odorants에 후각 감각 뉴런의 Electrophysiological 반응은 단일 sensillum 레코딩을 사용하는 곤충에서 측정할 수 있습니다. 이 비디오를 문서에서 우리는 식초 파리의 안테나에서 단일 sensillum 레코딩을 수행하는 방법을 보여줍니다 것입니다 ( Drosophila melanogaster)과 말라리아 모기의 상악 palps ( 아노 펠 레스 gambiae).
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방법 논문
곤충의 단일 Sensillum 레코딩 Drosophila melanogaster과 아노 펠 레스 gambiae
이 논문에서
요약
초록
냄새의 감각은 음식, 짝을, 육식 동물, 그리고 산란 사이트 3 찾을 수 곤충을 위해 필수적입니다. 곤충 후각 감각 뉴런은 (OSNs) 후각 기관의 표면을 커버 sensilla라는 감각 머리카락에 동봉됩니다. 각 sensillum의 표면은이를 통해 odorants 통과하고 주어진 sensillum 안에 보관되어 OSNs의 감각 dendrites을 bathes sensillum 림프라는 액체에 용해, 작은 모공으로 덮여있다. OSN의 dendrites은 odorant 수용체 (또는) 단백질을 표현, 어떤 냄새 게이 티드 이온 채널 4, 5와 같은 곤충 기능 인치 ORs 중 증가와 함께 odorants의 상호 작용 또는 OSN의 기초 발사 속도를 감소시킵니다. 행동 잠재력의 형태로의 연결이 활동은 품질, 강도, 그리고 odorant 6, 7의 시간적 특성의 첫 표현을 구체화.
이러한 감각 머리카락에 쉽게 접근할 수 감안할 때, 그것은 참조 전극은 곤충의 눈 또는 인체의 림프에 배치하는 동안, sensillum 림프에 기록 전극을 도입하여 단일 OSNs에서 세포외 녹음을 수행할 수 있습니다. Drosophila, 하나, 넷 OSNs 사이 sensilla 집에 있지만, 각 OSN은 일반적으로 특성 스파이크 진폭을 표시합니다. 스파이크 정렬 기법은 개별 OSNs로 급상승 답변을 할당하는 것이 가능합니다. 이 단일 sensillum 기록 (SSR) 기술은 sensillum 림프와 OSNs 1, 2, 8 수용체의 활동에 의해 생성되는 전기 스파이크로 참조 전극 사이의 전위의 차이를 모니터링합니다. odorant에 대응 스파이크의 숫자의 변화는 곤충의 코딩 냄새의 세포 기초를 나타냅니다. 여기서 우리는 현재 Drosophila melanogaster와 아노 펠 레스 gambiae에서 SSR을 수행하기 위해 우리가 실험실에서 사용되는 준비 방법을 설명하고, sensillum 특정 방식으로 odorants에 의해 유도 대표 흔적을 보여줍니다.
프로토콜
1. 악취 dilutions
- 대부분의 odorants는 파라핀 기름에 용해됩니다. 그러나, DMSO 또는 에탄올은 또한 특정 냄새에 대한 대체 용매로 사용할 수 있습니다. 유리 튜브의 순수한 odorants에서 :; 적절한 dilutions을 (V V 볼륨 예 1시 10분 볼륨) 준비합니다. 대부분의 악취 dilutions는 상온에서 안정하지만, 매우 휘발성 화합물에 대한 그것은 주간 단위로 작업 dilutions을하는 것이 좋습니다. 각 sensillum 다른 농도 범위 내에서 서로 다른 냄새에 응답합니다. Drosophila에 대한 유용한 룩업 테이블에 대해 주어진 sensillum와 함께 사용하기위한 적절한 농도는 6, 7에서 찾을 수 있습니다.
Drosophila과 아노 펠 레스에 대한 (파라핀 오일에 V 10 -7 V) 1 - octen - 3 - OL : 비디오 실험을 위해, 우리는 용매 컨트롤과 메틸 아세테이트로 파라핀 오일을 사용 (파라핀 오일에 V 10 -6 V) 각각 기록. - 가위를 사용하여, 그들은 파스퇴르 pipettes 안에 들어갈 것이라는 X 5cm 스트립 있도록 3mm로 크로마 토그래피 종이를 잘라.
- 피펫....
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토론
후각 단서는 음식 소스, 잠재적인 친구, 그리고 포식자을 식별하는 생물에 의해 사용됩니다. 후각 감각 뉴런 (OSNs)은 외부 자극과 정보가 추가로 처리하는 두뇌의 높은 중심 사이의 첫 번째 릴레이 센터됩니다. Drosophila melanogaster와 아노 펠 레스 gambiae에서 OSNs에 쉽게 액세스할 수 있으며 악취 퍼프에 의해 자극을 동시에 전기적 활동은 모니터링할 수 있습니다.
단일 sensillum 기록 (SSR) 기술이 널리 OSNs에서 기록하고 odorants 6, 7의 많은 자신의 전기 반응을 연구하는 데 사용되었습니다이 동영상에 설명했다. 후각 수용체 (ORs) 6, 11, Drosophila 안테나 9, 12, 13에서 특정 위치로 ORs의 매핑의 deorphanization은 최초로, SSR 기술에게 생체내 특정 ORs의 electrophysi.......
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 | |
|---|---|---|---|---|
| 파라핀 오일 | 취기 | Fluka | 76235 | |
| 고순도 취기 물질 (>98%) | 취기 | Sigma-Aldrich | Methyl acetate #296996 1-octen-3-ol #74950 | |
| 거름종이 스트립 | 취기 | Fisher Scientific | 05-714-1 | 크로마토그래피 용지 |
| 커넥터 | 취기 | Cole-Parmer | EW-06365-40 | 1/16x1/8" |
| 유리 바이알 | 취기 | Agilent Technologies | 5182-0556 | |
| 공기 라인 플라스틱 튜브 | 취기 전달 | Python Products | 500PAL | |
| 세롤로지컬 피펫 1개 | 취기 전달 | Corning | 4101 | 10 mL |
| 플라스틱 튜브 | 취기 전달 | Cole-Parmer | EW-06418-0 | 0.050"x0.090"OD |
| 일회용 붕규산 유리 파스퇴르 피펫 | 취기 전달 | Fisher Scientific | 13-678-20A | 5-3/4 inches |
| 프로그램 가능 자극 제어기 | 취기 전달 | Syntech | CS-55 | |
| 진동 방지 테이블 | 전기생리학 장비 | TMC | 63533 | 36”Wx30”Dx29”H |
| 패러데이 케이지 | 전기생리학 장비 | TMC | MI8133303 | |
| 倒立 현미경 | 전기생리학 장비 | Nikon Instruments | E600FN ECLIPSE | 기록용 현미경 |
| 10x 및 100x 대물렌즈 | 전기생리학 장비 | Nikon Instruments | 10x Plan Fluor 100x L Plan | |
| 해부 현미경 | 전기생리학 장비 | Nikon Instruments | EZ645 | 전극 연마/곤충 표본 제작용 현미경 |
| 마그네틱 스탠드 | 전기생리학 장비 | Newport Corp. | MODEL 150 | |
| IDAC | 전기생리학 장비 | Syntech | IDAC-4 | |
| 데이터 수집 소프트웨어 | 전기생리학 장비 | Syntech | Autospike | |
| 매크로 조작기 1개 | 전기생리학 장비 | Narishige International | MN-151 | 조이스틱 조작기 기준 전극 위치 조정용 |
| 마이크로 조작기 1개 | 전기생리학 장비 | EXFO | PCS-6000 | 기록 전극 위치 조정용 |
| 악어 클립 | 전기생리학 장비 | Pomona | AL-B-12-0 | |
| 전기 케이블 | 전기생리학 장비 | Pomona | B-36-0 | 테스트 케이블 어셈블리 |
| 전극 홀더 2개 | 전기생리학 장비 | Syntech | N/A | 텅스텐 와이어 전극용 전극 홀더 (2개 세트) |
| AC 프로브 | 전기생리학 장비 | Syntech | N/A | 범용 싱글 엔디드 프로브 (10xAC) |
| 텅스텐 전극 | 전기생리학 장비 | Microprobes | M210 | 직선 텅스텐 로드, 0.005x3 |
| 수산화칼륨 | 전기생리학 장비 | Sigma-Aldrich | 221473 | |
| 주사기 | 전기생리학 장비 | BD Biosciences | 301625 | 20 mL |
| 전원 공급 장치 | 전기생리학 장비 | Wild Heerbrugg | 예: MTR32 | |
| 수직 풀러 | 곤충 표본 제작 | Narishige International | PB-7 | |
| 면도날 | 곤충 표본 제작 | VWR international | 55411-050 | |
| 치과용 왁스 | 곤충 표본 제작 | Patterson | 091-1503 | |
| 현미경 슬라이드 | 곤충 표본 제작 | Fisher Scientific | 12-550A | |
| 커버 글라스 | 곤충 표본 제작 | Fisher Scientific | 12-541A | 18X18 #1.5 |
| 폴리프로필렌 메쉬 | 곤충 표본 제작 | Small Parts, Inc. | CMP-0500-B | |
| 유리 전극 | 곤충 표본 제작 | Frederick Haer and Co. | 27-32-0-075 | 붕규산 모세관 튜브 1.5mm OD x 1.12mm ID x 75 mm |
| 양면 테이프 (3M) | 곤충 표본 제작 | 3M | MMM6652P3436 | 양면 테이프 (3M) |
| 포셉 | 곤충 표본 제작 | Fine Science Tools | 021x0053 | Dumont #5 미러 피니시 포셉 |
| 소형 플라스틱 컵 | 곤충 표본 제작 | VWR international | 89009-662 | 7 x 5.7 (23/4 x 21/4) |
| 전동 흡입기 | 곤충 표본 제작 | Gempler’s | RHM200 |
참고문헌
- Boeckh, J. Elektrophysiologische Untersuchungen an einzelnen Geruchsrezeptoren auf der Antenne des TotengrAbers (Necrophorus Coleoptera). Z. Vergl. Physiol. 46, 212-248 (1962).
- Schneider, D., Hecker, E.
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