microfluidic 아일릿 perifusion 장치가 여러 아일 레츠와 칼슘 유입과 mitochondrial 잠재적인 변화 동시 형광 이미지의 역동적인 인슐린 분비의 평가를 위해 개발되었습니다.
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방법 논문
Microfluidic Perifusion 장치 내에서 멀티 파라메 트릭 아일릿 Perifusion 시스템
이 논문에서
요약
초록
microfluidic 아일릿 perifusion 장치가 여러 아일 레츠와 칼슘 유입과 mitochondrial 잠재적인 변화 동시 형광 이미지의 역동적인 인슐린 분비의 평가를 위해 개발되었습니다. 이 장치는 세 계층으로 구성되어 있습니다 : 첫 번째 레이어는 아일 레츠의 노출 표면적을 흐름과 극대화에 노출된 상태에서 아일 레츠를 무력화하는 데 도움이 microscale 웰스 (500 μm의 직경 150 μm의 깊이)의 배열을 포함, 두 번째 레이어는 원형을 포함 perifusion 챔버 (깊이 3mm, 7mm 직경) 및 세 번째 계층은 입구 - 혼합 채널을 포함하는 팬들 아웃하기 전에 최적화에 대한 perifusion 챔버에 주입 (폭 2mm, 길이 19mm, 높이 500 μm의) 혼합 효율 전에 perifusion 챔버를 입력합니다. 선형, 종 모양 등 다양한 포도당 그라디언트, 그리고 광장 형태의 생성도 microfluidic perifusion 네트워크에 만들 수 있으며, 증명합니다.
프로토콜
3 층 microfluidic의 perifusion 장치의 A.의 Microfabrication
하단 그럼 마스터 프로토콜 (150 μm의 깊은 우물)
- 필요한 경우 면도날을 사용하여 웨이퍼를 청소합니다. 아세톤, 메탄올과 IPA로 닦으십시오. 30 S. 50 왓츠에서 플라즈마 처리를 수행
- 스핀 SU8 - 100 @ 2000 RPM. [1 단계 : 500 RPM, 10 S, 100 RPM / s의 2 단계 : 2000 RPM, 30 S, 300 RPM / S].
[참고 : SU8 스피닝 후 핀셋으로 웨이퍼를 보유하지] - 소프트 베이킹 65 웨이퍼 ° C 20 분 및 95 °에서 50 분 C.
- 웨이퍼는 원하는 마스크를 통해 자외선에 노출됩니다. 150 μm의 높이에 대한 선량 650 MJ / cm 2입니다.
- 포스트 노출은 65에서 웨이퍼를 구워 ° 1 분 및 95에서 C ° 12 분 C.
- 15 분 SU8 개발자의 웨이퍼를 개발.
Microchannel 마스터 프로토콜 (500 μm의 깊은 우물)
- 필요한 경우 면도날을 사용하여 웨이퍼를 ....
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토론
전통 아일릿 perifusion 시스템 (macroscale 및 microscale) 설정 및 디자인, 높은 기술적 요구 사항과 시스템의 사용자 규정된 화학 그라디언트를 만들 어려움 복잡 등 일부 제한이 있습니다. 여기에서 설명한 microfluidic perifusion 시스템 설계 및 제조의 간단한 기하학 이러한 한계를 극복. 더 중요한 것은,이 시스템은 아일릿 생리 연구를 수있는 유일한 도구로 제공하는 형광 이미징 접근 방식과 통합될 수 있습니다. 높은 신호 대 잡음 비율 이러한 형광 신호의 공간적 시간적 해상도 - 시연 시스템입니다. 현재 프로토 타입 장치도 하나의 칩에 여러 perifusion 설정을 보유하고 광범위한 애플 리케이션을 위해 microenvironments의 다른 유형을 제공할 수 있습니다.
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감사의 글
이 작품은 Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) 호세 Oberholzer하고, 시카고 당뇨병 프로젝트 AAUW 국제 친교에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 60ml 주사기 | BD Biosciences | ||
| Fura-2 형광 염료 | Molecular Probes, Life Technologies | ||
| Rhodamine123 형광 염료 | Molecular Probes, Life Technologies | ||
| 포도당 | Sigma-Aldrich | ||
| 소 혈청 알부민(Bovine Serum Albumin) | Sigma-Aldrich | ||
| 30" 실리콘 튜브 | Cole-Parmer | 1/16 x 1/8in | |
| 1.5ml Eppendorf 튜브 | Fisher Scientific | ||
| Y-커넥터 | Cole-Parmer | 1/16” & 4mm | |
| 주사기 커넥터 | Cole-Parmer | female luer plug 1/16” | |
| 직선 커넥터 | Cole-Parmer | 1/16” | |
| 엘보우 커넥터 | Cole-Parmer | 1/16” | |
| Havard 주사기 펌프 | Harvard Apparatus | ||
| Perifusion 장치 | |||
| 가열판(Hot plate) | PMC | ||
| 온도계 | Omega Engineering, Inc. | ||
| 분획 수집기 | Gibson | ||
| 피펫기 | Fisher Scientific | ||
| 도립 형광 현미경 | Olympus Corporation | IX71 | |
| 전하결합소자(CCD) 카메라 | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
참고문헌
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
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재인쇄 및 허가
