런의 활동을 측정하기 위하여 실험실에서 사용되는 준비를 설명합니다. 우리는 retrogradely 자신의 axons 또는 소마 지역에 염료를 주입하여 버섯 신체 뉴런을 얼룩. 우리는 에어컨 PER 사용하여 꿀벌을 양성 볼 수 있습니다있는 준비를 달성하기 위해, invasiveness을 줄이는 데 중점을 둡니다. 우리는 PER (M17) 2를 제어하는 근육에서 전자 myograms을 기록하여 행동 반응을 모니터링하고 정할 수 있습니다.
생리 실험 후 몇 군데 구조는 뉴런의 신원을 주소로 공촛점 스캐닝 현미경을 사용하여보다 상세히 조사하고 있습니다.
프로토콜
비 준비 및 백 - 채우기
- 고정을위한 얼음 하이브와 감기에 꿀 비 foragers을 관람해보세요.
- 플렉시가 실 3 녹화에 탑재합니다. 낮은 융점 하드 왁스로 녹음 챔버 벽에 눈과 흉부을 수정.
- 일반적으로 전기 생리학 사용으로 유리 모세관을 당겨 및 CA의 팁 직경을 얻는 끝에 휴식. 10μm. 염색 붙여있는 모세관의 끝부분을 커버. 다이 붙여넣기 Fura - 2 dextran과 리신 고칠수 tetramethylrhodamine dextran의 10시 1분 혼합물로 구성되어 있습니다.
- 얼룩 절차에 대한 세밀한 점 또는 N - eicosane와 안테나를 무력화. 두뇌 위의 표피의 일부를 제거하고 버섯 본문에 대한 액세스를 허용하는쪽으로 분비 및 기관 밀어.
- 소마 또는 버섯 신체 뉴런의 axonal 지역 중 하나에 모세 혈관을 주입. 이것은 무료로 손으로 일을하거나 마이크로 조작하는 사람을 사용하실 수 있습니다. 그런 다음 머리를 캡슐에 표피 조각을 복원하고 안테나를 푸세요.
- 20 적어도 4 시간 동안 humidified 경우에 그들을 저장하기 전에 야간 이상 30 % 자당 솔루션 꿀벌 먹이 ° C.
생체내 이....
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토론
이 프레 젠 테이션에서 우리는 꿀벌의 생체내 칼슘 신호에 조사하기위한 모든 단계를 통과했습니다. 우리는 버섯 몸의 신경이 기술을 적용하지만, 이미지는 얼룩 기술이 확립 수있는 모든 뉴런에서 할 수 있습니다. 우리는 벌꿀 꿀벌의 후각 경로의 뉴런에 주력했습니다. 실험은 모든 암실에서 수행됩니다. 세트는 최대 꿀벌의 광학 인식 범위 밖으로 거짓과 염료를 자극하지 않는 긴 파도가 빛으로 조명됩니다. 실리콘 예를 공기 방울 들어, 형광 유물을 방지하는 것이 중요합니다.
이 시스템의 주요 장점 중 하나는 공간과 시간적 해상도를 가진 뉴런의 활동에 대한 정보를 맛볼 수있는 가능성이다. 뉴런의 예 : 학습 관련 소성가 조사되어야하는 때 동시에, 우리는 꿀벌에 관련된 행동을 관찰할 수 있습니다. 그러나, 공간과 시간적 해상도가 제한됩니다. 생체내 칼슘 이미징 사용하여, 실험 시간이 제한됩니다. 세포외 electrophysiol.......
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감사의 글
이 작품은 DFG에 의해 자금입니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 저융점 하드 왁스 Deiberit 502 | Dr. Böhme Schöps Dental GmbH | ||
| FURA-2 덱스트란 칼륨염, 10 000 MW | Invitrogen | F-3029 | 차광 보관. |
| 테트라메틸로다민 덱스트란 10 000 MW | Invitrogen | D-3312 | 차광 보관. |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | |
| Kwik Sil 접착제 | World Precision Instruments, Inc. | KWIK SIL | |
| 이미징 설정 | TILL Photonics | ||
| CCD 카메라 | Imago | ||
| CED | Texas Instruments |
참고문헌
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee's proboscis reflex by electromyiographic recordings....
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재인쇄 및 허가
