동물 세럼 - 무료 인간 줄기 세포 배양을위한 효율적인 보충으로 풀링 인간 혈소판 Lysate (pHPL)의 준비

요약

인간의 혈소판 lysate 성장 요인 풍부한 소스와 세포 배양에서 강력한 보충이다. 이 프로토콜은, 혈소판 풍부 혈장부터 몇 동결 - 해동 사이클을 수행하고 혈소판 조각을 파괴하여 인간의 혈소판 lysate의 큰 수영장을 준비하는 과정을 보여줍니다.

초록

혈소판 유래 성장 요소가 효율적으로 세포 증식을 자극하는 표시되었습니다

프로토콜

1. 시작 물질

cytapheresis으로 준비하거나 버피 외투에서 유래 혈소판 풍부 혈장 (PRP) 단위로 시작합니다.

2. 불임 검사

불임에 대한 연결된 작은 가방 (박스터)에 볼륨을 전송하여 각 PRP 단위 20 ML의 샘플을 확인하십시오. 용접이 가방의 연결을 끊습니다.

3. PRP 단위 동결

즉시 준비 후 ° C 원본 저장소 가방에서 추가 조작없이 최소한 -20 PRP 단위를 동결.

4. HPL 단위의 해동

세균 검사 부정하는 경우, 지금 37 ° C (물 목욕) 얼음 혈전이 사라질 때까지에서 HPL 단위라는 인간의 혈소판 lysate 단위를, 해동. HPL을 따뜻하게하지 마십시오.

5. HPL 단위 풀링

표준 제품을 준비 한 혈소판 lysate 풀장에 최소한 10-15 해동 HPL 단위를 가져가라. 풀링 더블 가방 (MacoPharma)에....

토론

일부 지역에서는 혈소판 풍부 혈장 (PRP)는 버피 - 코팅이 달리 혈액 검사 기부 (그림 1)에서 포장 적혈구 세포 생산의 낭비되는 제품에서 구할 수 있습니다. 성장 요인의 가용성을 집중 오래된 혈소판에서와 같이 최적 PRP는 pHPL의 더 준비를 위해 즉시 사용되는 혈소판 저장 병변 및 저하 ²⁰ 인해 줄어들 수 있습니다. 그것은 더 ABH 항원과 isoagglutinins 가능한 영향을 피하기 위해 혈액 AB 그룹의 플라즈마와 혈액 그룹 O의 혈소판과 일치하여 PRP를 생성하는 것이 좋습니다. 지금까지 세포 배양은 대부분 xenoimmunization ²¹ 알려진 미지의 병원균의 전염의 위험을지지 태아 소 혈청 (FBS)을 사용하고 있습니다. 이러한 autologous 혈청이나 혈청 무료 미디어와 같은 대안은 아직 많은 응용 프로그램에서 FBS 교체에 성공하지 않았다. 이전 연구에서 ²² 우리는 셀 전파에 pHPL 높은 효율을 공개 mesenchymal strom.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이중 백 (2 x 3.5L)	MacoPharma	VDL 8000XQ	원래 복수 천자용
50 mL Falcon 튜브	Falcon BD	2098
50 mL 스트리펫 (Stripettes)	Costar	4501
혈장 백 (600mL)	Baxter Internationl Inc.	R4R2021
멸균 튜브 웰더 (Tubing welder)	Terumo Medical Corp.	TSCD-II
접합 장비 (Welding equipment)	Fresenius Kabi	Compo Seal
항온수조 (Water bath)
멸균 가위
클램프
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