방법 논문

조직학, 조직 형태 측정 및 분석을위한 Fluorochrome Undecalcified 본 준비

DOI:

10.3791/1707

⸱

2010년 1월 8일

 ,  ,  ,  , 
1Monash Immunology and Stem Cell Laboratories, Monash University, 2Anatomy and Developmental Biology, Monash University

이 논문에서

요약

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Undecalcified 뼈 조직학은 임상 및 연구 애플 리케이션의 다양한 중요 정보를 제공합니다. 그것은 기술적으로 특히 대형 표본과 도전이다. 이 동영상은 좋은 품질의 섹션을 제작하는 과정을 설명하고이를 극복하기 위해있는 기술적인 문제와 방법을 보여줍니다.

초록

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Undecalcified 뼈 조직학은 뼈의 마이크로 아키텍처를 보여줍니다. 그것은 뼈 회전율이나 뼈 형성과 재흡수에 대한 중요한 정보를 제공 뼈의 mineralized과 세포 구성 요소를 모두 보여줍니다. 이것은 임상 및 연구 애플 리케이션의 다양한 엄청난 중요성을했다. 그것은 아름다운 이미지 1을 산출 등 fluorochrome 평가 및 조직 형태 측정이 같은 기술을 허용합니다. Fluorochrome 분석 칼슘에 바인딩 형광 염료가 그 주어진 시간에 mineralization의 금액의 부량을 허용 특정 시점에서 주입하는 기술입니다. 조직 형태 측정은 현미경 수준에서 뼈 부량의 과정이다.

undecalcified 뼈 조직학을 수행하는 것은 기술적으로 특히 대형 표본과 도전이다. 그것은 조직학 임베디드 표준 파라핀에 사용되는 이들의 기술 변화가 필요합니다. 이 동영상은 좋은 품질의 섹션을 제작하는 과정을 설명하고이를 극복하기 위해있는 기술적인 문제와 방법을 보여줍니다. 표본 준비, 고정 및 처리는 종종 몇 주간 복용 밀도와 낮은 뼈의 투자율 상당히 긴 고정 및 처리 시간이 필요하기 때문에 그러나 다른 부드러운 조직과 유사한 방식으로, 함께 달성하고 있습니다. 퍼가기 그러한 메타 크릴 레이트 기반 수지로 뼛속까지 비슷하거나 동일한 경도와 밀도 지원 매체를 사용하여 달성하지만, 파라핀 침투와 포함 달리, 이것은 돌이킬 단계입니다. Sectioning 그러한 fluorochrome 분석과 같은 연구를위한 최적있는 두꺼운 섹션을 생산하는 연삭에 의해 얻을 수 있습니다. 이것은 가장 macrotome에 다이아몬드 블레이드를 사용하여 이루어진다. 또한, 얇은 부분은 빛을 현미경을 위해 생산 수 있으며 이것은 매우 날카로운 칼날과 슬레지 마이크로톰를 사용하여 이루어진다. 썰매 마이크로톰 큰 하드 블록에 필요한 추가적인 강도와 안정성을 제공합니다. 수지 포함된 섹션은 시연 아르 얼룩 다양한 물들일 수 있습니다.

프로토콜

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. 조직은 10 % 인산을 포함하는 밀봉된 컨테이너가 포르말린 용액 3 버퍼에 저장됩니다. fluorochrome 분석 fluorochromes가 빛을 구분으로 수행할 수있다면, 빛을 최소한의 노출을 보장합니다.
  2. 필요하게 될 조직의 어느 방향 수립.
  3. 크기로 시편을, 트림 올바른 방향으로, 밴드를 사용하여 보았다. 안전 보장 조치을 준수하고 있습니다. 표본은 다음 불투명 용기에 위치의 볼륨 충분한 고정을 달성하기 위해 약 10 배 정도 표본의 크기가되어야합니다. 표본은 포르말린 용액의 크기에 따라 한 사이에 두 주간의 총 유지됩니다. 이것은 테스트 및 최적화 목적으로 컨트롤 조직을 사용하여 제안합니다.
  4. 조직이 포함 금형에 맞는 선택하고 70 % 에탄올을 포함하고있는 밀폐된 불투명 용기에 조직을 놓으십시오.
  5. 빛과 지속적인 동요에 따라 차폐 에탄올의 농도를 오름차순으로 조직을 처리합니다.
    1. 70% 에탄올 일주
    2. 80% 에탄올 일주
    3. 90% 에탄올 일주
    4. 백퍼센트 에탄올 일주
  6. 조직은 다음에 다시 빛으로부터 지속적인 동요에 따라 차폐, 1 주일 butanol에서 지워집니다.
  7. 수지와 뼈 ....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

감사의 글

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

저자는 그녀의 실험실 전문 수지 퍼가기와 MS Stephania 무덤에 그녀 전문 숄 수 코넬의 도움을 인정하고 싶습니다. 저자는 자신의 조언을 교수 프랭크 Kandziora 및 박사 마리 앤 Polboth 감사하고 싶습니다.

....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재료

용매 :

  • 일반 10 % 포르말린, 에탄올, 크실렌 및 Butanol 산성을 버퍼
    모든 조직학 등급, 유황 무료입니다.
    Grale 과학 PTY 주식 회사
    http://www.grale.com.au
마울즈 :
  • 멀리 껍질, 플라스틱 금형
    Grale 과학
슬라이드 : 수지 : 얼룩
(Grale 과학에서 시약)

골드너의 Trichrome는 얼룩

1. Weigert의 철 hemotoxylin (DeGroat)

A) Hemotoxylin 솔루션
Hemotoxylin 1g
절대 알콜 100mL
B) 이런 솔루션
30% 수성 산화철 염화물 4mL
염산 (집중) 1mL
증류수 95mL

필터링과 같은 hemotoxylin의 볼륨을 바로 전에 얼룩은 사용에 추가됩니다.

2. 개양귀비빛의 - fuchsin - azophloxin 주식 솔루션

A) 개양귀비빛의 드 xylidine 솔루션
개양귀비빛의 데 xylidine 0.75g
산성 fuchsion 0.25g
아세트산 1mL
믹스, 그리고 추가 증류수 (100mL)
B) azophloxin 솔루션
Azophloxin 0.5g
초산 0.6mL
믹스, 그리고 추가 증류수 (100mL)
C) 최종 얼룩 솔루션을 작동
개양귀비빛의 - fuchsin 솔루션 5 - 10mL
Azophloxin 2mL
0.2 % 초산 용액 88mL

3. 라이트 그린 솔루션

연두빛 1g
초산 1mL
믹스, 그리고 증류수를 (500mL) 추가

4. Phophomolybdic 산성 - 오렌지 G 솔루션

Phosphomolybdic 수 소산 3g
오렌지 G 2g
증류수 500mL에 용해의와 크리스탈 티몰를 추가합니다.

본 K​​ossa는 스테인

1퍼센트 수성 실버 질산
2.5 %의 나트륨 thiosulfate
1퍼센트 safranin O

Alcian 파란색 얼룩

Alcian 블루 8GX 1g
3퍼센트 아세트산 용액 100mL

Hemotoxylin과 Eosin는 얼룩

A) 해리스의 hemotoxylin
Hemotoxylin 2.5G
절대 알코올 25mL
칼륨 알룸 50g
증류수 500mL
mercuric 산화물 1.25g OR
나트륨 iodate 0.5g
빙초산 20mL
B) Eosin 솔루션
상업 생산 Eosin가 사용되었습니다.

모든 얼룩 염색의 분말은 귀르 염료 분말입니다.
모든 시약은 분석 시약, 그리고하지 랩 시약

Fluorochromes


제조 업체 		Fluorochrome 카탈로그 번호
시그마 - 알드리치, 시드니 Calcein 그린 C0875
시그마 - 알드리치, 시드니 알리 자린 Complexone A3882
인터 베트 오스트 레일 리아, 빅토리아 Oxytetracycline
(선반 항균 약물 할인) 		Tradename; Engemycin 100

참고문헌

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kerr, J. Atlas of Functional Histology. , Harcourt Publishing. Melbourne, Australia. 164-168 (2000).
  2. Parfitt, A. M. Bone histomorphometry: standardization of nomenclature, symbols, and units. Report of the ASBMR Histomorphometry Nomenclature Committee. J Bone Miner R....

액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.

재인쇄 및 허가

이 JoVE 논문의 텍스트 또는 그림 재사용 허가 요청

허가 요청

태그

관련 논문