에어웨이 저항 측정 및 마우스에 Bronchoalveolar 세척 유체 샘플링에 대한 가역, 비침습 방법

요약

쥐 호흡 생리학과기도 염증 세포의 샘플링의 반복 측정이 바람직하지만, 일반적으로 가능하지 않습니다. 여기 구두기도 염증 세포의기도 기능 항 진성과 샘플링의 반복 측정을 허용 쥐를 intubating에 대한 반복 방법을 설명합니다.

초록

기도 기능 항 진성 (AHR) 측정과 bronchoalveolar 세척 (BAL) 유체 샘플링 실험 천식 모델에 필수적인,하지만 같은 동물에서 같은 측정을 얻기 위해 반복 절차는 일반적으로 가능하지 않습니다. 여기, 우리는 생쥐에서 AHR 및 bronchoalveolar 세척 유체 샘플 반복 측정을 얻기위한 프로토콜을 보여줍니다. 생쥐는 치료 효능이 알레르기 항원이나 사기와 십사일 동안 intranasally 일곱 번 도전했다. 초기 도전하기 전에, 각 비강 도전 다음과 같은 24 시간 이내에 같은 동물 구두 intubated와 기계 환기, anesthetized했다. 가짜와 알레르기 항원 - 도전 동물 사이의 아세틸콜린 (이크) 염화의 정맥 복용량을 늘려 유도 호흡기 시스템 저항 (RRS)의 선량 반응 곡선을 비교하여 평가 AHR은, 결정됩니다. 기도 세포의 차동 열거를 수행 될 수 있도록 그 후 같은 삽관법를 통해, 왼쪽 폐을 lavaged되었습니다. 이러한 연구는 AHR 및 BAL 유체 컬렉션의 반복 측정이 같은 동물에서 가능한 것을 공개하고 최대한의기도 hyperresponsiveness과기도 eosinophilia는 알레르기 항원의 도전을 시작의 70~10일 이내에 달성됩니다. 이 소설의 기술은 크게 세로 실험에 필요한 생쥐의 수를 줄이고 다양한 설치류 종, 질병 모델과기도 생리학 장비에 적용됩니다.

프로토콜

알레르기 항원의 도전 :

1. C57BL / 6 마​​우스, 연령 4~8주은 깊은 전신 마취를 달성하는 10 분 동안 산소 증기 혼합물의 3.2 % isoflurane과 정화의 플렉시 글라스 밀폐 챔버에 anesthetized 있습니다.
2. 비강 알레르기 항원의 어려움 (45μL OVA (22.5 μg)과 PBS의 7μL A. Oryzae (7 μg)가) 7 연패 응용 프로그램의 총, 목요일과 일요일, 매주 화요일, 관리하고 있습니다.

마취 :

3. 이전 각 알레르기 항원의 도전, 그리고 7 도전에 따라, 마우스는 전에 빛을 제외 소켓에 배치하기 위해, 48 MG / kg etomidate (2 MG / ML)의 intraperitoneal 주사를 관리하고 있습니다.
4. 관찰할 신경 반응의 부족이 뒷다리 발톱 (5-10 분)을 압력의 신청에 따라 감지 때까지 제목이 소켓에 남아 있습니다.

삽관법 :

5. ~ 37 ° C 바디 코어 온도, 저체온증을 방지하기 위해 절차를 통해 주제에 집중해야의 유지를 보장하기 위해 거리를 유지 복사열 램프. 직장 온도계 상관없이 ....

토론

천식의 연구 및 기타 다양한기도 폐쇄 질환은 생명 의학 연구의 활성화 및 확장 필드를 구성합니다. 천식 관련 실험 연구의 중요한 요소는 다양한 조건 하에서기도 크기의 변화를 측정하는 능력이다. 도발적인 도전, 천식과 관련된 폐 질환의 정식 기능과기도 칭했다기도 hyperresponsiveness의 속성에 대한 응답으로 과도한기도 축소는, 호흡과 죽음 등 다른 증상의 곤란에 이르는 임상 상당한 공격의 주요 구성 요소입니다.

본 연구에서는 소설 방법은기도 hyperresponsiveness을 측정하기 위해 개발된 동시에 마우스의기도에 염증 세포를 모집 샘플했다. 우리는기도 hyperresponsiveness 즉시 첫 번째, 혹은 15 일 동안 주어진 과제 7 연패 알레르기 항원의 처음 몇 이후로 유도 아니라는 것을 보여줍니다. 오히려기도 hyperresponsiveness 겨우 6 과제 (12 일) 후 (위장 알레르기 항원 도전 동물에 비해) 매우 중요한지고, 진보적인 알레르기.......

재료

에어웨이 생리 측정 소프트웨어 (Rescomp)은 사용자 준비 (; 415-519-4371 밀레니엄 프리미어 그룹)되었습니다.
데이터는 펜티엄 III CPU (인텔, 주식 산타 클라라, CA)와 디지털 신호 변환기 17 핀 아날로그 (내쇼날 인 스트 루먼트, # PC - LPM16)가 장착된 Windows XP를 실행하는 PC 워크 스테이션을 사용하여 분석했다.
Buxco 주식 윌밍턴, 노스캐롤라이나에서, 작은 동물기도 생리학 워크 스테이션은 사용자 정의 상용 압력 트랜스 듀서 (부분 # TRD5700 및 TRD4510), preamp 모듈 (부품 # MAX2270), 섀시 (부품 # MAX1320을 사용하여 (밀레니엄 프리미어 그룹) 조립했습니다 ) 및 맞춤 작은 동물 plethysmograph.
광원에 연결된 0.5mm 외경 광섬유 스레드 (콜 파머 조명기, 41722 시리즈)
환풍기 (하버드 마우스 장치 환풍기, # 687)
10mm, 27ga 바늘 (BD Biosciences, 고양이. 안돼. 309602)
가열 램프
1 ML 주사기 (BD Biosciences, 고양이. 안돼. 305109)
4 클램프 (포니 3200 스프링 클램프)
삽관법 가이드 0.5 mm 외부 와이어
Hemacytometer
Superfrost / 플러스 현미경 슬라이드 (피셔 고양이. 아니. 12-550-15)
쉔던 필터 카드 (써모 고양이. 아니. 5,991,022)
차동 세포 슬라이드 얼룩 (피셔 고양이. 아니. 122911)
라이트 현미경 (Leica)
Cytospin 3 (쉔던)
20가, 1.25 인치 ProtectIV 정맥 카테터 (스미스 의료)
0.5 mm 폴리머 광학 섬유 (에드먼드 광학 # NT02 - 532).