이식에 의해 키메라 Zebrafish의 배아를 생성

요약

blastula 또는 gastrula 단계에서 이식의 대상이 키메라 zebrafish의 배아를 생성하는 단계별 가이드.

초록

복잡한 개발 프로세스에 대한 통찰력을 얻을하는 데 사용되는 가장 강력한 도구 중 하나는 키메라 배아의 분석이다. 키메라는 하나 이상의 동물에서 세포를 포함하는 유기체로 정의되며 모자이크는 하나 이상의 유전자형의 세포는 일반적으로 야생 - 타입과 돌연변이 혼합되어있는 키메라의 한 종류입니다. zebrafish에서 chimeras은 즉시 적절한 배아 단계에서 호스트 배아에 기증자의 배아에서 세포 이식에 의해 만들 수 있습니다. 표시 기증자 세포는 한 세포 단계의 배아로 같은 형광 염료로 혈통 마커,의 주사에 의해 생성됩니다. 표시 기증자 세포는 기증자의 배아에서 제거하고 화합물 또는 해부 현미경 중 하나에 장착된 오일 제어 유리 피펫을 사용하여 레이블이 지정되지 않은 호스트 배아에 도입하고 있습니다. 기증자 세포가 어떤 경우에는 잘 설립 운명의지도에 따라 호스트 배아에 이식 사이트를 선택하여 개발 blastula 또는 gastrula 무대 호스트 배아의 특정 지역 또는 조직을 대상으로 수 있습니다.

프로토콜

blastula 또는 gastrula 단계에서 이식의 대상이 키메라 zebrafish의 배아를 생성하는 단계별 가이드.

복잡한 개발 프로세스에 대한 통찰력을 얻을하는 데 사용되는 가장 강력한 도구 중 하나는 키메라 배아의 분석이다. 키메라는 하나 이상의 동물에서 세포를 포함하는 유기체로 정의되며 모자이크는 하나 이상의 유전자형의 세포는 일반적으로 야생 - 타입과 돌연변이 혼합되어있는 키메라의 한 종류입니다. zebrafish에서 chimeras은 즉시 적절한 배아 단계에서 호스트 배아에 기증자의 배아에서 세포 이식에 의해 만들 수 있습니다. 표시 기증자 세포는 한 세포 단계의 배아로 같은 형광 염료로 혈통 마커,의 주사에 의해 생성됩니다. 표시 기증자 세포는 기증자의 배아에서 제거하고 화합물 또는 해부 현미경 중 하나에 장착된 오일 제어 유리 피펫을 사용하여 레이블이 지정되지 않은 호스트 배아에 도입하고 있습니다. 기증자 세포가 어떤 경우에는 잘 설립 운명의지도에 따라 호스트 배아에 이식 사이트를 선택하여 개발 blastula 또는 gastrula 무대 호스트 배아의 특정 지역 또는 조직을 대상으로 수 있습니다.

파트 1 : 1 - 세포 단계에서 Zebrafish 배아를 주입.

토론

이식이 타겟 chimeras를 생산하는 데 사용할 수있는 용이성은 척추 모델로 zebrafish의 위대한 능력 중의 하나입니다. 위에서 설명하지 않은이 프로토콜의 수정 접합자의 개발에 필수적인 역할과 함께 유전자에 대한 모성 유전자 기능의 분석을 수 있습니다. 이러한 돌연변이 물고기가 성인까지 생존 수 있기 때문에 돌연변이 세포의 'germline의 클론 "을 작성, 기타 야생 형 호스트 배아에 돌연변이 germline을 전송하는 것이 필요합니다. 생성 germline 모자이크는 야생 형 호스트 배아에 돌연변이 기증자로부터 이식 원시 배아 세포를 포함한다. 배아에있는 다른 모든 세포 lineages 달리 배아 세포 계보 (Lineage)는 산모 determinants ^5,6의 상속에 의해 초기 개발에 지정됩니다. 따라서 germline의 모자이크 만들기의 첫 번째 도전은 기증자의 배아에 원시 배아 세포 (PGCs)를 식별합니다. midblastula 단계에서 PGCs 그렇게 혈통 - 표시 기.......

재료

시약 :이 절차에 사용되는 시약의 많은 조리법이에서 전체 온라인에서 사용할 수 있습니다 Zebrafish 도서에서 발견되는 http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html . 조리법은 생선 물, 엠브료 매체로의 준비와 항생제, dechorionating, 형광등 dextrans에 대한 pronase 및 메틸 셀룰로스없이이 제공됩니다.