하와이 밥테일 오징어에서 Hemocytes 구하기 Euprymna scolopes와 공생이 아닌 공생 박테리아들의 준수를 관찰

요약

이 동영상은 하와이 밥테일 오징어에서 hemocytes (혈액 세포)을 구하는 방법을 보여줍니다 것입니다 Euprymna scolopes 세포 생물학 및 세균 유착 assays에 사용하기 위해. Hemocytes은 형광 염료와 스테인드 및 GFP - 라벨 박테리아에 노출됩니다.

초록

유익한 세균과 호스트 사이의 분자 신호를 중재에 면역 체계의 역할에 관한 연구, 최근에 그들의 microbiota와 eukaryotes의 공동 진화에 대한 우리의 이해에 중요한 기여를 만들었습니다. 하와이 밥테일 오징어 사이의 공생 협회,

프로토콜

1. 0.22 μm의 필터 살균 인공 해수 500 MLS (; 염도 35 PPT F​​SW)를 준비합니다. 0.22 μm의 미크론 필터를 통해 필터 인공 또는 자연 해수는 입자와 세균을 제거합니다.
2. FSW의 에탄올의 2 % 용액에 배치하여 한 성인 하와이 밥테일 오징어 (Euprymna scolopes)을 마취. 약 10 분 동안 마취에서 동물을 놓으십시오. 오징어 수영을 중지하고 적극적으로 터치에 응답하지 않습니다. 계속 호흡, 맨틀의 움직임에 의해 표시하고, chromatophore 활동은 계속 관찰하여야한다.
3. 표준 왁스 절개 트레이에 직면 복부 측면과 오징어를 넣으십시오. FSW 2 %의 에탄올을 포함하는으로 동물 잠수함.
4. 하나의 표준 200 μl 피펫 팁을 사용하여 깔때기와 두 눈 사이에있는 주요 두부 혈관을 폭로 맨틀 다시 가져옵니다.
5. 26.5 - 게이지 바늘, 바늘 두개의 혈관과 hemolymph의 50-100 μl 사이의 철회와 살균 한 ML의 주사기를 사용하여. 얼음 멸균 1.5 ML 튜브의 hemolymph를 놓습니다.
   참고 : 동물 기증​​자 여러 번 역할을한다면, 오직 주어진 시간에 hemolymph의 10-20 μl를 철회. 일반 해수 탱크에 동물을 반환합니다. 동물은 30 분 이내에 회복됩니다.
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토론

유익한 세균과 호스트 사이의 분자 신호를 중재에 면역 체계의 역할에 관한 연구, 최근에 그들의 microbiota와 eukaryotes의 공동 진화에 대한 우리의 이해에 중요한 기여를 만들었습니다. 오징어 / 비브리오 시스템은이 분야 ^2,3,5,6,8의 근본적 질문에 답변을 취급하기 쉬운 모델 시스템으로 자신을 증명되었습니다. 오징어 Euprymna scolopes의 가벼운 기관은 발광 박테리아 비브리오 fischeri들에 의해 독점적으로 식민지를 허용합니다. 조직 그 집에는 박테리아가 해수와 접촉에 남아 있기 때문에, 오징어는 특정 공생을 육성뿐만 아니라 다른 박테리아를 제외 계속해야합니다. 계속 연구는 대식 세포와 같은 hemocytes 가능성이 설립이 협회 ^1,4,7의 유지에 중요한 역할을하는 것으로 나타났습있다. 오징어 호스트는 적응 면역이 협회에서 발견되는 놀라운 특이성은 타고난 면역 시스템을 통해 전체 또는 부분적으로 중재되어야 부족하기 때문에........

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Lab-Tek 챔버형 #1.0 붕규산 유리 커버글라스 시스템 (8-챔버)	Thermo Fisher Scientific, Inc.	155411
26.5 G 1ml 라텍스 프리 인슐린 주사기	BD Biosciences	C34551
Cell Tracker Orange	Invitrogen	C34551
SteREO Discovery V20 현미경	Carl Zeiss, Inc.
SP2 공초점 현미경	Leica Microsystems